阿折地平片的人體藥動學(xué)研究

舒成仁，衛(wèi)樂樂，葛苗苗（1.湖北黃石市中心醫(yī)院藥劑科，湖北黃石435000；.華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院藥劑科，武漢 4300）

阿折地平是一種新型二氫啶類鈣通道阻滯藥，它能擴張血管，降低外周血管和冠脈血管阻力，增加冠狀竇血流，改善心臟和肺的血液流動力學(xué)。對輕癥或中等癥狀原發(fā)性高血壓、腎障礙伴高血壓以及重癥高血壓患者的降壓作用較好。筆者通過測定健康志愿者口服阿折地平片后的血藥濃度，觀察其經(jīng)時變化過程，估算藥動學(xué)參數(shù)，為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-MS/MS系統(tǒng)，包括API-4000型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國Applied Biosystem Sciex公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀，包括Analyst 1.5.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國Agilent公司）；AUW2200精密天平（日本Shimadzu公司）；BR16型高速冷凍離心機（河北白洋離心機廠）；XW-80A微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）。

1.2 試藥

阿折地平片（江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每片8 mg，批號：20100120）；阿折地平對照品（江蘇云陽集團藥業(yè)有限公司，批號：20090316，純度：99.6%）；內(nèi)標(biāo)：哌羅匹隆對照品（山東中科泰斗化學(xué)有限公司，批號：090801，純度：99.57%）；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨為色譜純。

2 方法

2.1 色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：Phenomenex Kinetex C18（50 mm×2.1 mm，4.6 μm）、Phenomenex Security GuardTMC18預(yù)柱；流動相：甲醇-10 mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含1%甲酸）＝70∶30；流速：0.8 mL·min－1；進樣量：10 μL。

采用電噴霧（ESI）-多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）進行離子方式監(jiān)測，離子監(jiān)控條件：氣簾氣：25.00 psi；GAS1：60.0 psi；GAS2：60.0 psi；噴霧電壓：5 500 V；去溶劑濃度：500 ℃；Ihe：ON；碰撞氣（CAD）：6.00；射入電壓（EP）：10.00 V。阿折地平和內(nèi)標(biāo)哌羅匹隆的解簇電壓（DP）分別為80 V和150 V；碰撞能量（CE）分別為：36.8 eV和50 eV；用于檢測的離子反應(yīng)分別為m/z583.5→m/z167.2（阿折地平）和m/z427.5→m/z177.0（哌羅匹隆）。

2.2 受試者選擇

健康志愿者24名（男、女各半），受試者平均年齡為（23.75±2.02）歲，平均身高為（167.5±8.45）cm，平均體質(zhì)量為（59±7.6）kg。在研究開始前7天內(nèi)，每人接受1次全面體檢，合格者參加本試驗。受試前2周及試驗期間，不服用任何其他藥物。經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，本人簽署知情同意書。

2.3 分組與給藥方案

單劑量給藥：健康受試者24名，配對比較法隨機分組，即按性別、體重加以配對，隨機分為A組和B組，每組12人（男、女各半），A組受試者口服阿折地平片8 mg，B組口服16 mg。多劑量給藥：阿折地平片，每日8 mg，連續(xù)服7 d，每日07：30空腹用200 mL溫開水送服。

2.4 血樣采集

單劑量口服給藥：分別給予8 mg和16 mg藥物，并于給藥前0 h及給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36、48、72、96 h時收集血樣。多劑量口服給藥：8 mg單劑量給藥結(jié)束后即入組多劑量給藥試驗。多劑量給藥組每天服藥1次，每次8 mg，連續(xù)給藥7 d。于給藥后的第3、4、5、6天清晨服藥前采血，第7天服藥前及服藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36、48、72、96 h時收集血樣。于－70℃避光保存。

2.5 血樣處理

避光精密吸取血漿200 μL至2 mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)（100 μg·L－1哌羅匹?。┤芤?0 μL，混勻，加乙腈600 μL沉淀蛋白，渦旋混勻1 min，于15 000 r·min－1、4 ℃離心5 min，取上清液10 μL進樣測定，記錄色譜圖及化合物的峰面積，采用內(nèi)標(biāo)法進行定量。

2.6 方法學(xué)考察評價

2.6.1 特異性考察：取空白血漿樣品、空白血漿加待測物、受試者血漿樣品，將以上樣品按照“2.5”項方法處理并測定，色譜圖見圖1。結(jié)果顯示，阿折地平和內(nèi)標(biāo)哌羅匹隆的保留時間分別為1.4 min和0.7 min左右；干擾峰的峰面積小于最低定量限峰面積的20%，不影響測定的準(zhǔn)確度。

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及最低定量限：精密吸取人空白血漿180 μL，移至2 mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配成含阿折地平7種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿樣品，按“2.5”項方法處理并測定，記錄色譜圖。以阿折地平與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比（Y）以及加入濃度（X），進行線性擬合，權(quán)重系數(shù)為1/Y2，求得的直線回歸方程：Y＝0.704 3X+0.012 23（r＝0.998 4），結(jié)果表明，阿折地平血藥濃度在0.05～40.00 μg·L－1范圍內(nèi)線線性關(guān)系良好。阿折地平在血漿中的最低定量限為0.05 μg·L－1。

2.6.3 回收率與精密度考察：阿折地平高、中、低3種質(zhì)量濃度（0.1、4、30 μg·L－1）的日內(nèi) RSD 分別為 3.263%、3.308%、2.735%，日間RSD分別為8.365%、7.273%、4.840%，提取回收率在101.41%～102.17%之間，相對回收率在94.63%～97.24%之間，符合生物樣品分析要求。

2.6.4 介質(zhì)效應(yīng)考察：阿折地平3種不同濃度質(zhì)控樣品的介質(zhì)效應(yīng)分別為94.90%、97.69%、101.68%，內(nèi)標(biāo)的介質(zhì)效應(yīng)為102.66%。在5種不同來源的空白血漿中介質(zhì)效應(yīng)基本恒定在85%～115%范圍之間。

2.6.5 穩(wěn)定性考察：阿折地平不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿樣本（每個濃度做3份樣本，長期穩(wěn)定性5份），按”2.5”項所述方法處理并測定，考察血漿樣本于不同保存條件下的穩(wěn)定性?？疾旖Y(jié)果顯示，處理后的樣本于自動進樣器4℃避光放置4 h、室溫下避光放置4 h、反復(fù)凍融3次和－70℃避光保存56 d的情況下穩(wěn)定。

圖1 典型圖譜A.空白血漿；B.空白血漿+0.05 μg·L－1阿折地平對照品溶液+25 μg·L－1內(nèi)標(biāo)溶液；C.健康受試者1號口服阿折地平8 mg后4 h的血漿樣品+25 μg·L－1內(nèi)標(biāo)溶液；Ⅰ.阿折地平；Ⅱ.哌羅匹隆Fig 1 Typical spectrumA.blank plasma；B.blank plasma+azelnidipine control（0.05 μg·L－1）+internal standard（25 μg·L－1）；C.plasma sample obtained from a healthy volunteer at 4 h after oral administration of azelnidipine 8 mg+internal standard（25 μg·L－1）；Ⅰ.azelnidipine；Ⅱ.perospirone

2.7 數(shù)據(jù)處理

采用非房室模型計算受試者給藥后的藥動學(xué)參數(shù)。用SPSS 15.0軟件包進行方差分析（ANOVA），顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。單劑量給藥2個劑量組間及與多劑量給藥組間藥動學(xué)參數(shù)的比較：AUC0～96h、AUC0～∞、cmax經(jīng)劑量校正后采用方差分析；tmax、t1/2直接采用方差分析。

3 結(jié)果

3.1 單劑量與多劑量口服阿折地平片的藥動學(xué)參數(shù)

單劑量給藥后各劑量組多數(shù)受試者符合二室模型，藥動學(xué)參數(shù)按照二室模型擬合，各主要藥動學(xué)參數(shù)詳見表1（表中，＊表示單劑量組間比較；#表示多劑量組（8 mg）與單劑量組（8 mg）比較）；單劑量給藥后阿折地平的平均藥-時曲線詳見圖2；單劑量和多劑量口服阿折地平片停藥后平均藥-時曲線見圖3。

3.2 單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學(xué)參數(shù)

單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學(xué)參數(shù)比較見表2。

4 討論

阿折地平遇光易發(fā)生光歧化反應(yīng)，故所有操作都應(yīng)在遮光條件下進行。本試驗建立的阿折地平液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法，樣品提取操作較簡便、靈敏度高、樣品穩(wěn)定性及回收率等均符合生物樣本測定要求、專屬性強，適合阿折地平藥動學(xué)及生物等效性研究[1，2]。

2組12名健康受試者分別單劑量口服給藥8、16 mg后所得的藥動學(xué)以非房室模型計算藥動學(xué)參數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，t1/2、AUC0～96h、cmax、AUC0～∞經(jīng)劑量校正后各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明在8～16 mg劑量范圍內(nèi)本品基本呈線性藥動學(xué)特征。試驗過程中受試者在生命體征、自主癥狀、生化指標(biāo)等方面未見異常，表明阿折地平在此劑量范圍內(nèi)，在中國健康受試者中具有良好的耐受性。

多劑量口服給藥后所得的藥動學(xué)以非房室模型計算，與等劑量單次給藥動學(xué)參數(shù)比較，除t1/2、CLz/F外，其他參數(shù)均無顯著性差別，說明本品每天給藥1次的給藥方法在中國人體內(nèi)幾無蓄積作用。健康受試者的藥動學(xué)行為及藥-時曲線與國外文獻報道的同種產(chǎn)品基本一致[3]。

本試驗結(jié)果表明，各組主要藥動學(xué)參數(shù)在受試者的性別方面表現(xiàn)為單劑量口服低劑量組除Vz/F外，其余參數(shù)均有顯著性差別（P＜0.05）；單劑量口服16 mg組t1/2以及多劑量口服8 mg組t1/2、cmax存在顯著性差別，其他參數(shù)無顯著性差別。阿折地平單劑量給藥低劑量組男、女存在一定差異，高劑量及多劑量給藥組基本不存在顯著性差異。

表1 單劑量和多劑量口服阿折地平片后的藥動學(xué)參數(shù)（n＝12）Tab 1Pharmacokinetic parameters of azelnidipine after single and multi-oral oral dose ofAzelnidipine tablet（n＝12）

圖2 單劑量給藥后阿折地平的平均藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of azelnidipine after single oral dose

圖3 單劑量和多劑量口服阿折地平片停藥后平均藥-時曲線Fig 3 Mean plasma concentration-time curve of azelnidipine after stopping taking single and multiple oral dose

表2 單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學(xué)參數(shù)比較（n＝6）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters of azelnidipine between male and female after single and multiple oral dose ofAzelnidipine tablet（n＝6）

[1]Li D，Li L，Peng CM.Determination of azelnidipine in human plasma by liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007，43（2）：575.

[2]Kuramoto K，Ichikawa S，Hirai A，et al.Azenidipine and amlodipine：a comparison of their pharmacokinetics and effects on ambulatory blood pressure[J].Hypertens Res，2003，26（3）：201.

[3]Kiyoshi K，Yoko U.Simultaneous determination of azelnidipine and two metabolites in human plasma using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B，2006，844（1）：45.