凋亡抑制因子Livin在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

鄭佐柱 鄭雯雯 賀磊磊 鄭國(guó)有 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院二部泌尿外科，吉林 長(zhǎng)春 3003)

Livin 是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成員〔1～4〕，是一種重要的抗細(xì)胞凋亡因子，有抑制細(xì)胞凋亡的作用，在多種腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生有密切的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)探討Livin與膀胱癌的關(guān)系及Livin與膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期、腫瘤數(shù)目、復(fù)發(fā)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2005年1月至2006年6月我院泌尿外科52例膀胱移行細(xì)胞癌患者。選取標(biāo)準(zhǔn):無(wú)其他系統(tǒng)惡性腫瘤病史，經(jīng)病理初次確診且成功隨訪，術(shù)后使用絲裂霉素膀胱內(nèi)灌注輔助治療的患者。其中男37例，女15例，平均年齡60.4歲;病理分級(jí)采用3級(jí)法:G1級(jí)11例，G2級(jí)23例，G3級(jí)18例;臨床分期按TNM分期法:TiS～T123例，T2～T429例;單發(fā)28例，多發(fā)24例;隨訪5年，復(fù)發(fā)30例，未復(fù)發(fā)22例。對(duì)照組10例膀胱黏膜組織均采用活檢鉗取自行前列腺電切術(shù)患者的膀胱組織，且病理證實(shí)均為正常膀胱黏膜組織。

1.2 免疫組化 一抗為兔抗人多克隆抗體，步驟按試劑盒要求進(jìn)行，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性定位于胞質(zhì)，在高倍鏡視野下胞質(zhì)呈現(xiàn)淡黃色至棕褐色為著色陽(yáng)性。首先根據(jù)細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:無(wú)著色得0分，淺黃色得1分，棕黃色得2分，棕褐色得3分;然后隨機(jī)計(jì)數(shù)3個(gè)高倍鏡視野中染色陽(yáng)性細(xì)胞的百分比(取平均數(shù))，并根據(jù)陽(yáng)性百分比進(jìn)行評(píng)分:0不得分，1% ～10%得1分，11% ～40%得2分，41% ～70%得3分，＞70%得4分;免疫反應(yīng)陽(yáng)性評(píng)判標(biāo)準(zhǔn):著色強(qiáng)度得分與染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分乘積≥1分者為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 正常及膀胱移行細(xì)胞癌組織中Livin的表達(dá) 10例正常膀胱黏膜組織均無(wú)Livin的表達(dá);膀胱移行細(xì)胞癌組織中Livin表達(dá)陽(yáng)性者32例(61.5%);兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)圖1。

2.2 Livin在不同病理分級(jí)、臨床分期、不同腫瘤數(shù)目中的表達(dá)情況 G1級(jí)組織中Livin陽(yáng)性表達(dá)6例，陽(yáng)性率54.6%;G2級(jí)組織中Livin陽(yáng)性表達(dá)14例，陽(yáng)性率60.9%，G3級(jí)組織中Livin陽(yáng)性表達(dá)12例，陽(yáng)性率66.7%，Livin在不同病理分級(jí)組間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

TiS～T1期膀胱移行細(xì)胞癌組織中Livin陽(yáng)性表達(dá)13例，陽(yáng)性率56.5%;T2～T4期膀胱移行細(xì)胞癌組織中Livin陽(yáng)性表達(dá)19例，陽(yáng)性率65.5%，Livin在不同臨床分期組間表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

單發(fā)腫瘤患者中Livin陽(yáng)性表達(dá)17例，陽(yáng)性率60.7%;多發(fā)腫瘤患者中Livin陽(yáng)性表達(dá)15例，陽(yáng)性率62.5%，Livin表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌數(shù)目無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。

2.3 Livin表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系 52例患者中，有30例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率57.7%;其中Livin陽(yáng)性表達(dá)的32例患者中有24例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率75.0%，平均復(fù)發(fā)時(shí)間15.3個(gè)月;陰性表達(dá)的20例患者中有6例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率30.0%，平均復(fù)發(fā)時(shí)間30.7個(gè)月;兩組之間差異顯著(P＜0.05)，說(shuō)明Livin與膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)密切相關(guān)。

3 討論

腫瘤的發(fā)生是一個(gè)漸進(jìn)式的涉及多級(jí)反應(yīng)和突變的過(guò)程，涉及多種基因和基因以外的變化，尤其與癌基因的激活、抑癌基因失活、細(xì)胞凋亡抑制等密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過(guò)程，而凋亡過(guò)程的紊亂與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關(guān)系，如腫瘤、自身免疫性疾病等。Livin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的人類IAPs的新成員，存在同基因不同剪切的兩個(gè)異構(gòu)體，即Livinα和Livinβ，兩種異構(gòu)體差異微小，僅后者外顯子6缺失54 bp，但兩者的抗凋亡功能及組織表達(dá)譜均不同。Livin作為一種重要的抗細(xì)胞凋亡因子，能夠抑制細(xì)胞的凋亡，在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，且在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生有密切的關(guān)系，如消化系腫瘤、血液系腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、泌尿系腫瘤、黑色素瘤、乳腺癌等。

本研究顯示Livin在膀胱移行細(xì)胞癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為61.5%，而在正常組織中無(wú)表達(dá)，說(shuō)明Livin與膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，可能成為膀胱移行細(xì)胞癌早期診斷的一項(xiàng)指標(biāo)。研究結(jié)果還顯示Livin的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌的病理分級(jí)、臨床分期、腫瘤數(shù)目及是否多發(fā)無(wú)相關(guān)性，但從結(jié)果中可以看出TiS～T1期組織中及G1級(jí)組織中Livin表達(dá)的陽(yáng)性率均很高，這也說(shuō)明Livin作為早期診斷膀胱移行細(xì)胞癌的一項(xiàng)指標(biāo)的可行性，這與近年來(lái)國(guó)內(nèi)外大部分研究結(jié)果一致〔5～7〕。膀胱癌是泌尿外科最常見(jiàn)的惡性腫瘤，而且術(shù)后復(fù)發(fā)率高，凡采用膀胱部分切除術(shù)的患者，術(shù)后50%以上會(huì)在2年內(nèi)復(fù)發(fā)〔8〕。本研究表明Livin的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌的復(fù)發(fā)密切相關(guān)。這與Liu等〔5〕、祝興旺等〔6〕的研究結(jié)果基本相同。本研究采用隨訪的方法，所得的結(jié)果更能直接地反映出Livin的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的關(guān)系;同時(shí)提示Livin可以作為一個(gè)預(yù)測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的敏感指標(biāo)。高江原等〔9〕的研究發(fā)現(xiàn)檢測(cè)泌尿系惡性腫瘤患者外周血Livin的表達(dá)，其敏感性和特異性較高，可作為檢測(cè)泌尿系惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的靶基因，指導(dǎo)其治療和預(yù)后。易正金等〔10〕的研究發(fā)現(xiàn)檢測(cè)膀胱癌患者尿液脫落細(xì)胞Livin的表達(dá)，可作為臨床篩選膀胱癌的理想指標(biāo);提示行尿脫落細(xì)胞學(xué)與外周血Livin的檢測(cè)，可以作為膀胱癌早期診斷、轉(zhuǎn)移的輔助手段，這必將會(huì)有很大的發(fā)展前景。

鑒于Livin與膀胱癌的密切關(guān)系，可以將Livin基因作為膀胱癌的分子治療靶點(diǎn)，這必將會(huì)把膀胱癌的治療帶入一個(gè)全新時(shí)期。

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