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    安陽(yáng)固本膏中血竭素的HPLC含量測(cè)定

    2012-08-28 04:27:22李長(zhǎng)達(dá)
    關(guān)鍵詞:甲醇溶液血竭安陽(yáng)

    李長(zhǎng)達(dá)

    安陽(yáng)固本膏具有溫腎暖宮,活血通絡(luò)的功效,主要用于女子宮寒不孕,經(jīng)前腹痛,月經(jīng)不調(diào);男子精液稀薄,精子少,腰膝冷痛等的治療。安陽(yáng)固本膏是由肉桂、附子、艾葉、血竭等23味中藥經(jīng)提取分離后制成的中藥復(fù)方制劑,而血竭[1]為傳統(tǒng)名貴中藥,具有活血定痛,化瘀止血,生肌斂瘡的功效,血竭中含有黃酮類、苷類、酚類、有機(jī)酸等多種化學(xué)成分,其中血竭素是其主要藥效成分之一?,F(xiàn)以血竭素的含量為指標(biāo),采用HPLC法對(duì)方中血竭進(jìn)行測(cè)定。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 Waters 1525系列高效液相色譜儀(1525 HPLC泵,2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器);BP211D電子天平。

    1.2 試藥 血竭素高氯酸鹽對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供);3批安陽(yáng)固本膏樣品(市售);乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。

    2 血竭素的含量測(cè)定

    2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液(45∶55);流速:1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):440nm;進(jìn)樣量:10.0 μl;柱溫:30℃。在上述色譜條件下,分別取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣,結(jié)果對(duì)照品溶液與供試品溶液在相同的保留時(shí)間處有吸收峰,而陰性對(duì)照溶液無(wú)吸收峰。見(jiàn)下圖。

    圖1 HPLC圖

    2.2 溶液配制 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品,加3%磷酸甲醇溶液制成每1 ml含血竭素10 μg(血竭素重量=血竭素高氯酸鹽重量/1.377)的溶液,作為對(duì)照品溶液。

    供試品溶液的制備:取剪碎的本品15 g,加硅藻土2 g,加入3%磷酸甲醇溶液50 ml,加熱回流30 min,冷卻,濾過(guò)(0.45μm微孔濾膜),取續(xù)濾液,作為供試品溶液。

    陰性對(duì)照溶液的制備:取按處方及工藝制備的不含血竭藥材的樣品,按供試品溶液的制備同法制備陰性對(duì)照溶液。

    2.3 線性試驗(yàn) 精密稱取血竭素對(duì)照品適量,加3%磷酸甲醇溶液溶解并分別制成每 1 ml含 4.357 μg、6.536 μg、8.715 μg、13.072 μg、26.144 μg 的對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣測(cè)定。以濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:Y=3113380X-17807(r=0.9998),表明血竭素在0.04357~0.26144 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.4 精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密度試驗(yàn):取血竭素對(duì)照品溶液,按上述色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次,得峰面積值的RSD為0.8%。

    重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品,共6份,照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液,按上述色譜條件,分別進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得含量的RSD為0.6%。

    穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液,按上述色譜條件,于配制后第 0、1、2、3、4 h分別進(jìn)樣測(cè)定,得峰面積值的 RSD為0.9%。

    2.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批號(hào)安陽(yáng)固本膏樣品(含量為0.035 mg/g)6份,研細(xì),取適量,精密稱定,分別精密加入定量的血竭素對(duì)照品溶液(濃度為0.0255 mg/ml)。按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件,分別進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算加樣回收率。得加樣回收率為97.8%,RSD=0.4%(n=6)。

    表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表

    2.6 樣品測(cè)定 取3批安陽(yáng)固本膏樣品,分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測(cè)定血竭素含量。結(jié)果3批安陽(yáng)固本膏樣品每張含血竭素的平均含量分別為0.81 mg、0.74 mg、0.85 mg。

    3 討論

    3.1 提取溶劑的選擇 實(shí)驗(yàn)分別比較了用甲醇、三氯甲烷-甲醇(1∶1)、三氯甲烷、3%磷酸甲醇溶液[2]等為提取溶劑,結(jié)果以3%磷酸甲醇溶液提取率最高,故最后確定采用3%磷酸甲醇溶液為提取溶劑。

    3.2 提取方法的選擇 實(shí)驗(yàn)分別采用超聲處理30 min、1 h,加熱回流30 min、1 h進(jìn)行提?。?],結(jié)果以加熱回流30 min提取效果最佳,故最后確定采用加熱回流30 min進(jìn)行提取。

    [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:133.

    [2]蘇健,王寶琴,韓敏彩,等.進(jìn)口與國(guó)產(chǎn)血竭含量測(cè)定方法研究進(jìn)展.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(1):49-50.

    [3]邱碧菡,陳軍霞,卞凌,等.血竭中血竭素的提取方法比較.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(7):22-24.

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