HPV DNA檢測(cè)診斷宮頸癌前病變的意義

智艷芳 李肖甫 李雁青 榮守華

HPV DNA檢測(cè)診斷宮頸癌前病變的意義

智艷芳 李肖甫 李雁青 榮守華

目的 檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞中HPV DNA進(jìn)而診斷宮頸癌前病變，提高診斷率。方法 選取300例宮頸脫落細(xì)胞液用雜交捕獲II代法（HC2法）檢測(cè)HPV DNA感染情況，并用TCT法檢測(cè)細(xì)胞病變情況。結(jié)果 300例樣本中，細(xì)胞學(xué)陰性（NILM）127例（42.33%），ASCUS 95例（31.67%），ASC-H 16例（5.33%），LSIL 46例（15.33%），HSIL16例（5.33%）。所對(duì)應(yīng)HPV感染率分別為依次為35.43%、61.05%、75.00%、78.26%和87.50%。同時(shí)31～50歲年齡段感染率高于其他年齡段(P＜0.05)。結(jié)論 HPV感染與宮頸癌前病變關(guān)系密切，隨宮頸病變程度的增加而顯著增加（HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM）。

人乳頭瘤病毒；宮頸腫瘤；癌前病變；細(xì)胞診斷學(xué)

人乳頭瘤病毒(hum anpapillom avirus,HPV)是最常見的性傳播感染病原體之一，是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要原因。因此，許多學(xué)者提出應(yīng)當(dāng)將檢測(cè)HPV感染作為宮頸癌的一種篩查手段，以期在初篩中濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群[1-2]。本文通過二代雜交捕獲技術(shù)（HC2）檢測(cè)高危型HPV在宮頸癌前病變不同時(shí)期的感染情況，探討HPV檢測(cè)在宮頸癌前病變中的意義，為宮頸癌的防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床標(biāo)本來源及采集 采集2010年1月～2011年1月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診就診的已婚或有性生活史的女性患者樣本300份。分別采用TCT公司和美國(guó)Digene公司的一次性取樣器，刷取宮頸外口和頸管脫落細(xì)胞進(jìn)行TCT和HPV檢測(cè)?；颊吣挲g19～76歲，平均37.11歲。無子宮切除和相關(guān)宮頸手術(shù)史, 無盆腔放射治療史。

1.2 人乳頭瘤病毒檢測(cè) 采用美國(guó)Digene公司提供的試劑盒，通過基因雜交捕獲技術(shù)檢測(cè)高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。工作原理：樣本在堿性條件下加熱水解，使DNA雙鏈變?yōu)閱捂湥辉噭┖刑峁┤L(zhǎng)8000個(gè)堿基對(duì)的RNA混合探針，通過堿基配對(duì)的原理又重新組成RNA 2DNA雙鏈雜合體(雜交)。雜交后的樣本加到有單克隆抗體的96孔捕獲板中，該抗體捕獲雜交的RNA 2DNA雙鏈雜合體。然后再與帶有單克隆抗體的化學(xué)發(fā)光劑相作用，通過光信號(hào)放大被記錄下來。

1.3 細(xì)胞學(xué)診斷 刷取的宮頸脫落細(xì)胞液經(jīng)Th inp rep 2000系統(tǒng)自動(dòng)制片機(jī)處理后，制成直徑2cm薄層細(xì)胞涂片(TCT)，然后固定、染色。采用TBS(the Bethesda system)分級(jí)系統(tǒng)。分為未見癌細(xì)胞/癌前病變細(xì)胞(正常+炎癥反應(yīng)，NILM)、不明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)、未明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞不排除高度鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變(ASC-H)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)和高度鱗狀上皮細(xì)胞內(nèi)病變(HSIL)，共5組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同年齡組HPV感染情況

2 結(jié)果

2.1 HPV檢出率與年齡的關(guān)系 300份樣本中HPV陽(yáng)性169例（占56.33%），感染年齡（37.11±9.52）歲，其中17～20歲和61～76歲兩組的人數(shù)較少，其他各年齡組HPV感染率比較，31～50歲年齡段感染率總體高于其他年齡段(P＜0.05)，見表1。

2.2 宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果 TCT鏡下檢查：NILM 127例，年齡（37.11±8.40）歲；ASCUS 95例，年齡（38.35± 10.70）歲；ASC-H 16例，年齡（42.31±8.30）歲；LSIL46例，年齡（35.26±9.93）歲；HSIL16例，年齡（39.12±8.55）歲。見表2。結(jié)果表明，HSIL組的發(fā)病年齡在40歲左右。

表2 各細(xì)胞學(xué)病變組年齡分布情況

2.3 HPV與TCT檢測(cè)結(jié)果比較 在300份樣本中HPV陽(yáng)性169例，TCT發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)改變173例。細(xì)胞學(xué)檢查細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)明顯改變（N ILM）的樣本中，HPV感染率為35.43%（45/127）；細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常時(shí)HPV的檢出率不斷升高。在ASCUS和ASC-H組中，HPV感染率分別為61.05%（58/95）和75.00%(12/16)；LSIL組達(dá)78.26%(36/46)；HSIL組達(dá)87.50%(14/16)。檢驗(yàn)：ASCUS和ASC-H兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.144，P=0.285＞0.05)；N ILM組與其他組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。表明細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的異常與HPV感染密切相關(guān)，即HPV陽(yáng)性檢出率HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM（見表3）。

表3 各組HPV感染情況

3 討論

3.1 檢測(cè)HPV感染的意義 目前HPV檢測(cè)廣泛用于HPV相關(guān)惡性病變的自然史和病因?qū)W研究。臨床上正在成為宮頸癌的另一種或是附加的篩檢方法。將HPV檢測(cè)用于宮頸癌檢查的基礎(chǔ)在于HPV感染與浸潤(rùn)性宮頸癌和癌前病變密切相關(guān)?，F(xiàn)有的流行病學(xué)資料顯示，大約80%的低度宮頸癌前病變的患者體內(nèi)可以分離出HPV，高度宮頸癌前病變的患者中有90%可以分離出HPV，幾乎所有患浸潤(rùn)性宮頸癌的婦女都能分離出HPV。一組特異性、稱為高危型HPV的持續(xù)感染，現(xiàn)在被公認(rèn)為是宮頸癌的單一因素或是必要、聯(lián)合致癌因素。HPV DNA檢測(cè)檢查宮頸癌前病變的靈敏度（84%～100%）通常高于Pap涂片法，但特異性較低（64%～95%）。HPV檢測(cè)技術(shù)尤其是HC2法的出現(xiàn)為宮頸癌及癌前病變的診斷及病變進(jìn)展的預(yù)測(cè)提供了準(zhǔn)確的依據(jù)[3-4]。HC2檢測(cè)反映了高危型HPV感染與宮頸病變之間的關(guān)系。

3.2 HPV與年齡 在本研究的300例樣本中，HPV感染率為56.33%，31～50歲年齡段HPV感染率總趨勢(shì)略高于其他年齡段。脫落細(xì)胞正常HPV的感染率最低，為35.43%。HPV感染約2個(gè)月后機(jī)體產(chǎn)生抗體，依靠免疫能力8～10個(gè)月可使HPV感染由陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?，但仍?0%～15%呈持續(xù)性感染狀態(tài)[5-6]。經(jīng)過8～10年，宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生不典型增生，導(dǎo)致不同程度的癌前病變，繼而癌變[3]。這里所說的HPV感染率是橫斷面感染率，橫斷0歲感染高峰也可能與中年階段更換性伴侶有關(guān)。考慮到我國(guó)較為保守的性觀念、性行為，筆者認(rèn)為持續(xù)感染的增加或潛伏期HPV的再激活能更好地解釋本研究中31～50歲感染高峰。Castie等[7]也報(bào)道了在哥斯達(dá)黎加，45歲及以上女性人群的HPV感染更多是和病毒持續(xù)感染有關(guān)，而非新的HPV感染。鑒于圍絕經(jīng)期高危型HPV陽(yáng)性可能和病毒持續(xù)感染增加相關(guān)，高危型HPV篩查在圍絕經(jīng)期女性中的臨床意義大于其在年輕婦女中的臨床意義。對(duì)于圍絕經(jīng)期高危型HPV陽(yáng)性的女性，進(jìn)一步的細(xì)胞學(xué)檢查要優(yōu)先予以推薦

3.3 TCT改善了制片技術(shù) 膜式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)是制片技術(shù)的重大革新。首先是解決了取材問題，液基取材采用固定樣式的掃帚式刷子按規(guī)定手法操作，旋轉(zhuǎn)式刷拭，取材具有代表性，刷頭全部進(jìn)入細(xì)胞保存液，不會(huì)丟失細(xì)胞標(biāo)本。保存液中的細(xì)胞經(jīng)Thin PreP2000系統(tǒng)程序化處理后，黏液、血液、炎細(xì)胞與上皮細(xì)胞分離，經(jīng)高精密過濾器過濾，再混合后制成的涂片均勻一致，為單細(xì)胞層。在涂片中的不正常細(xì)胞容易被觀察，并且濕固定的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，易于鑒別，降低了假陰性率，相對(duì)于其他檢查能及早發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，是宮頸癌篩查的理想技術(shù)。在本組實(shí)驗(yàn)中LSIL、HSIL兩組患者年齡＜40歲，這一佐證提示宮頸癌發(fā)生的年齡有逐漸年輕化的趨勢(shì)[8]。

3.4 HPV與細(xì)胞學(xué)的關(guān)系 在ASC-US和ASC-H兩組中有60%以上的患者感染HPV；LSIL組HPV感染占78.26%；HSIL組占87.50%。本文雖然缺少病理組織學(xué)的結(jié)果，但是隨著TBS的級(jí)別增高，HPV的感染率也出現(xiàn)升高的傾向。它們之間的關(guān)系是：HPV陽(yáng)性檢出率HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。

宮頸癌早期發(fā)現(xiàn)和早期治療仍是當(dāng)今治療的有效措施。治療上除手術(shù)切除腫瘤組織外，還應(yīng)該切除HPV感染的組織，這一治療觀點(diǎn)已經(jīng)被越來越多的學(xué)者接受，HPV的持續(xù)感染是治愈效果差和復(fù)發(fā)的重要原因。因此HPV檢測(cè)有利于宮頸癌及宮頸癌前病變的診斷，并可以對(duì)感染情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，即HPV陽(yáng)性尚存在HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞N ILM組的規(guī)律，若這一關(guān)系出現(xiàn)順序的倒錯(cuò)，提示細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)生在對(duì)宮頸病變?cè)\斷或分級(jí)可能存在偏差[10]。因此，HPV感染與否對(duì)宮頸疾病治療方法的選擇、治療效果的評(píng)價(jià)和隨訪都提供了有利的依據(jù)。

所以，將高危型HPV檢測(cè)作為篩查手段，可以比通常采用的宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)更有效地濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，對(duì)臨床具有指導(dǎo)作用。例如細(xì)胞學(xué)陰性而高危型HPV陽(yáng)性者，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)度較大，應(yīng)密切定期隨訪。就如Cuzik等[11]所認(rèn)為的那樣，應(yīng)當(dāng)將HPV置于子宮頸癌的病因鏈，使HPV檢測(cè)成為一種篩選子宮頸癌的手段，這必將有助于宮頸癌的預(yù)防。

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O bjective Human papilloma virus(HPV) DNA were detected to diagnose the precancerous cervical lesions and raise the diagnosis rate. Methods 300 specimens of cervical desquamated cells and secretion from cervical canal were tested w ith hybrid capture II (HC2 HPV DNA)and thinprep cytology(TCT)methods. Results Among 300 desquamated cervical cells specimens w ith TCT examination,127 specimens showed Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy（42.33%）,95 ASCUS（31.67%）,16 ASC-H（5.33%）, 46 LSIL （15.33%）and 16 HSIL（5.33%）. The positiverates of HPV however, were：61.50% of ASCUS, 75.00% of ASC-H, 78.26% of LSIL and 87.50% of HSIL, respectively. There was a slightly higher rate in age 31-50 groups, and the positive rate in NILM was 35.4%. Conclusion There was a high correlation (P＜0.01) between HPV infection and the abnormal cell morphology and cell construction. The Rate of positive HPV infection was obviously increased when abnormal cellular morphology and structure were found (HSIL＞LSIL＞ASC-H＞ASCUS＞NILM).

Human papillomavirus;Cervixneoplasms;Precancerous conditions;Cytodiagnosis

book=13,ebook=62

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.008

450052 鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院細(xì)胞室 （智艷芳 李肖甫 榮守華） 310009 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院 （李雁青）