高致病性藍耳病弱毒疫苗及滅活疫苗免疫效果的比較

梁 瑩 ，楊 莉

（1.四川省綿陽農(nóng)業(yè)學校，四川綿陽 621000；2.四川省綿陽市梓潼縣動物疫病預(yù)防與控制中心，四川綿陽 622150）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS，俗稱豬藍耳?。怯韶i繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的危害養(yǎng)豬業(yè)的一種重要傳染性疾病。該病主要造成仔豬呼吸道疾病等生長發(fā)育障礙和妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬精液品質(zhì)下降、攜帶PRRSV病毒等繁殖障礙[1]。1996年，郭寶清等人首次從國內(nèi)暴發(fā) PRRS 豬群流產(chǎn)胎兒中分離到 PRRSV，證明PRRSV在中國豬群內(nèi)確實存在。2006年，我國南方地區(qū)暴發(fā)了一場以“三高一低”（高熱、高發(fā)病率、高死亡率、低治療率）為特征、傳播迅速的高致病性藍耳?。℉P-PRRS），波及國內(nèi)25個省份，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[2]。PRRSV毒株分為美洲型和歐洲型，引發(fā)該病的高致病性PRRSV是由美洲株變異引起，分子水平的差異主要表現(xiàn)在NSP2基因缺失30個氨基酸[3]，該病毒具有抗原變異性、嗜巨噬細胞性、持續(xù)感染性以及抗體依賴性增強作用（ADE）等生物學特性，臨床上常與其他病原混合感染[4]。

目前，該病的發(fā)病機制和免疫機理尚不十分清楚，因此在實踐生產(chǎn)中難以取得令人滿意的防控效果，而疫苗免疫仍是該病最主要的防控途徑[5]。在疫苗的研發(fā)方面，先后有滅活和弱毒（活疫苗）等常規(guī)疫苗投入生產(chǎn)，與此同時，亞單位疫苗、活載體疫苗和 DNA 疫苗等新型疫苗也在積極的研究中。為比較滅活、弱毒兩種常規(guī)豬藍耳病疫苗的免疫效果，于2011年9—10月梓潼縣秋季防疫工作期間，對該縣32個鄉(xiāng)鎮(zhèn)使用不同種類豬藍耳病疫苗進行免疫并跟蹤調(diào)查，免疫28天后采集豬血清樣品進行免疫抗體檢測，通過滅活及弱毒疫苗免疫效果的分析對比，為豬藍耳病疫苗的選用和防控技術(shù)的建立提供參考。

1 材料方法

1.1 試驗分組

本試驗將注射不同PRRS疫苗及未注射疫苗的豬分為3組：（1）滅活組，對18個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)豬規(guī)模場注射PRRS滅活疫苗（廠家：中牧成都，批號：1107022）；（2）弱毒組，對剩下14個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)豬規(guī)模場注射PRRS活疫苗（廠家：中牧成都，批號：1107037-1）；（3）對照組，在所有32個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)豬規(guī)模場中保留少部分未注射PRRS疫苗的豬。集中免疫時間：2011年9月15日至10月15日；免疫對象：70~100日齡豬。

1.2 樣品采集

2011年11月10日至15日對本縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模場中的已免疫和未免疫豬分別進行前腔靜脈采血，將全血于冰箱內(nèi)冷藏2 h，3 000 r/min離心7 min分離制備血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 樣品檢測

使用豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒（廠家：武漢科前動物生物制品有限責任公司，批號：111011），對豬血清進行抗體檢測，操作步驟參照試劑盒說明書。

1.4 結(jié)果判定

將反應(yīng)完畢后的血清反應(yīng)板放入酶標儀（318MC型，上海三科儀器有限公司），讀取各孔630 nm吸光度OD（OD630nm）值。試驗成立條件是陽性血清對照孔平均OD630nm值≥0.7，陰性對照孔平均OD630 nm值＜0.3。樣品OD630 nm值≥0.3，判為陽性；樣品OD630 nm值＜0.3，判為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)分析

記錄3組血清抗體OD值并計算陽性率，利用SPSS 17.0軟件中的Duncan's test對各組樣本進行差異顯著性分析，P < 0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

表 1 不同PRRS疫苗免疫28天后的抗體檢測結(jié)果

表1顯示，兩種PRRS疫苗免疫及未免疫豬，均可檢測到PRRSV抗體，但陽性率各有不同：弱毒疫苗免疫后的抗體陽性率較高（94.55%），滅活組的陽性率居中（49.30%），對照組最低（19.09%）。未免疫豬血清及PRRS滅活疫苗、弱毒疫苗免疫后豬血清中的PRRSV抗體OD值分別為0.2232，0.3758，1.108；其標準誤也隨之增大（0.00875，0.01926，0.03483）。經(jīng)方差分析：滅活組免疫抗體OD值顯著高于對照組（P < 0.05），弱毒組的OD值顯著高于滅活組和對照組（P < 0.05）。

3 討論

3.1 PRRS滅活疫苗與弱毒疫苗的優(yōu)缺點

PRRS滅活疫苗主要用于經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬，預(yù)防因PRRS感染造成的繁殖障礙。它的優(yōu)點是安全性好，不存在病毒擴散和毒力返強等危險[6]；缺點是在滅活過程中主要的抗原決定簇易丟失，因而免疫次數(shù)多、免疫劑量和副作用大、免疫產(chǎn)生期長、免疫持續(xù)期短、不能快速激發(fā)細胞毒性 T 細胞反應(yīng)（CTL），因而不適合仔豬的PRRS免疫，通過滅活疫苗免疫豬群難以達到根除PRRSV的目的。

PRRS弱毒疫苗可以用于各年齡段豬，主要用于仔豬的免疫。它的優(yōu)點是注射劑量少、副反應(yīng)小、免疫產(chǎn)生期長、免疫持續(xù)期短、免疫效果優(yōu)于PRRS滅活疫苗。弱毒疫苗注入體內(nèi)的效果與感染野毒沒有多大差別，會像野毒一樣穿過胎盤侵害胎兒。如果疫苗的基因序列與某一群體存在的PRRSV基因序列相似性達到70%~80%時，會產(chǎn)生較好的免疫效果；如果基因序列相似性低且減毒不徹底，則可能引發(fā)新的藍耳病臨床感染。因此，PRRS弱毒疫苗存在著病毒擴散和毒力返強等安全性問題，限制了PRRS弱毒疫苗的臨床使用[6]。

3.2 PRRS滅活疫苗與弱毒疫苗對抗體水平的影響

朱良強等（2009）報道，仔豬藍耳病弱毒疫苗免疫效果優(yōu)于滅活疫苗免疫[7]。本試驗的結(jié)果表明，PRRS弱毒疫苗免疫后產(chǎn)生的抗體陽性率（94.55%）及OD值（1.108）均高于滅活疫苗（49.30%，0.375 8）（P< 0.05），這與前人的研究結(jié)果相似[8-9]；弱毒組OD值的標準誤（0.034 83）高于滅活組（0.019 26），表明弱毒組抗體水平的一致性較滅活組差。

影響PRRS免疫效果的因素很多。首先，PRRSV包括多種毒株亞型且毒株間的交叉保護免疫反應(yīng)小[10]，只有當疫苗的基因序列與群體中PRRSV相似性較高時，才能產(chǎn)生較好的免疫保護作用。另外，PRRSV特異性抗體水平的高低不能作為體液免疫水平的唯一評價指標，還存在細胞因子等諸多因素的影響。綜上所述，弱毒組的抗體水平雖然顯著高于滅活組，但其整齊度低于滅活疫苗，因此，不能判定弱毒疫苗在控制PRRS疫情方面優(yōu)于滅活疫苗。

對于豬藍耳病的防控，關(guān)鍵在于提高豬群PRRSV抗體的水平與整齊度[8]。PRRS疫苗的選擇應(yīng)視豬場不同的情況而定：種豬和陰性場應(yīng)該選用安全性高的滅活疫苗，而仔豬和陽性場則選用免疫效果好的弱毒疫苗。

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