露兜 簕 果萜類化合物的分離和鑒定

武嬙，章程輝，牛雷，常剛，詹麗麗

（海南大學食品學院，海南?？?570228）

露兜簕（Pandanus tectorius Sol.）又名露兜樹、野菠蘿、假菠蘿、簕菠蘿、山菠蘿，為露兜樹科露兜樹屬的果實，形態(tài)奇特，堅硬而含木質，少許肉質部分可食用[1]。本科共3屬，約800種，廣布于亞洲、非洲和大洋洲熱帶和亞熱帶地區(qū)，大多為海岸或沼澤植物，為東半球熱帶特征植物[2]。我國有2屬，10種，2變種，分別為藤露兜屬（Freycinetia Gaud.）和露兜樹屬（Pandanus Linn.f.）。海南及廣東有1屬（露兜樹屬），5種，果實為卵球形或圓柱狀聚花果，由多數(shù)核果或核果束組成，或成漿果狀，形似“菠蘿”，故有“野菠蘿”之稱[3]?！毒V目拾遺》“露花粉”條引《粵志》云[4]：“其生于土者，蕊落結子，大如瓜，日路頭花，多不香；惟露花盛夏時露花始熟，以花覆盆盎曬之，香落茶子油中，其氣馥烈，是日露花油”。

本屬植物多為常綠分枝灌木或小喬木，少數(shù)為草本，除經(jīng)濟價值較高，作為綠化和觀賞樹種之外，本屬植物的果實、花、葉和根等部位也具有較好的藥用價值。如露兜簕的氣生根和果有平肝清熱、去濕利尿的功效，可治感冒發(fā)熱、肝火頭痛、尿路感染、腎炎水腫等；葉子民間用于治療麻瘋病、梅毒和疥癬；雄花周圍的白色苞片含有濃烈玫瑰香味的精油，是很好的興奮劑和抗菌劑[5]。此外，露兜簕果還有降血壓、治痢疾的作用，其果核可治痔瘡，在民間有一定的藥用歷史。

目前國內外關于露兜樹屬化學成分的研究不多，主要報道的成分有揮發(fā)油[6-7]、甾體[8]、脂肪酸[9-10]、酯類[11]，胡蘿卜苷[12]等。本文選擇以露兜簕的果實為研究對象，首次對露兜簕果中的萜類化合物進行提取分離研究，擴大其藥用價值以及綜合開發(fā)利用等提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料、試劑和儀器設備1.1.1 實驗材料

所用實驗材料為露兜簕（P.tectorius Sol.）的新鮮果實，并經(jīng)楊小波教授進行了鑒定。經(jīng)干燥、粉碎、過20目篩的露兜簕果的粉末。

1.1.2 試劑儀器設備

薄層層析硅膠：GF254，青島海洋化工廠，（105℃活化30 min，置于干燥器中備用）；常壓柱：2 cm×30 cm，4 cm×50 cm，5 cm×75 cm，北京玻璃儀器廠；旋轉蒸發(fā)儀：RV06 ML 2－B型，德國IKA公司；紫外可見分光光度計：UV－2450型，日本島津公司；紅外光譜儀：EQUINOX 55型，美國Unicam公司；核磁共振波譜儀：400MHZ型，瑞士Bruker公司。

1.2 預實驗

1.2.1 提取分離的方法選擇

對已制備的露兜簕果的乙醇提取物進行了化學成分的預實驗，結果見表1。

表1 露兜簕果乙醇提取物化學成分的預實驗結果Table 1 The pre-experimental results of chemical composition of ethanol extract

結果顯示：露兜簕果中可能含有糖苷類、萜類、黃酮類、生物堿類、甾體類化合物。因此，根據(jù)以上的實驗結果和相關文獻，設計使用95%的乙醇溶液提取露兜簕果中的化學成分，再使用硅膠柱層析進行分離。

1.2.2 薄層條件的選擇

進行薄層條件的選擇中選擇適當?shù)恼归_劑是首要任務。一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷＜己烷＜苯＜乙醚＜THF＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇。使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑，通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，常用的溶劑組合有：Petroleumether/Ethylacetate；petroleumether/Acetone；Petroleumether/Ether；CHCl3/MeOH等。展開劑的比例要根據(jù)文獻報道，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。

本實驗選用活化后的硅膠GF254的薄層層析板，分別比較了常用的展開系統(tǒng)，環(huán)己烷－乙酸乙酯、石油醚－乙酸乙酯、氯仿－甲醇等，選用通用顯色劑：10%硫酸乙醇溶液和碘顯色，并考慮安全、經(jīng)濟、環(huán)保等問題，最后發(fā)現(xiàn)，石油醚部分的萃取物在石油醚－乙酸乙酯展開系統(tǒng)下分離效果較佳。

因此，在對露兜簕果的化學成分分離的過程中，選用石油醚部分進行研究，并采用石油醚－乙酸乙酯系統(tǒng)進行梯度洗脫。

2 提取和分離

2.1 提取與粗分離

取上述露兜簕果粉末5.0 kg，用3倍量的95%乙醇加熱回流提取3次，每次提取時間分別為2 h；過濾，合并提取液；提取液經(jīng)減壓濃縮至無醇味，得到浸膏；浸膏用少量的水混懸；然后依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇各萃取4次～5次，至萃取液顏色無明顯變化；合并各部分萃取液，濃縮成浸膏，冰箱保存，備用。

2.2 硅膠柱層析分離與純化

將上述石油醚部分的浸膏用少量的石油醚溶解，稱取約15 g硅膠倒入與之拌勻，揮干溶劑，研勻，作為要上柱的樣品。稱取柱層析硅膠約500 g以石油醚∶乙酸乙酯=9∶1為溶劑，濕法裝柱后上樣，再以石油醚－乙酸乙酯（1∶9～9∶1）梯度洗脫，每 200 mL 為一份收集餾分。同時以石油醚：乙酸乙酯為展開劑，TLC跟蹤檢查，并合并相同餾分。

最后，在石油醚∶乙酸乙酯=2∶8的洗脫部分合并得到化合物F5的粗品，經(jīng)重結晶得到化合物F5－1（25 mg）。

3 化合物的結構鑒定

將最后分離純化得到的F5－1取部分溶解于氘代氯仿（CDCl3），利用400 MHz核磁共振波譜儀，測定氫譜（1H－NRM）和碳譜（13C－NRM）；再將部分溶于乙腈，進行紅外光譜分析；此外，還利用液相色譜－質譜聯(lián)用技術測定出其分子量。通過對各譜圖的分析，并結合參考文獻，確定該化合物五環(huán)三萜類，分子量456，分子式為C30H48O3，結構式如圖1。

化合物F5－1：無色針晶狀，無臭，無味，溶于甲醇、乙酸乙酯、乙醇、苯、乙醚、丙酮和氯仿，幾乎不溶于水，對酸堿均不穩(wěn)定。mp 287℃～290℃，點樣于硅膠板上，紫外燈下無熒光，硫酸顯紫紅色斑點，Liebermann－Burchard反應呈陽性。

以上數(shù)據(jù)與文獻報道[13]的齊墩果酸基本一致，故鑒定化合物F5-1為齊墩果酸。

4 小結與討論

4.1 小結

露兜簕果的乙醇提取物經(jīng)不同的有機溶劑萃取后，采用薄層色譜、硅膠柱層析、重結晶等方法進行分離純化，得到物質F5-1，利用波譜技術結合化合物的理化性質以及參考文獻等，鑒定該化合物為五環(huán)三萜類化合物，齊墩果酸（3β-hydroxy-olea-12-en-28-oic acid），是首次從該科植物中分離得到。齊墩果酸主要具有護肝降酶、促進肝細胞再生、抗炎、強心、利尿、抗腫瘤等作用，還具有降血糖、降血脂、鎮(zhèn)靜的作用，是開發(fā)治療肝病和降血糖等藥物的有效成分。因此首次在露兜屬樹屬中首次分離出，對進一步研究該植物的藥用價值等具有重要的意義。

4.2 討論

1）選擇分離方法時，通常采用經(jīng)典的柱色譜法進行分離，其中硅膠是應用最多的填料，本實驗就是利用反復硅膠柱層析結合薄層色譜進行分離。硅膠柱層析的關鍵是選擇分離效果好的洗脫體系，并采用TLC進行追蹤檢測。此外，裝柱也是柱色譜分離成敗的關鍵因素之一，濕法裝柱分離效果好，易操作，因此在實驗過程中采用濕法裝柱。

2）由于露兜簕果中的成分復雜，用單一的分離手段不易得到理想的效果，本研究同時結合其他分離手段純化的效果會更好。

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