HPLC法測定不同產地黑丹皮中丹皮酚的含量

秦偉瀚，趙紀峰，陽 勇，羅維早，楊榮平

重慶市中藥研究院，重慶市 400065

牡丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清熱涼血、活血散瘀之功效［1］。根據其采收加工方法的不同，有黑丹皮和粉丹皮之分，刮皮去心曬干者，稱之為粉丹皮;抽心不刮皮曬干者則謂之黑丹皮［2-5］。粉丹皮為我國傳統(tǒng)藥用品種，主要在國內市場銷售并有少量出口。近年來，黑丹皮隨著國際市場需求的增加，大量遠銷日本、韓國、香港等國家和地區(qū)，僅山東省菏澤市每年的出口量就在3000噸左右。我們選擇丹皮酚作為指標性成分對5個主產地黑丹皮進行了含量測定。結果表明不同產地黑丹皮藥材中丹皮酚含量存在著較大差異。為今后進一步開發(fā)利用黑丹皮提供了科學參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

安捷倫1200型高效液相色譜儀，ChemStation化學工作站、VWD檢測器;KQ250DB型數(shù)控超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責任公司);AW-220型電子天平(島津公司)。

1.2 材料

藥材樣品分別購自于山東菏澤、陜西渭南、重慶墊江及長壽、安徽銅陵、南陵及河南洛陽5個省市的藥用牡丹生產基地、合作社及個體種植大戶，經本院中藥生藥研究所秦松云副研究員鑒定均為毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮。丹皮酚(批號0708-0506)，中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇(色譜純，SK Chemicals公司)，甲醇(分析純，重慶川東化工有限公司)，水為去離子水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:菲羅門 LunaC18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(45∶55);流速:1.0 mL/min;檢測波長:274 nm;進樣量:10 uL。對照品、供試品圖譜見圖1。

圖1 丹皮酚對照品(A)、黑丹皮供試品(B)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of paeonol for the standard(A)，sample of black cortex moutan(B)

2.2 對照品溶液制備

精密稱取丹皮酚對照品適量，加色譜甲醇制成每1 ml含0.0216 mg的溶液，作為對照品儲備液。

2.3 供試品溶液制備

取本品粗粉約0.3 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30 mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

取粗細均勻的陜西黑丹皮數(shù)段，平均切成兩段，其中一段用小刀刮皮，得皮及粉丹，另一段便為黑丹皮，三份樣品均按照上述方法制備。

2.4 線性關系考察

按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10、15 μL 進樣，測定其峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為 Y=4897.3X-8.9674(r=0.9999)。結果表明丹皮酚進樣量在 0.0432～0.324 ug范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.5 精密度實驗

精密吸取對照品溶液10 μL，按上述色譜條件連續(xù)進樣5次，測定。結果，RSD=0.043%(n=5);表明儀器精密度良好。

2.6 重復性實驗

取菏澤樣品5份，按“供試品溶液制備”項下方法制備供試品，進樣10 μL，測定。結果，RSD=0.06%;表明該方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取菏澤樣品一份，按“供試品溶液制備”項下方法制備供試品，分別在 0、2、4、6、8 h 進樣 10 μL，測定。結果，RSD=0.20%，表明供試品在8 h內穩(wěn)定。

2.8 加樣回收實驗

取已知含量的菏澤樣品5份，每份約0.15 g，精密稱定，分別加入相當于樣品含量的對照品(0.5 mg/mL)5 mL，按“供試品溶液制備”項下方法制備供試品，進樣10 μL，測定，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果Table 1 Recovery rate of samples

2.9 樣品測定

取重慶、陜西、河南、山東、安徽等地黑丹樣品，陜西黑丹所制備的粉丹及表皮樣品各一份，按“供試品溶液制備”項下方法制備供試品，測定峰面積，并計算含量;結果見表2、圖2。

表2 樣品含量測定結果Table 2 Content determination result of sample

圖2 表皮(A)、黑丹皮(B)及粉丹皮(C)比較圖Fig.2 Epidermis(A)，black cortex moutan(B)and pink cortex moutan(C)comparison chart

3 討論

含測結果表明:不同產地黑丹皮中丹皮酚含量有很大的差異，如重慶墊江樣品含量高達2.72%，安徽銅陵和南陵樣品含量均在2.00%以上，河南洛陽和山東菏澤樣品含量分別為1.96%、1.69%，而重慶長壽和陜西渭南樣品含量最低，均未達到藥典規(guī)定的丹皮酚含量要求。從表2可以看出:同一產地不同采收季節(jié)丹皮酚含量也有較大的差別，秋季樣品丹皮酚含量明顯高于春季樣品，如重慶墊江秋季樣品含量為2.72%，春季樣品為1.15%;安徽銅陵秋季樣品為2.26%，春季樣品為1.08%。由此可見，丹皮酚含量的高低與產地環(huán)境、藥材采收季節(jié)具有特定的相關性。

通過對來自陜西渭南不同制法所得的粉丹皮、黑丹皮及表皮三種樣品中丹皮酚含測比較:表皮＞黑丹皮＞粉丹皮。丹皮酚是評價牡丹皮藥材質量優(yōu)劣的重要指標，以上結果表明黑丹皮的質量應該優(yōu)于粉丹皮，臨床療效也應該會更好，且同等規(guī)格黑丹皮的市場價格還較粉丹低［6］，而國內藥房卻沿用粉丹至今。從比較圖2中可以看出，在波長274 nm下，表皮中的某些成分與黑、粉丹皮也存在較大差異;是由于表皮入藥會影響臨床療效，還是去皮后更容易通過斷面、色澤來判斷其質量，有待于進一步的研究和探討。

1 State Pharmacopoeia Committee.China Pharmacopoeia，part one.Beijing:Chemical Industry Press，2005，119.

2 Zhao XL(趙學龍).Cortex moutan processing the history of research.J Chin med(中華中醫(yī)藥學刊)，2008，26:1907-1909.

3 Wang SJ(王善檢)，Ma ST(馬書太)，Liu SE(劉素娥).牡丹皮炮制的現(xiàn)代研究.中醫(yī)藥動態(tài)，1997，(3):9-11.

4 Su GY(蘇桂云)，Liu Y(劉穎).牡丹皮的炮制工藝.Capital med(首都醫(yī)藥)，2009，12:42.

5 Zhou LY(周立艷)，et al.Study on the processing technologies of cortex moutan.Lishizhen Med Mater Med Res(時珍國醫(yī)國藥)，2008，19:842-843.

6 Zheng P(鄭平).潮起潮落話丹皮.全國藥材信息，2010，(27):5-6.