雷帕霉素對腎缺血再灌注大鼠肝臟功能和超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用

鄭傳東 茍 欣 張 力 胡興平

1.成都市第五人民醫(yī)院泌尿外科，四川成都 611130；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科，重慶 400016

雷帕霉素（RPM）是放線菌培養(yǎng)液中分離出來的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[1]，近年證明它是一種強(qiáng)有力的免疫抑制劑，已廣泛應(yīng)用于腎移植中[2]。腎移植、腎部分切除、腎盂積水、腎切開取石手術(shù)等多見腎缺血再灌注損傷。腎缺血再灌注亦可損傷遠(yuǎn)隔臟器如心、肝、肺的功能[3-5]；尤其對肝臟功能有明顯的損害[6]。本試驗建立大鼠腎損傷模型，觀察腎損傷對大鼠肝臟功能和形態(tài)的影響，探討雷帕霉素對肝臟功能和形態(tài)的影響及保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

雷帕霉素購自華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號2002HL0259，每毫升含RPM 1 mg。

1.2 實驗動物及分組

24只Wistar雄性大鼠，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心（合格證號：檢動字2002A040）。隨機(jī)分成假手術(shù)組（sham），手術(shù)組（IR），藥物組（RPM+IR），每組 8只大鼠。

1.3 腎缺血再灌注模型的建立及處理

建立腎損傷模型[6]：給予10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射，皮膚消毒。腹部正切口，切除右腎，分離左腎動脈，無損傷動脈夾夾閉，腎臟血流阻斷以腎臟顏色發(fā)白即可確認(rèn)。假手術(shù)組只分離左腎動脈，不夾閉。假手術(shù)組、手術(shù)組以等量生理鹽水代替藥物，以做陰性對照，藥物組于術(shù)前灌胃給藥RPM[4 mg/（kg·d）×3 d，術(shù)前 2 h 灌胃 ]。缺血 2 h 后，松開動脈夾，腎臟血流恢復(fù)，腎臟由蒼白變?yōu)榧t潤可確認(rèn)。各組再灌注4 h即為本試驗的模型。

1.4 生化指標(biāo)檢測

從大鼠心臟取血3 mL，離心后予-20 ℃凍存，檢測血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶（sAST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（sALT）活性。

1.5 肝、腎組織形態(tài)學(xué)觀察

取肝、腎組織，于4%的多聚甲醛固定，用石蠟包埋，3μm厚切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性的變化

表1顯示，與假手術(shù)組比較，手術(shù)組血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性顯著升高（P＜0.05）；與手術(shù)組比較，藥物組血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性顯著降低（P＜0.05）。

2.2 腎組織HE染色結(jié)果

假手術(shù)組腎組織結(jié)構(gòu)正常；手術(shù)組：部分近曲小管上皮細(xì)胞濁腫，腎皮質(zhì)及髓質(zhì)部充血，大量蛋白管型；藥物組：病變較手術(shù)組明顯減輕。

2.3 肝組織HE染色結(jié)果

假手術(shù)組正常；手術(shù)組：肝中央靜脈淤血，中央靜脈周圍肝細(xì)胞有點狀壞死，大量脂肪變性，炎癥細(xì)胞侵潤；藥物組：病變較手術(shù)組明顯減輕僅肝中央靜脈擴(kuò)張、淤血（見圖1，2）。

表1 大鼠血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性的變化（n=8，± s，%）

表1 大鼠血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性的變化（n=8，± s，%）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與手術(shù)組比較，#P＜0.05

組別 尿素氮（mmol/L）肌酐（μmol/L）谷丙轉(zhuǎn)氨酶（μmol/L）谷草轉(zhuǎn)氨酶（μmol/L）假手術(shù)組 4 h 5.8±0.3 50.7±9.8 12.1±0.4 33.5±7.9手術(shù)組 4 h 17.7±1.3* 103.5±12.6* 40.2±3.7* 81.8±15.8*藥物組 4 h 8.8±0.9# 71.6±10.2# 15.3±3.1# 41.3±8.6#

圖1 手術(shù)組4 h的肝組織HE染色（HE×400）

圖2 藥物組4 h的腎組織HE染色（HE×400）

3 討論

有文獻(xiàn)報道[3，7]，家兔和大鼠腎缺血再灌注損傷可造成心肌細(xì)胞凋亡和心臟功能的改變。人體內(nèi)最大的實質(zhì)性臟器是肝臟，受雙重血液供應(yīng)的唯一器官，血流量大，血液循環(huán)中有害物質(zhì)時極易被影響。腎缺血再灌注形成的血液中大量的毒性物質(zhì)對肝臟有明顯的損害。目前，臨床對腎缺血再灌注損傷，主要是關(guān)注本身臟器的損傷，而忽略了對遠(yuǎn)隔關(guān)聯(lián)臟器的損害。

本研究發(fā)現(xiàn)，與手術(shù)組比較，藥物組血清BUN、Scr含量、sALT、sAST活性顯著降低（P＜0.01）。手術(shù)組：光鏡下肝臟嚴(yán)重淤血，灶性壞死及大量細(xì)胞脂肪變性；電鏡下細(xì)胞與細(xì)胞發(fā)生融合，細(xì)胞與細(xì)胞間連接消失，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)消失，藥物組損害輕微。雷帕霉素對腎缺血再灌注大鼠肝臟功能和形態(tài)均有明顯的保護(hù)作用。

腎缺血再灌注致遠(yuǎn)隔臟器損傷與循環(huán)中細(xì)胞因子的增加有關(guān)[8]，雷帕霉素對腎缺血再灌注導(dǎo)致大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用機(jī)制未明。其可能作用機(jī)制是通過降低T細(xì)胞依賴性B細(xì)胞、T細(xì)胞本身及樹突狀細(xì)胞的活性，降低細(xì)胞因子的分泌，控制炎癥，自由基的生成減少，而大大降低了血液中的毒性物質(zhì)；控制內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等血管相關(guān)細(xì)胞的增殖改善腎、肝的微循環(huán)；減少腎、肝細(xì)胞凋亡等多種途經(jīng)來減輕腎、肝組織損傷的。其機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

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