膜式法與離心法TCT檢測結(jié)果的對比分析

藍云飛 羅志峰

宮頸癌是我國婦女最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率僅次于乳腺癌位居第二，它是感染性疾病，是可以預防、可以治愈的疾病[1]。近年來，我國宮頸癌的發(fā)生率有上升和年輕化趨勢[2-3]。宮頸液基薄層細胞學檢測（TCT）是細胞學發(fā)展里程碑式的突破，按照TBS（The Bethesda System）診斷標準，能為臨床早期診斷宮頸病變提供有力證據(jù)，尤其是CIN檢出率達到60%左右。宮頸細胞學是診斷和發(fā)現(xiàn)宮頸癌及其癌前病變的有效手段[7]。宮頸癌及癌前病變的早期診斷是提高宮頸癌治療率及生存率的關(guān)鍵。筆者所在醫(yī)院于2006年6月開展TCT，用于宮頸病變的篩查檢測，因而大大提高了宮頸病變的檢出率，使患者得到早發(fā)現(xiàn)，早診斷，早治療，有效降低宮頸癌的發(fā)病率。2006年6月-2011年5月用膜式法TCT檢測，2011年6月開始用離心法（Cytospin）TCT檢測。工作中筆者不經(jīng)意發(fā)現(xiàn)離心法TCT陽性病例不少，隨意抽取兩個時段的相同病例數(shù)以兩種方法TCT檢測結(jié)果進行對比分析，探討不同方法對提高TCT檢出率的作用，現(xiàn)將分析結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年1-12月和2011年5-12月筆者所在醫(yī)院婦科門診分別有2000例患者接受TCT檢查。年齡17～73歲，平均年齡36歲，將4000例患者按時間段分成兩組，一組是用膜式法TCT檢測2000例，設為膜式組；另一組是用廣州柏嘉生物科技有限公司Cytospin TCT離心法檢測2000例，設為離心組。

1.2 方法 CytospinTCT離心法，取樣標本保存液瓶、宮頸細胞刷、吸管和濾網(wǎng)薄膜是由廣州柏嘉生物科技有限公司提供，膜式法耗材是另外一家公司提供，標本由清遠市婦幼保健醫(yī)院婦科門診取材，病理科完成制片和同一醫(yī)生閱片。

1.3 取材方法 充分暴露宮頸后用宮頸刷緊貼宮頸管口順時針旋轉(zhuǎn)5圈，取宮頸管、宮頸移行帶及宮頸表皮細胞，然后將刷頭取下放入盛有固定液的標本瓶中密封并送檢。取樣前若有過多黏液或分泌物必需用棉簽檫拭干凈然后再取樣，以保證取樣為宮頸細胞樣品。膜式法取材與離心法取材基本相同，只是各家細胞保存液和制片方法不同。膜式法是通過儀器高速打散標本瓶內(nèi)的細胞，然后通過負壓將細胞吸在過濾薄膜上，再將薄膜上細胞轉(zhuǎn)移印壓在玻片上，2 min制成1張薄片。而離心法是通過離心力分散、過濾、轉(zhuǎn)移等功能，精確使細胞貼附在限定區(qū)內(nèi)制成12 mm×20 mm的薄片，4 min制成6～12張薄片。兩種方法制定薄片均用95%酒精固定，巴氏染色。

1.4 診斷標準 按TBS診斷標準專人分類報告。分別報告為上皮內(nèi)低度病變（LSIL）、上皮內(nèi)高度病變（HSIL）、鱗癌（SCC）、非典型腺上皮（AGC）和腺癌（AIS）。

1.5 統(tǒng)計學處理 采取SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采取字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2009年2000例宮頸細胞標本采用膜式法TCT檢測，標本滿意例數(shù)1910例，滿意率為95.5%（1910/2000）。其中低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）236例，檢出率為11.8%（236/2000）；高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）27例，檢出率為1.35%（27/2000）；鱗癌1例，檢出率為0.05%（1/2000）；非典型腺上皮（AGC）0例，檢出率為0（0/2000）；腺癌0例，檢出率為0（0/2000）；2011年2000例宮頸細胞標本采用離心法（Cytospin）TCT檢測，標本滿意數(shù)有1997例，標本滿意率為99.9%（1997/2000）。其中低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）305例，檢出率為15.3%（305/2000）；高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）40例，檢出率為2%（40/2000）；鱗癌（SCC）3例，檢出率為0.15%（3/2000）；非典型腺上皮（AGC）6例，檢出率為0.3%（6/2000）；腺癌（AIS）2例，檢出率為0.1%（2/2000）。LSIL、HSIL、SCC、AGC、AIS均有病理組織學證實。兩組宮頸病變檢出與標本滿意情況見表1。

表1 兩組宮頸病變檢出與標本滿意情況 例（%）

3 討論

宮頸癌的早診、早治是提高宮頸癌治愈率及生存率的關(guān)鍵，而細胞學檢測是宮頸癌早期病變篩查的主要手段。我國是一個有13 億人口的發(fā)展中國家，國民的生活水平在發(fā)達的東部沿海地區(qū)和人口眾多的西部欠發(fā)達地區(qū)之間很不一致，就是東部發(fā)達地區(qū)也有很大的差別，因此在考慮大眾的健康問題時，必須要采用適宜的醫(yī)學技術(shù)，將一些經(jīng)濟實用型技術(shù)廣泛引入貧困人群的疾病篩查中[7]。Cytospin TCT細胞學技術(shù)其保存液能很好保存宮頸各類病變細胞，在4 min內(nèi)可同時制作6～12張薄層長方形的細胞片，細胞分布均勻，巴氏染色效果好，尤其適合工作量大或體檢任務多的單位使用，避免單張制片的繁瑣[4]。在實際工作中體會到柏嘉公司這一套儀器及耗材經(jīng)濟、實惠，制片簡便快捷，細胞薄片達到TBS診斷標準的要求，非常實用于我國、尤其是西部欠發(fā)達地區(qū)開展宮頸癌篩查使用，可替代傳統(tǒng)的宮頸細胞涂片，造福于廣大的婦女同胞。

TCT是近十年發(fā)展起來的一項新的檢測技術(shù)，檢測方法有膜式法、沉淀法和離心法。膜式法制片過程分為3個步驟：（1）分散：是儀器旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)的過濾柱狀桶分離隨機聚合在一起的細胞微粒。（2）收集：輕微的負壓作用于濾膜上，將細胞吸附在濾膜表面。（3）轉(zhuǎn)送：過濾柱狀桶又轉(zhuǎn)到玻片上，由于細胞的自然吸附性和玻片的靜電作用，細胞對玻片比對濾膜更具附著力。玻片與濾膜分開并放入固定液容器中[7]。我們隨意用膜式法TCT檢測2009年的病例2000例，用離心法TCT檢測2011年的病例2000例，檢測結(jié)果對比分析發(fā)現(xiàn)，對LSIL、HSIL、鱗癌、非典型腺上皮、腺癌陽性檢出率和標本滿意率存在差異。膜式法與離心法的臨床取材方法步驟相同，標本保存都是濕保存，只是保存液的量不同，離心法的保存液10 ml量少使標本細胞濃度高，同時保存液有一定去除血液、黏液、非診斷性雜質(zhì)的作用，而膜式法保存液20 ml量多使標本細胞濃度低，我們認為這可能是導致兩法制片的滿意度差異大的重要原因。

對宮頸癌及癌前病變的檢出率Cytospin TCT離心法明顯高于膜式法TCT，許多病理界同道從不同方向研究得出類似結(jié)果。尤燕等研究認為Cytospin離心式液基薄層細胞學檢測（TCT）對宮頸癌和CIN的陽性檢出率高，因此可以把TCT作為首選的宮頸癌普查方法，不僅適用于體檢，而且具有重要的臨床實用價值[4]。孫藝等研究亦認為Cytospin TCT細胞技術(shù)能明顯提高宮頸異常細胞的檢出率，且與病理診斷有較高的一致性，是宮頸病變篩查的有效方法，具有重要的臨床實用價值[5-6]。任麗芳等用改良CytospinTCT作免疫組化得出改良cytospin法優(yōu)于TP （液基薄層制片法，Thinprep，TP）法行免疫細胞化學染色[5]。筆者完全贊同支持上述論文的觀點，20世紀中葉，第一臺Cytospin問世，作為液基細胞薄片制片儀，開創(chuàng)了細胞離心涂片機的先河。迄今，世界各地逾16 000多所實驗室在使用Cytospin。Cytospin以其獨特的制片原理，精確地控制細胞離心力并在限定區(qū)域內(nèi)作薄層制片，成為近40年來細胞學薄層制片技術(shù)倍受信賴的儀器。馬博文[7]教授亦撰文指出“離心法即Cytospin離心機式制片裝置，又稱細胞離心涂片機（Cytospin），是利用離心旋轉(zhuǎn)的原理制備細胞學涂片的一種儀器，由于其兼有離心、過濾、旋轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)送等綜合功能，成為細胞學實驗室必備的儀器設備”。

為何兩種方法在非典型腺上皮和腺癌的檢出率上存在明顯差異（P<0.05），筆者認為是制片方法不同所致，膜式法是通過儀器高速旋轉(zhuǎn)打散標本瓶內(nèi)的細胞，然后通過負壓將細胞吸在過濾薄膜上，再將薄膜上細胞印壓在玻片上。在儀器高速作用下，對腺上皮細胞的結(jié)構(gòu)容易破壞，這樣不利于對非典型腺上皮和腺癌細胞的辨認。而離心法是通過離心力分散、過濾、轉(zhuǎn)移標本中的細胞成分，使其在一限定范圍12 mm×20 mm形成細胞薄片，因此對細胞結(jié)構(gòu)破壞少，宮頸腺上皮病變比較容易發(fā)現(xiàn)（圖1、2）。因此，離心法TCT技術(shù)對診斷宮頸非典型腺上皮和腺癌病變有一定優(yōu)勢。從兩組研究結(jié)果分析可以看出，離心法TCT標本滿意率亦比膜式法高。宮頸癌及癌前病變陽性檢出率明顯優(yōu)于膜式法TCT。

圖1 左下圖腺細胞輕度異形

圖2 腺細胞明顯異形，組織活檢為腺癌

[1]郎景和.迎接宮頸癌預防的全球挑戰(zhàn)與機遇[J].中華婦科雜志，2002，50（37）：129-131.

[2]趙方輝，戎壽德，喬友林.宮頸癌及其癌前病變篩查方法現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)學科學院學報，2001，23（6）：638-641.

[3]陳江平，舒麗莎.陰道鏡在宮頸腫瘤篩查中的價值探討[J].河北北方學院學報（醫(yī)學版），2006，23（4）：15-17.

[4]尤燕，王利.2762例TCT檢測在宮頸病變早期診斷中的應用[J].吉林醫(yī)學，2011，32（13）：13-15.

[5]任麗芳，包磊，魯波，等.改良細胞離心涂片法在檢測宮頸液基細胞P16～（INK4a）中的應用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，17（13）：2026-2027.

[6]孫藝，李毅光，蘇永亮，等.2168例液基薄層細胞檢查在宮頸病變篩查中的應用探討[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2010，7（5）：36-39.

[7]馬博文.液基薄層細胞制片技術(shù)與宮頸細胞學診斷[J].診斷病理學雜志，2006，13（1）：1-7.