IL－8－251A/T多態(tài)性與肝癌相關性

侯 波 裴銳鋒 (吉林省人民醫(yī)院急診外科，吉林 長春 3002)

白細胞介素(IL)－8是趨化因子CXC家族一員，是巨噬細胞和上皮細胞等分泌的細胞因子。大量正常細胞和腫瘤細胞均表達IL－8，主要作用是啟動炎癥反應，且在腫瘤生長、血管生成、侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用〔1，2〕。IL－8 基因啟動子區(qū)－251位點存在一個功能性單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點，即 IL－8－251A/T，攜帶A等位基因的個體IL－8水平明顯增加〔3〕。目前，多項流行病學研究已經(jīng)證實該多態(tài)性位點與多種腫瘤，包括中國臺灣地區(qū)肝癌、胃癌、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌和肺癌等發(fā)病相關〔4，5〕。本研究調查 IL－8－251A/T 多態(tài)性與中國東北地區(qū)肝癌相關性，旨在為揭示肝癌發(fā)病機制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源 我院普外科肝癌患者229例，男157例，女72例，平均(61.5±13.0)歲，均經(jīng)組織病理學證實。其中，臨床Ⅰ～Ⅱ期136例，Ⅲ～Ⅳ期93例;高分化128例，低分化101例;有轉移135例，無轉移94例;HBsAg陽性117例，HBsAg陰性112例。243例健康對照人群來自我院體檢中心，男170例，女73例，平均(60.6±13.3)歲，體檢各項指標均正常，無腫瘤家族史及肝炎、肝硬化等肝臟疾病。研究對象均為無血緣關系的漢族個體。

1.2 DNA提取及引物合成 取外周靜脈抗凝血2 ml，－20℃低溫保存，運用全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA(北京百泰克公司)。參照文獻〔6〕設計引物，上游引物:5′－ATCTTGTTCTAACACCTGCCACTCT－3′，下游引物:5′－ TAAAATACTGAAGCTCCACAATTTGG－3′。引物由上海生工技術有限公司合成。

1.3 IL－8－251A/T多態(tài)性分型 采用聚合酶鏈反應－限制性片段長度多態(tài)性(PCR－RFLP)對 IL－8－251A/T多態(tài)性進行分型。PCR 反應體系為 25 μl，其中包括基因組 DNA 1.5 μl，上、下游引物各 0.25 μl，10 × 反應緩沖液 3.0 μl，dNTPs 2.5 μl，Mg2+1.5 μl，TaqDNA 聚合酶 1.0 U，無菌去離子水補足 25 μl。PCR擴增條件:94℃預變性4 min;94℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，35個循環(huán)。PCR擴增產(chǎn)物采用限制性內切酶MfeⅠ酶切消化。8%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，硝酸銀染色，分析判讀結果:TT基因型有121 bp一條帶，AT基因型有121、82和39 bp三條帶，AA基因型有82和39 bp兩條帶，其中39 bp跑至膠外。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，直接計數(shù)法計算基因型和等位基因在肝癌組和對照組中的分布，各組基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組IL－8－251A/T多態(tài)性基因型頻率和等位基因分布比較 兩組IL－8－251A/T多態(tài)性TT、AT和AA基因型頻率及等位基因分布差異不顯著(P＞0.05)(表1)。

表1 兩組IL-8-251A/T多態(tài)性比較〔n(%)〕

2.2 IL－8－251A/T多態(tài)性與肝癌臨床特征的相關性 根據(jù)臨床分期、分化程度、轉移和HBsAg狀態(tài)進行分層分析，發(fā)現(xiàn)HBsAg陰性肝癌患者中TT基因型分布明顯高于HBsAg陽性患者(P=0.002);未發(fā)現(xiàn) IL－8－251A/T多態(tài)性與臨床分期、分化程度和轉移狀態(tài)具有明顯相關性(P＞0.05)(表2)。

表2 IL-8-251A/T多態(tài)性與肝癌臨床特征的相關性〔n(%)〕

3 討論

肝癌的危險因素包括乙肝病毒感染、飲酒、長期接觸致癌物等。然而，并非接觸危險因素的個體全部患肝癌，存在個體差異，肝癌易感性研究有助于闡明個體差異的分子基礎。

Gao 等〔5〕運用 meta 分析未發(fā)現(xiàn) IL－8－251A/T 多態(tài)性明顯增加或降低腫瘤發(fā)病風險。Chien等〔4〕調查了131例中國臺灣地區(qū)肝癌患者和340例正常對照組IL－8－251A/T多態(tài)性，未發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與肝癌發(fā)病相關。本研究亦未發(fā)現(xiàn)IL－8－251A/T多態(tài)性與中國東北地區(qū)肝癌發(fā)病呈明顯相關，IL－8－251TT基因型降低了中國東北地區(qū)HBsAg陽性患者肝癌發(fā)病風險。以往研究顯示乙肝病毒感染患者血清中IL－8水平明顯高于正常對照人群，乙肝病毒相關的肝癌細胞株中亦檢測到高水平IL－8〔7〕。提示IL－8－251TT基因型可能通過血清中IL－8表達量的不同參與肝癌發(fā)生發(fā)展。

綜上，IL－8－251A/T多態(tài)性可作為乙肝病毒感染患者肝癌發(fā)病率的一個分子遺傳學標記物。多中心、大樣本量的深入研究將有助于為肝癌風險預測和個體化用藥提供一條新途徑。

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5 Gao LB，Pan XM，Jia J，et al.IL－8－251A/T polymorphism is associated with decreased cancer risk among population－based studies:evidence from a meta－analysis〔J〕.Eur J Cancer，2010;46(8):1333－43.

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