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    冰凍紅細胞的特點、制備、保存及臨床應(yīng)用

    2012-08-24 07:25:26
    中外醫(yī)療 2012年23期
    關(guān)鍵詞:血袋離心力冰凍

    王 惟

    吉林省血液中心,吉林長春 130031

    隨著成分輸血的開展,紅細胞的合理利用逐漸受到重視,國外以紅細胞利用率80%作為評價一個國家的醫(yī)療技術(shù)水平。20世紀(jì)60年代末70年代初,建立了冰凍紅細胞技術(shù)。在低溫冷凍的條件下,由于紅細胞的代謝活動幾乎停止而處于休眠狀態(tài),使紅細胞能夠長期保存。冷凍速度較慢時,細胞外的水會結(jié)冰,加入甘油防凍劑后,細胞內(nèi)脫水和細胞容積減少。由于甘油滲透壓較高,進入體內(nèi)容易造成細胞溶血,因此紅細胞復(fù)蘇后,需要洗滌去甘油,此時細胞處于高滲狀態(tài),必須用梯度洗滌的方法去除甘油和游離血紅蛋白[1]。經(jīng)過不斷改進,我國70年代在制備冰凍紅細胞工藝上已日益完善,開創(chuàng)了保存血液的另一種重要途徑。冰凍紅細胞最大的特點是可長達10年的保存期,解決了血液長期貯存、保障供血和對稀有血型輸血(Rh(D)陰性)以及自身輸血創(chuàng)造了條件,爭取了搶救時間,挽救了寶貴的生命,冷凍血是其它制劑所不能替代的制品[2]。為更好的提高冰凍紅細胞血液質(zhì)量,筆者在紅細胞制備、保存以及解凍洗滌過程中,積累了一些經(jīng)驗,對不同方法制備出的冰凍紅細胞甘油殘留量、游離血紅蛋白含量等指標(biāo)進行分析,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 試劑與耗材

    57%甘油、9%氯化鈉溶液、三珠冷凍袋、無菌四聯(lián)袋、羥乙基淀粉溶液、0.9%生理鹽水。

    1.2 制備方法

    甘油化方法:將紅細胞或全血離心去上清,將紅細胞移至三珠袋中加甘油,動作需輕柔。200mL紅細胞加甘油160mL,控制速度先慢后快,25min左右加完。在室溫靜止30min送-80℃速凍保存。洗脫甘油:用濃度梯度法洗滌,分別用9%NaCl溶液與羥乙基淀粉溶液洗滌,再用0.9%NaCl溶液反復(fù)洗滌,成品為懸浮紅細胞供臨床應(yīng)用。在制備過程中加甘油后不同放置時間和洗脫時不同離心力對產(chǎn)品質(zhì)量有較大影響,按照這兩項條件不同將制備的產(chǎn)品分A組和B組。

    1.3 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

    上清血紅蛋白不超過1g/L;殘余甘油含量在10g/L;紅細胞回收率>80%;體外溶血實驗≤50%[3]。

    1.4 統(tǒng)法方法

    2 結(jié)果

    2.1 甘油化時紅細胞加甘油后不同放置時間,A組15min,B組30min,檢測甘油殘留量,見表1。

    表1 不同放置時間的甘油殘留量(±s)

    表1 不同放置時間的甘油殘留量(±s)

    注: *兩組相比,P<0.05。

    組別例數(shù) 甘油殘留量(g/L)A組B組88 7.85±0.65 4.49±0.92

    2.2 在洗脫甘油過程中,適當(dāng)?shù)碾x心力既能很好地去除甘油,又能減少重離心對紅細胞的破壞,筆者采用不同離心力制備冰凍紅細胞后檢測冰凍紅細胞各項參數(shù),做如下比較,A組2600轉(zhuǎn)/min,B組3300轉(zhuǎn)/min,見表 2。

    表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比(±s)

    表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比(±s)

    組別上清游離蛋白(g/L)甘油殘留量(g/L)紅細胞回收率(%)溶血率(%)A組B組88例數(shù)P 0.39±0.15 0.79±0.006<0.05 4.56±1.73 8.4±0.75<0.05 4.1±2.41 79.1±2.32<0.05 34.3±0.93 44.7±3.82<0.05

    3 討論

    紅細胞甘油化前,保養(yǎng)液為ACD的血液制劑應(yīng)2d冰凍,保養(yǎng)液為CPDA-1的血液制劑在6d內(nèi)冰凍,這是保持冰凍紅細胞活性的基礎(chǔ)。目前,冰凍紅細胞所使用的防凍劑為滲透性甘油,由于甘油滲透壓較高,在加入甘油時一定要先控制速度,先20滴/min,3min后 40滴/min,5min后 60~70滴/min,25min左右加完即可。由慢到快,逐漸提高滴速,并使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態(tài),血袋內(nèi)有玻璃珠,起攪拌作用。讓甘油緩慢均勻地和紅細胞混合,甘油加完后一定要靜止30min。加甘油前和加完甘油后都要排盡血袋內(nèi)空氣,如果血袋內(nèi)氣泡太多形成大的氣泡的過程中,小氣泡需不斷破裂,這樣對紅細胞是一種損害。解凍去甘油過程:①將冰凍的紅細胞制備成解凍去甘油紅細胞關(guān)鍵的第一步是在-80℃冰箱取出紅細胞后要迅速浸入37~40℃水浴中,水浴箱的水一定要浸沒血袋,不斷搖動,使血袋與水充分接觸,加速其融化,但不能用力擠壓血袋。減少紅細胞在溶化過程中的機械損傷,溶化好的血袋要在室溫靜止10min,讓紅細胞得到充分休息,增強細胞的抗破壞能力。②甘油化的紅細胞的內(nèi)環(huán)境是高滲的,為防止紅細胞遭到人為破壞,一般采用梯度洗滌法,先用高滲鹽水9%NaCl使甘油從紅細胞內(nèi)逐漸釋放出來,逐漸降低滲液的濃度,這一洗滌過程重點是高滲鹽水的速度一定要緩慢些,30滴/min逐漸提高滴速。7min加完即可,而且每次加完洗液后一定要平衡5~10min后再離心。③注意選擇適當(dāng)降離心力,對冰凍紅細胞能達到各種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起到絕對性作用,通過比較我們發(fā)現(xiàn)2600轉(zhuǎn)/min離心的制品各項指標(biāo)較好。④臨床應(yīng)用:經(jīng)過洗滌紅細胞由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白,減少了輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。對于血液病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、腎功能異常以及心功能不全的患者,輸用更為有利。冷凍血由于去除了細胞代謝產(chǎn)物、抗凝劑及可能的病原體,即使大量輸注也可避免酸中毒、高鉀血癥以及減少傳染病的傳播,能很好滿足臨床特殊需要并且安全有效[4]。

    [1] 邱艷.全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化[M].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002:72-73.

    [2] 王培華.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:70-73.

    [3] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2001.

    [4] 安萬新,于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學(xué)[M].科學(xué)技術(shù)文獻出版社,2010:167.

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