千柏鼻炎膠囊質(zhì)量標準研究

王秀芹， 林 彤， 顧利紅

(1.廣州市藥品檢驗所，廣東廣州510160)

千柏鼻炎膠囊由千里光、卷柏、決明子、麻黃、羌活等七味中藥加工制成，為常用中藥品種，用于急慢性鼻炎，過敏性鼻炎，鼻竇炎及咽炎等。千柏鼻炎膠囊原質(zhì)量標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑 (第十四冊)》，其中僅有千里光和麻黃薄層色譜鑒別，以此兩項鑒別來控制產(chǎn)品的質(zhì)量遠遠不夠。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，提高人民用藥安全性，作者對千柏鼻炎膠囊的質(zhì)量標準進行研究，進一步完善千柏鼻炎膠囊的質(zhì)量標準。在部頒標準基礎(chǔ)上增加決明子和羌活薄層鑒別，同時千里光作為處方中君藥，占整個處方量的76%，原標準沒有定量測定項，為此采用HPLC法對千里光藥材中的主要成分對羥基桂皮酸和金絲桃苷進行定量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津 LC-10AT HPLC色譜儀;SPDM20A檢測器;CLASS-VP色譜工作站。

1.2 試藥 對照藥材:千里光 (批號120964-200707)，決明子 (批號 120923-200912)，麻黃(批號121051-200704)。對照品:大黃酚 (110796-201017)，鹽酸麻黃堿 (批號171241-201007)，金絲桃苷 (批號11521-200303)，對羥基桂皮酸 (批號30-2018)。上述對照藥材及對照品除對羥基桂皮酸對照品購買于上海中藥標準化研究中心外，其余均購自中國藥品生物制品檢定所。千柏鼻炎膠囊樣品 (批號8004、8005、8006)及陰性對照均由廣州奇星藥業(yè)提供。所有試劑除乙腈為色譜純;其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別試驗

2.1.1 千里光TLC鑒別［1］取本品10粒的內(nèi)容物，研細，加乙醇40 mL，置水浴中加熱回流1 h，濾過，取濾液約15 mL(剩余的濾液備用)，水浴上濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另外稱取千里光對照藥材25 g，加水后煎煮1 h，濾過，濾液濃縮成稠膏，加乙醇40 mL，同法制成對照藥材溶液。取相當于成品量10粒的缺千里光陰性對照品，按同法制備千里光陰性對照溶液。按照TLC法［2］試驗，吸取供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL、對照藥材溶液5 μL后點于硅膠G薄層板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1)為展開劑進行展開，取出后晾干，噴茴香醛-硫酸-甲醇 (2.5∶2.5∶100)顯色劑，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中在對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，并且千里光陰性對照未出現(xiàn)相同顏色斑點。結(jié)果見圖1。

圖1 千里光TLC圖譜Fig.1 TLC of Senecionis scandentis Herba

2.1.2 決明子TLC鑒別［3］取2.1.1項下的備用濾液，水浴蒸干后殘渣加水10 mL溶解，加鹽酸1 mL后置水浴中加熱回流30 min，立即冷卻，分液漏斗經(jīng)乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并提取液后揮干，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。取決明子對照藥材1 g，加水適量，電爐上煎煮1 h，濾過，濾液濃縮至10 mL，按同法制備決明子對照藥材溶液。取相當于成品量10粒的缺決明子陰性樣品，按同法制成陰性對照溶液。大黃酚對照品以甲醇溶解后制成溶液 (1 mg/mL)作為對照品溶液。按照TLC法［2］試驗，吸取供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL、對照藥材溶液和大黃酚對照品溶液各 5 μL，分別點于硅膠 H薄層板(0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑)后以石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯—甲酸 (15∶5∶1)展開劑展開，取出后晾干，噴氫氧化鉀飽和乙醇溶液后于日光下觀察。供試品色譜中，在對照藥材色譜及大黃酚對照品色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，決明子陰性對照未出現(xiàn)相同顏色斑點。結(jié)果見圖2。

圖2 決明子TLC圖譜Fig.2 TLC of Cassiae Semen

2.1.3 麻黃TLC鑒別 取本品10粒的內(nèi)容物，加濃氨試液1 mL和三氯甲烷20 mL，置水浴上回流30 min，過濾后蒸干濾液，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。取麻黃對照藥材1 g，按同法制成對照藥材溶液。取相當于成品量10粒的缺麻黃陰性樣品，按同法制成陰性對照溶液。鹽酸麻黃堿對照品以甲醇溶解后制成溶液 (1 mg/mL)作為對照品溶液。按照TLC法［2］試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于硅膠G薄層板 (0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑)，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液 (4∶1∶0.1)為展開劑進行展開，取出后晾干，噴以茚三酮試液后于105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對照藥材及鹽酸麻黃堿對照品色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色紅色斑點，麻黃陰性對照未出現(xiàn)相同顏色斑點。見圖3。

圖3 麻黃TLC圖譜Fig.3 TLC of Ephedrae Herba

2.1.4 羌活TLC鑒別［4-5］取本品15粒的內(nèi)容物，研細，加乙醚20 mL，搖勻，浸泡30 min，濾過后揮干濾液，殘渣以乙酸乙酯1 mL溶解作為供試品溶液。另取羌活對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。取相當于成品量15粒的缺羌活陰性對照樣品，按同法制成陰性對照溶液。按照TLC法［2］試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于硅膠G薄層板上，以石油醚 (60～90℃)-乙酸乙酯 (3∶1)展開劑進行展開，取出后晾干，噴5%香草醛硫酸溶液顯色劑后于105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，羌活陰性未出現(xiàn)相同顏色斑點。見圖4。

2.2 定量測定［6-12］

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 Kromasil色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為乙腈-0.2%冰醋酸 (15∶85);柱溫35℃;體積流量1.0 mL/min;檢測波長310 nm(0～20 min)，360 nm(20～30 min);進樣量10 μL。該條件下對羥基桂皮酸峰和金絲桃苷峰與相鄰峰分離度均大于1.5，千里光陰性對照無干擾。色譜圖見圖5。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取對羥基桂皮酸和金絲桃苷對照品適量后分別以甲醇溶解，質(zhì)量濃度均為30 μg/mL，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 將千柏鼻炎膠囊樣品研細后稱取約0.5 g，精密稱定后置圓底燒瓶中，精密加入75%甲醇25 mL后稱定質(zhì)量，水浴中加熱回流1 h后放冷、稱定質(zhì)量，用75%甲醇補足損失的質(zhì)量后搖勻過濾，取續(xù)濾液，即得。

圖5 HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatagrams

2.2.4 陰性對照溶液的制備 取相當于成品量0.5 g的缺千里光陰性對照樣品，同法制成千里光陰性對照溶液。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對羥基桂皮酸和金絲桃苷對照品溶液1、2、5、10、15、20、25 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定，用最小二乘法進行線性回歸，得線性方程為對羥基桂皮酸Y=6×108X+6 143.6，r=1;金絲桃苷Y=2×106X-6 521.8，r=0.999 9。結(jié)果表明對羥基桂皮酸在0.035 75～0.893 75 μg范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好;金絲桃苷在0.032 86～0.821 5 μg范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)測定6次，對羥基桂皮酸峰面積積分值RSD為0.5%，金絲桃苷峰面積積分值RSD為0.8%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復性試驗 取同一批號千柏鼻炎膠囊(批號8004)樣品細粉約0.5 g，精密稱取6份，按2.2.3項下方法處理并測定，結(jié)果對羥基桂皮酸平均質(zhì)量分數(shù)為 1.108 7 mg/g，RSD為 1.3%(n=6);金絲桃苷平均質(zhì)量分數(shù)為0.612 7 mg/g，RSD為2.0%(n=6)。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品 (批號8004)溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h測定樣品中對羥基桂皮酸和金絲桃苷的含有量，結(jié)果對羥基桂皮酸、金絲桃苷含有量的RSD均為1.3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量千柏鼻炎膠囊 (批號8004)的樣品粉末約0.25 g，精密稱取共6份，置圓底燒瓶中，分別精密加入對羥基桂皮酸和金絲桃苷混合對照品溶液25 mL，稱定質(zhì)量，按2.2.3項下方法制備，分別測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.2.10 樣品測定 取千柏鼻炎膠囊樣品3批，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果 (n=6)Tab.1 Results of recovery tests(n=6)

表2 樣品測定結(jié)果Tab.2 Determination results of samples

3 討論

3.1 千里光的薄層色譜鑒別實驗中按照原方法噴三氯化鐵顯色，結(jié)果陰性對照有干擾，實驗中將噴三氯化鐵試液顯色改為噴茴香醛-硫酸-甲醇 (2.5∶2.5∶100)溶液，結(jié)果供試品溶液顯色斑點清晰，且千里光陰性對照無干擾。

3.2 決明子的薄層色譜鑒別為新增加的薄層鑒別，實驗方法參照《中國藥典》2010年版一部“千柏鼻炎片”的［鑒別］(2)，結(jié)果供試品薄層色譜中在與決明子為對照藥材相應(yīng)位置處只有大黃酚一個黃色斑點一致，實驗中將其檢視方式由紫外光燈(365 nm)下觀察改為噴氫氧化鉀飽和溶液于日光下檢視，結(jié)果斑點對應(yīng)性好，決明子陰性對照無干擾，具有專屬性。

3.3 定量測定中曾比較甲醇、75%甲醇、50%甲醇回流1 h的提取效果，結(jié)果以75%甲醇為提取溶劑，對羥基桂皮酸和金絲桃苷兩者均較完全提取，為此選擇75%甲醇為提取溶劑。實驗中考察了回流提取30、60 min和90 min的提取效果，結(jié)果3個回流提取時間含有量測定結(jié)果基本一致，為保證提取完全，最后選擇回流時間為60 min。

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