磷脂酶Cε1蛋白在不同部位胃癌細(xì)胞中的表達(dá)

張 偉，栗 粟，柴軍輝，康海涵，張占東，姬社青，花亞偉

(1.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院普外科 河南鄭州 450008;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科 河南鄭州 450052)

胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，我國(guó)每年胃癌發(fā)病率約為60/10萬(wàn)，死亡率約為30/10萬(wàn)，位居所有惡性腫瘤死亡第1位，不同部位的胃癌其預(yù)后具有差異性，賁門癌預(yù)后較胃竇癌差，原因尚不明確［1］。PLCE1是PLC基因編碼的一種正向同源蛋白，由Kelly等利用新桿線蟲(chóng)PLC210序列克隆出，是磷脂酰肌醇信號(hào)通道中的關(guān)鍵酶［2］，近來(lái)研究表明PLCE1與胃癌、食管癌、結(jié)腸癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)觀察PLCE1在不同部位胃癌組織中的表達(dá)，探討PLCE1與胃癌生物學(xué)特征的關(guān)系，以研究其在胃癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2006年至2008年在鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的病人中選取，入選標(biāo)準(zhǔn):有完整的臨床、檢查及術(shù)后病理確診為腺癌，未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，所用胃癌患者手術(shù)前均未行任何化療和放療(術(shù)后病理分期按2010年第7版AJCC胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)確定)。入選者分組如下:賁門癌60例，胃竇癌60例。30例正常組織隨機(jī)取自胃鏡室，經(jīng)病理結(jié)果證實(shí)。

1.2 PLCE1檢測(cè) 所有標(biāo)本均為離體后2 h內(nèi)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度4 μm，連續(xù)切片2張。切片脫蠟后，于高溫pH9.0 EDTA抗原修復(fù)液中修復(fù)6 min，冷卻至室溫，以體積分?jǐn)?shù)3%H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，再經(jīng)一抗、二抗(均按100倍稀釋)作用后，DAB顯色并在光鏡下控色，蘇木精復(fù)染后脫水，中性樹(shù)膠封片。兔抗人PLCE1抗體購(gòu)自Abnova公司，Envision試劑盒購(gòu)自DAKO公司。用 PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 PLCE1主要在細(xì)胞漿膜表達(dá)，顯微鏡下陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)胞膜呈棕黃色，少量間質(zhì)細(xì)胞有表達(dá)。切片陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn):每例切片高倍鏡下隨機(jī)選5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占同類計(jì)數(shù)細(xì)胞百分比大于等于25%視為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件為 SPSS17.0，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩之間比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同部位胃癌組織及正常胃粘膜組織中PLCE1的表達(dá) 賁門癌組織、胃竇癌組織及正常胃粘膜組織中 PLCE1 表達(dá)存在差異(χ2=25.915，P ＜0.001)。賁門癌組織中PLCE1的陽(yáng)性表達(dá)率為73.3%(44/60)，高于胃竇癌組織的 51.7%(31/60)(χ2=6.009，P=0.014)，高于正常胃粘膜組織的 16.7%(5/30)(χ2=25.893，P ＜0.001)。胃竇癌組織表達(dá)率高于正常胃粘膜組織的表達(dá) (χ2=7.751，P=0.005)。見(jiàn)表1。

2.2 PLCE1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 賁門癌與胃竇癌組織PLCE1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和原發(fā)腫瘤侵潤(rùn)深度及組織學(xué)分級(jí)均有關(guān)(P＜0.05)，與性別、年齡均無(wú)關(guān) (P＞0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 分層比較賁門癌與胃竇癌PLCE1表達(dá)情況當(dāng)原發(fā)腫瘤未侵及外膜(T1+T2)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或組織學(xué)分級(jí)為G1和G2時(shí)，賁門癌與胃竇癌組織PLCE1表達(dá)無(wú)顯著性差異，當(dāng)原發(fā)腫瘤侵及外膜(T3+T4)、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或組織學(xué)分級(jí)為G3和G4時(shí)，賁門癌與胃竇癌組織PLCE1表達(dá)存在顯著性差異。見(jiàn)表3。

3 討論

臨床上發(fā)現(xiàn)賁門癌預(yù)后相對(duì)較差，根據(jù)流行病學(xué)資料，在食管癌高發(fā)區(qū)，賁門癌也屬于高發(fā)，在近年來(lái)食管癌現(xiàn)場(chǎng)干預(yù)的情況下，食管癌的發(fā)病率下降，而賁門癌的發(fā)病率上升，近端胃癌發(fā)病率較遠(yuǎn)端胃癌上升［3］。從世界范圍看，賁門腺癌的發(fā)病率以20%的速度逐年上升，是增長(zhǎng)最快的一種惡性腫瘤［4，5］。發(fā)病率的差異，提示賁門腺癌及胃竇部腺癌在發(fā)生機(jī)制上可能存在差異。

研究表明PLCE1參與Ras蛋白，Rho-家族即GTP酶等信號(hào)傳導(dǎo)通路，影響遺傳信息的表達(dá)［6-9］。據(jù)報(bào)道，PLCE1與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，Bourguignon等［10］針對(duì)HNSCC-HSC-3細(xì)胞系研究，認(rèn)為通過(guò)不同的途徑激活PLCE1，可通過(guò)影響其催化活性，引起細(xì)胞內(nèi)第二信使如蛋白激酶C和鈣離子的釋放及鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ上調(diào)，影響細(xì)胞骨架蛋-絲蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。Ou L等及 Ling研究［11，12］發(fā)現(xiàn)PLCEI基因可通過(guò)調(diào)控不同的酶如基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、bcl-2的表達(dá)及影響不同的的信號(hào)傳導(dǎo)通路(例如蛋白激酶Cα)，從而影響膀胱癌細(xì)胞的侵襲和增殖力;或者通過(guò)影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白而影響正常的細(xì)胞周期，參與到膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展。在其他研究中，研究者則發(fā)現(xiàn)PLCE1在結(jié)腸癌組織中較正常組織低表達(dá)，PLCE1 具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用［13，14］。王立東、Abnet及Hu H等［15-17］則運(yùn)用GWAS技術(shù)發(fā)現(xiàn)PLCE1基因?yàn)槭彻馨┑囊赘谢?，而其在食管癌的發(fā)生發(fā)展中的相關(guān)機(jī)制，尚不明確。

表2 PLCE1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

表3 分層比較賁門癌與胃竇癌PLCE1表達(dá)情況

在最近一個(gè)關(guān)于PLCE1單核苷酸多態(tài)性(SNP，rs2274223＞G)與胃腺癌的風(fēng)險(xiǎn)的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)中，研究人員發(fā)現(xiàn)PLCE1 mRNA的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織［18］。表明PLCE1基因是胃癌的易感基因，因此有必要進(jìn)一步研究PLCE1基因的功能，探討其在靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和蛋白表達(dá)的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PLCE1在賁門癌和胃竇癌組織中及正常胃粘膜組織的表達(dá)存在差異性，并發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、原發(fā)腫瘤浸潤(rùn)深度及分化程度均有關(guān)(P＜0.05)。提示PLCE1可能在賁門癌與胃竇癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中作用不同，這也與另外一項(xiàng)提示胃癌與PLCE1關(guān)聯(lián)性與解剖部位的不同有關(guān)的研究結(jié)果在某些方面一致［16］。這可能是由于賁門部與胃竇部所處的外環(huán)境不同，引起基因的表觀遺傳的不同，也可能是由于賁門部與胃竇部組織學(xué)組成不同，周圍其他的組織細(xì)胞所起的作用不同所致。分層分析發(fā)現(xiàn)賁門癌與胃竇癌組織PLCE1的表達(dá)的差異性與腫瘤的T分期、N分期及組織學(xué)分化程度有關(guān)，但還不清楚PLCE1在腫瘤進(jìn)展的不同階段的作用。因本實(shí)驗(yàn)病例較少，為回顧性分析，存在一定局限性，PLCE1在賁門癌和胃竇癌過(guò)度表達(dá)及表達(dá)的差異性是否影響腫瘤的發(fā)生及預(yù)后尚不明確，需搜集資料進(jìn)一步研究及詳細(xì)分析，希望為胃癌患者的早期診斷、個(gè)體化治療及預(yù)后判斷提供了新的方法和思路。

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