副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

王 留 王中華

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系，河南省商丘市 476000）

副豬嗜血桿菌病是一種以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎及高死亡率為特征，嚴重危害2周齡到4月齡的仔豬和青年豬的傳染病，由副豬嗜血桿菌引起，發(fā)病率一般在10%～15%，嚴重時病死率可達50%，感染豬表現(xiàn)為多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等。由于飼養(yǎng)技術(shù)調(diào)整不當(dāng)、突發(fā)新的呼吸道綜合征等原因，使得該病在我國規(guī)模化、集約化豬場已呈現(xiàn)出流行趨勢，危害日漸嚴重，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。副豬嗜血桿菌在我國各地豬場引起多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎的報道屢見不鮮，已從北京、黑龍江、遼寧、河南、湖南、寧夏、湖北、上海、福建、山東、河北等省市分離出副豬嗜血桿菌[1-3]。

商丘市幾個豬場出現(xiàn)疑似副豬嗜血桿菌病的病例，膘情良好的患病豬體溫可達40.5℃～42℃，精神沉郁，食欲下降，咳喘，鼻流膿涕，呼吸困難，皮膚、粘膜先發(fā)紅，稍后可見發(fā)紺，眼瞼水腫；部分病豬可見腕關(guān)節(jié)、跗關(guān)節(jié)腫大，行走緩慢或不愿站立，偶見嚴重患病豬出現(xiàn)共濟失調(diào)，瀕死期側(cè)臥或四肢呈劃水樣動作。

剖檢病死豬，可見多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎，胸腹腔積液色紅渾濁，胸腹腔臟器表面有黃白色的纖維素性滲出物，重者可致臟器發(fā)生粘連，見肺部發(fā)生肉樣變或出血，有些肺臟和胸壁發(fā)生粘連，氣管內(nèi)分泌物明顯增多，心包積液；全身淋巴結(jié)尤其是腹股溝淋巴結(jié)腫大。

筆者采集病料后，進行病原的分離鑒定與藥敏試驗，并根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選用敏感藥物進行臨床治療，取得很好的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

無菌采集病豬肺臟、心血、腹膜和胸腔積液。

1.1.2 試劑

胰蛋白胨大豆瓊脂 （TSA）、NAD、脲酶、氧化酶、接觸酶、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和核糖及各種藥敏試紙均購自杭州微生物試劑有限公司，恩諾沙星、環(huán)丙沙星、頭孢菌素、慶大霉素等藥物購自商丘市畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心。

1.2 方法

1.2.1 細菌鏡檢

取病豬的心血、胸腔積液、肺組織涂（觸）片，干燥固定后進行革蘭氏染色。

1.2.2 分離培養(yǎng)

無菌取肺病變組織、心血、腹膜和胸腔積液劃線接種TSA平板，37℃厭氧培養(yǎng)36～48小時，挑取培養(yǎng)物涂片，革蘭氏染色鏡檢。

表1 生化試驗結(jié)果

表2 藥敏試驗結(jié)果

1.2.3 生化鑒定

挑取純化菌落接種脲酶、氧化酶、接觸酶、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖等添加NAD(1μg/mL)的生化管中，放入含體積分數(shù)5%的CO2培養(yǎng)箱中 37℃培養(yǎng)3天后觀察結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗

吸取分離純化的菌液0.2 mL均勻的涂布在TSA平板上，再把圓形的藥敏試紙按一定的比例貼在TSA平板上，置 37℃的 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48小時，觀察、測定抑菌環(huán)的大小。抑菌環(huán)直徑在15 mm以上為高度敏感,10 mm～15 mm為中度敏感，10 mm以下為低度敏感，無抑菌環(huán)為不敏感。

1.2.5 治療試驗

根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，參考各發(fā)病豬場實際情況，在敏感抗生素中選取治療藥物，進行治療，觀察治療效果。

2 試驗結(jié)果

2.1 細菌鏡檢結(jié)果

取發(fā)病豬的心血、胸腔積液、肺組織等涂 (觸)片，革蘭氏染色、鏡檢可見革蘭氏陰性的細小桿菌。

2.2 分離培養(yǎng)結(jié)果

無菌取發(fā)病豬的肺臟、腹膜、胸腔積液和心血劃線接種TSA平板，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，48小時后可見有針尖大小、圓形、邊緣整齊、灰白色半透明的小菌落生長。染色鏡檢呈革蘭氏陰性的小桿菌，以纖細桿狀居多。

2.3 生化鑒定結(jié)果

分離純化的菌液接種到NAD的生化管中，在5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)（37℃）。結(jié)果符合副豬嗜血桿菌生化特性，試驗結(jié)果見表1。

共對5個發(fā)病豬場采集的10份病料進行了分離培養(yǎng)，成功分離并鑒定出副豬嗜血桿菌7株。

2.4 藥敏試驗結(jié)果

分離株對恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星等氟喹諾酮類及頭孢菌素、慶大霉素等高度敏感，對四環(huán)素、土霉素、林可霉素等藥物有一定的耐藥性，試驗結(jié)果見表2。

2.5 治療方案及結(jié)果

根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，制定治療用藥方案，對以多發(fā)性漿膜炎為主要癥狀的病豬重點使用恩諾沙星或環(huán)丙沙星進行治療，對以關(guān)節(jié)炎為主要癥狀的病豬重點使用頭孢菌素或慶大霉素進行治療，共治療病豬128頭，治愈率89.8%，臨床治療效果良好。

3 討論與分析

通過對疑似副豬嗜血桿菌病的病豬進行病原分離和生化鑒定，成功分離出副豬嗜血桿菌7株，并對分離菌株進行藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬場此前常用的四環(huán)素、土霉素、林可霉素等抗生素在藥敏試驗中表現(xiàn)最不敏感，而目前已較少使用的卡那霉素對該菌的抑菌效果相對較好，喹諾酮類和頭孢類藥物有較強的抑菌作用。

副豬嗜血桿菌病屬細菌性疾病，可以通過藥敏試驗選用敏感的抗菌藥物進行治療。國內(nèi)文獻有關(guān)副豬嗜血桿菌不同地方分離株對各種抗菌藥物敏感性的報道不一，與不同地區(qū)流行菌株的血清型、耐藥性等因素相關(guān)[4-7]。

[1]母安雄，應(yīng)小飛，陶益，等.副豬嗜血桿菌的研究進展.中國畜牧獸醫(yī)，2005(11):48-50.

[2]劉正飛，蔡旭旺，陳煥春，等.副豬嗜血桿菌研究進展.動物醫(yī)學(xué)進展，2003，24:17-19.

[3]尹秀風(fēng)，姜平，鄧雨修，等.副豬嗜血桿菌的分離與鑒定.畜牧與獸醫(yī)，2004,7:6-8.

[4]張培君，孫惠玲，苗得園，等.豬胸膜肺炎放線桿菌和副豬嗜血桿菌的鑒別診斷及血清型鑒定.中國獸藥雜志，2002,36(10):18-20.

[5]王天奇，董發(fā)明，白喜婷.哺乳仔豬副嗜血桿菌病的診斷及控制.中國獸醫(yī)雜志，2004，8:53-54.

[6]蔡旭旺，劉正飛，陳煥春，等.副豬嗜血桿菌的分離培養(yǎng)和血清型鑒定.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2005，24(1):55-58.

[7]黃小波，曹三杰，劉伍梅，等.豬偽狂犬病病毒豬圓環(huán)病毒Ⅱ型副豬嗜血桿菌和豬巴氏桿菌混合感染的診治.中國獸醫(yī)雜志，2009，(01)：21-23.