2種奧卡西平片的人體生物等效性研究

李緒春，徐富培，周遠大（1.綿陽市中心醫(yī)院藥劑科，四川綿陽61000；.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院藥學部，重慶 400016）

奧卡西平是卡馬西平的衍生物，自2000年1月獲得美國FDA批準上市以來，因患者耐受性好、對肝藥酶誘導及自身誘導作用小、與其他藥物之間的相互作用較少，已在50多個國家應用于癲癇的治療，取得了良好的效果[1～3]。為評價山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術開發(fā)有限公司研制的奧卡西平片在健康男性受試者的藥動學特征及與市售奧卡西平片（曲萊片，瑞士諾華公司）是否等效，本文建立了可靠的血藥濃度測定方法，并對其藥動學及生物等效性進行了研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括LC-10泵系統(tǒng)、SPD-10A型可調波長紫外檢測器、C-R7Ae plus積分儀（日本島津公司）；無油真空泵（奧特賽恩斯儀器有限公司）；VXH-3微型渦旋混合器（上海躍進醫(yī)療器械廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海儀表（集團）供銷公司）；B160型醫(yī)用低速離心機（安新縣白洋離心機廠）；超聲波清洗器（奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

受試制劑：奧卡西平片（國產片，山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術開發(fā)有限公司，規(guī)格：每片300mg，批號：030420，含量：99.6%）。參比制劑：奧卡西平片（曲萊片，進口片，瑞士諾華公司，規(guī)格：每片300mg，批號：SB1100，進口藥品注冊證號：H20030293）；奧卡西平（OCBZ）對照品（山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術開發(fā)有限公司，批號：030301，純度：99.6%）；內標：地西泮（DZP，湖北制藥廠，批號：030703，純度：98.5%）；二氯甲烷為色譜純，甲醇、醋酸銨、磷酸、三乙胺均為分析純，水為三次蒸餾水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18（200mm×5.0mm，5μm）；流動相：甲醇∶0.1mol·L－1醋酸銨溶液（用H3PO4調pH值至約4.8）∶三乙胺（V/V）＝60∶40∶0.1；流速：流量時間程序（0～4.2min：0.8m L·min－1；4.2～10min：1.5m L·min－1）；固定進樣量：50μL；紫外檢測波長：2 58 nm；內標：DZP；柱溫：25℃。

2.2 標準溶液的配制

準確稱取OCBZ對照品44.9mg，用適量甲醇溶解，置于50 m L量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為898μg·m L－1的OCBZ標準貯備液；使用時用甲醇稀釋為44.9μg·m L－1的工作濃度。另準確稱取DZP對照品40.5mg，用適量甲醇溶解，置于50m L量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即為810μg·m L－1的DZP標準貯備液；使用時用甲醇稀釋為8.1μg·m L－1的工作濃度。

2.3 受試者選擇

18名男性健康志愿者，漢族，平均年齡（22.6±1.46）歲，平均體重（59.6±5.24）kg，平均身高（172.6±4.54）cm。試驗前所有受試者經肝功能、腎功能、血壓、心電圖檢查均正常。根據國家食品藥品監(jiān)督管理局新藥臨床研究批件（批件：2003L 00990），經綿陽市中心醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，18名健康男性受試者在知情情況下填寫知情同意書。

2.4 給藥方案及血樣采集

采用隨機交叉試驗設計，單劑量口服給藥。將18名受試者隨機分為A、B組，每組9名，在Ⅰ、Ⅱ階段分別交叉服藥，交叉服藥前經2周清洗期。試驗前禁食12 h后，于次日晨8時空腹吞服國產片或進口片300mg（200m L溫開水服藥）。服藥當日統(tǒng)一進標準餐（服藥4 h后進早餐）。受試期間禁止劇烈活動、吸煙、飲酒及含酒精、咖啡因類飲料，試驗期間禁止使用一切非試驗藥物，并由醫(yī)護人員進行健康監(jiān)護。采集服藥后0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、36.0、48.0 h時靜脈血3.0m L，分離血漿，低溫（－20℃）保存，及時測定。間隔2周后交換口服另一種制劑，按前述方法采取靜脈血。

2.5 血漿樣品處理

取受試者血漿1.0m L，加內標（8.1μg·m L－1DZP）溶液50 μL，加0.2mol·L－1碳酸鈉0.2m L，加二氯甲烷4m L，旋搖1 min，3 000 r·min－1離心 3min，取有機層置于50℃水浴中用氮氣吹干，100μL流動相復溶，進樣30～50μL。

2.6 統(tǒng)計方法學

采用3p97軟件，計算各個體的藥動學參數，cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算。對2種片劑的AUC、cmax、tmax以方差分析、雙單側t檢驗、1－2α置信區(qū)間法進行統(tǒng)計分析，判斷生物等效性。

3 結果

3.1 方法專屬性

配制含OCBZ和DZP的對照品溶液直接進樣，得色譜圖1A；取空白血漿，除不加OCBZ和DZP外，其余按“2.5”項下方法處理，得空白血漿色譜圖1B；取OCBZ溶液工作濃度加入空白血漿中，按“2.5”項下方法處理，得色譜圖1C；取受試者單劑口服300mg受試制劑2 h后血漿按“2.5”項下方法處理得色譜圖1D。在本試驗所選定的色譜條件下，血漿中OCBZ與內標DZP及血漿中內源性雜峰分離良好，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.OCBZ對照品溶液；B.空白血漿；C.空白血漿+OCBZ對照品溶液+內標溶液；D.受試者服藥300mg后2 h血漿樣品圖Fig 1 HPLC chrom atogram sA.OCBZ control；B.blank plasma；C.blank plasma+OCBZ control+internal standard；D.volunteer’s plasma 2 h after oral administration of 300mg oxcarbazepin

3.2 標準曲線與最低定量濃度

在空白血漿中分別添加2.245、1.122 5、0.561 2、0.280 6、0.140 3、0.070 2、0.035 1μg·m L－1的OCBZ，按“2.5”項下方法進行處理和測定，記錄色譜。以OCBZ面積/DZP面積比（Y）對OCBZ濃度（X）以最小二乘法進行線性回歸，得回歸方程Y＝2.462 8X－0.100 3（r＝0.999 4，n＝5）。結果表明，OCBZ血藥濃度在0.035 1～2.245μg·m L－1范圍內線性關系良好。最低定量濃度為0.035 1μg·m L－1（RSD＝10.19%，n＝5）[4]。

3.3 回收率及精密度試驗

配制濃度分別為0.070 2、0.280 6、1.122 5μg·m L－1的OCBZ血漿樣品，按“2.5”項下方法操作，每一濃度平行操作5份，以測得量與實際加入量比值計算方法回收率，并考察日內精密度。同法配制濃度分別為0.070 2、0.280 6、1.122 5μg·m L－1的OCBZ血漿樣品，連續(xù)5 d測定，考察日間精密度。精密度及回收率試驗結果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結果Tab 1 Resultsof precision and recovery tests

3.4 穩(wěn)定性考察

將含藥血漿反復冷凍（－20℃）、融化，按“2.5”項下方法處理測定，5 d內測定5次。結果表明，血漿樣品5 d內反復凍融穩(wěn)定性良好（（0.14±0.008 4）μg·m L－1，RSD＝6.00%）。

3.5 平均藥-時曲線

根據測定結果得2種片劑在18名受試者血漿中平均藥-時曲線，見圖2。

圖2 18名健康受試者單劑量口服300mg奧卡西平國產片或進口片后的平均藥-時曲線Fig 2 Mean p lasma concentration-time curves of dom estic and imported Oxcarbazepine tablets in 18 healthy human volunteersafter a single oraladministration of300mg

3.6 藥動學參數及生物利用度

采用3p97計算機軟件（中國數學藥理學會），計算各個體的藥動學參數，cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算。取值范圍0～th。采用各受試者的國產片與進口片的AUC0～48h分別計算相對生物利用度（F），有關藥動學參數見表2。

表2 2種奧卡西平片在人體內的藥動學參數比較（n＝22）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters of 2 kindsofOxcarbazepine tablets in healthy volunteers（n＝22）

3.7 生物等效性評價

用雙單側t檢驗分析2種制劑的cmax和AUC0～48h，t1、t2均有顯著性差異（P＜0.05）；1－2α（α＝0.05）置信區(qū)間分別為73.18%～119.15%和85.76%～102.66%，表明2種制劑的cmax和AUC0～48h均生物等效（α＝0.05）。tmax用非參數統(tǒng)計分析（Wilcoxon法），結果表明兩制劑間差異無顯著性（P＞0.05）。以上結果表明兩制劑生物等效。

4 討論

本研究采用高效液相色譜-紫外（HPLC-UV）法測定人血漿中OCBZ濃度，以DZP為內標，其方法回收率在90%以上。HPLC-UV法測定時流動相以甲醇-醋酸銨溶液（60∶40）為基礎，添加適量的三乙胺有利于消除主峰拖尾，使峰形良好；方法學研究亦表明其靈敏度、重復性均較好，能滿足臨床藥動學及生物等效性研究的要求。

18名健康男性受試者單劑量空腹口服2種片劑300mg后，血漿中平均濃度與變化趨勢相似，屬一室藥動學模型；分別于（5.67±2.45）h和（5.17±2.33）h達到峰值（0.50±0.13）μg·m L－1和（0.56±0.20）μg·m L－1；平均消除半衰期分別為（15.21±4.04）h和（14.51±3.06）h，在體內滯留時間較長，與文獻報道相近[5，6]。由圖2和表1亦可見，2種奧卡西平片在人體內吸收、分布、消除較為接近，國產片的相對生物利用度為（94.81±14.21）%。本試驗為國產奧卡西平片的臨床應用提供了依據。

[1]喻東山.奧卡西平臨床應用的安全性[J].藥物不良反應雜志，2007，9（2）：105.

[2]陳巧彬，陳 瑯，姜 迪，等.奧卡西平治療癲癇84例[J].實用兒科臨床雜志，2012，27（4）：291.

[3]陸志城，余清聲.奧卡西平的藥代動力學及其立體選擇性[J].中國臨床藥理學雜志，2003，19（2）：1 340.

[4]曾經澤.生物藥物分析[M].北京：北京醫(yī)科大學中國協和醫(yī)科大學聯合出版社，1998：214.

[5]杜 蓉，陳 娟.國產奧卡西平分散片的人體生物等效性研究[J].中國藥房，2010，21（18）：1 672.

[6]張 玲，桂 玲，劉 宇.國產奧卡西平片的人體生物等效性考察[J].中國藥師，2010，13（1）：1 586.