人絨毛膜促性腺激素對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠乳腺癌化學(xué)預(yù)防作用的分析

劉 藝，王 菡，陸 迪

(牡丹江醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室，黑龍江牡丹江157000)

通過(guò)人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadochopin，hCG)仿照妊娠可使乳腺組織結(jié)構(gòu)更充分分化，從而預(yù)防乳腺癌的發(fā)生。類(lèi)似于他莫昔芬(tamoxifen，TAM)的抗雌激素藥已確定為能夠有效預(yù)防乳腺癌［1］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)于各個(gè)時(shí)段采用hCG來(lái)預(yù)防乳腺癌進(jìn)行討論研究，將hCG和TAM所產(chǎn)生的預(yù)防作用進(jìn)行對(duì)比分析。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象 選取未經(jīng)產(chǎn)的SD雌性大鼠50只，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，國(guó)標(biāo)鼠料飲食，濕度40%～50%，溫度(22±2)℃。50只大鼠隨機(jī)分為hCG早干預(yù)組，hCG晚干預(yù)組，TAM組，暴露組，空白對(duì)照組各10只。

1.2 方法 hCG早干預(yù)組:自50 d齡開(kāi)始，向腹腔內(nèi)每天注射 hCG 100 U，共注射 21 d，在 134、141、217、262日齡向腹腔中注射甲基亞硝脲50 mg/kg的致癌劑。hCG晚干預(yù)組:從92日齡開(kāi)始，每天向腹腔中注射 100 U hCG，共注射 21 d，在 134、141、217、262日齡開(kāi)始向腹腔中注射50 mg/kg致癌劑甲基亞硝脲。TAM組:自92 d開(kāi)始，每天在大鼠皮下注射1 mg/kg的 TAM，共注射 21 d，在 134、141、217、262 日齡分別向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亞硝脲致癌劑。暴露組:于134、141、217、262日齡向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亞硝脲致癌劑?？瞻讓?duì)照組:不進(jìn)行藥物治療。于276日齡將5組大鼠全部處死。

1.3 病理學(xué)檢查 將空白對(duì)照組所處死的大鼠，從頸部到腹股溝進(jìn)行備皮以后，取下全塊頸部到腹股溝中皮膚的皮下乳腺組織，用甲醛(10%)對(duì)其進(jìn)行固定3 h后，將梯度乙醇進(jìn)行脫水處理，二甲苯透明，包埋，浸蠟，切成厚度大致為 4 μm片狀，然后進(jìn)行HE染色，最后將其進(jìn)行封片。將其于100倍的顯微鏡下進(jìn)行觀察，將5組中全部大鼠乳腺通過(guò)隨機(jī)選擇的方法取3個(gè)視野，與常用的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照，對(duì)成熟小葉(lobule，Lob)、泡狀芽苞(alvedar buds，AB)、終末導(dǎo)管(terminalduct，TD)以及終末芽苞(terminal end buds，TEB)的結(jié)構(gòu)數(shù)目進(jìn)行分別計(jì)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，大鼠成癌情況比較采用Fisher確切概率法，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 5組大鼠成癌情況比較 各組均有乳腺腫瘤發(fā)生，肉眼可見(jiàn)的腫瘤最大直徑約1.8 cm，最小直徑約0.5 cm。hCG早干預(yù)組與暴露組的成癌率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與TAM組的成癌率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。hCG晚干預(yù)組與暴露組的成癌率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(表1)。

表1 5組大鼠成癌情況比較

2.2 5組大鼠乳腺的 TEB、TD、AB、Lob 構(gòu)成比較5組大鼠乳腺TEB、TD、AB和Lob構(gòu)成比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.04，P ＜0.05)。hCG 早、晚干預(yù)組與暴露組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.65、5.29，P ＜0.05)，Lob、AB 比例高于暴露組，而 TD、TEB 比例低于暴露組(表2)。

表2 5組大鼠乳腺的TEB、TD、AB、Lob構(gòu)成情況

3 討論

在臨床、流行病學(xué)和通過(guò)實(shí)驗(yàn)而取得的數(shù)據(jù)都表明，人類(lèi)患乳腺癌離不開(kāi)機(jī)體中內(nèi)分泌的環(huán)境以及生育情況。與未經(jīng)產(chǎn)的女性相比，經(jīng)產(chǎn)女性發(fā)生乳腺癌的概率較小，而且早期的妊娠與晚期的妊娠女性相比發(fā)生的概率也較小，妊娠的次數(shù)與發(fā)生乳腺癌概率呈反比［2］。這種早期足月妊娠保護(hù)乳腺的效果不僅在人類(lèi)中有所體現(xiàn)，而且實(shí)驗(yàn)性的動(dòng)物模型同樣具有該特征。

本組資料顯示，hCG早干預(yù)組與暴露組的成癌率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明較早進(jìn)行hCG干預(yù)是可以預(yù)防大鼠乳腺癌的發(fā)生，并且hCG早干預(yù)組與TAM組的成癌率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明hCG的預(yù)防作用與TAM是相當(dāng)?shù)?。hCG晚干預(yù)組與暴露組的成癌率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。從數(shù)據(jù)上可以看出，hCG晚干預(yù)組相對(duì)于暴露組，仍然有降低大鼠乳腺癌發(fā)生的趨勢(shì)。

本研究對(duì)大鼠的乳腺組織的類(lèi)型進(jìn)行了深層次的觀察，hCG的早、晚干預(yù)組與暴露組大鼠的乳腺組織中的TD、TEB、AB以及Lob結(jié)構(gòu)比例相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大鼠患乳腺癌的概率與乳腺組織中期分化成熟的程度密切相關(guān)。

hCG的早、晚干預(yù)組中，大鼠的乳腺組織在分化上已經(jīng)完全成熟，其與暴露組相比，在AB以及 Lob的結(jié)構(gòu)上比例更大，而TEB以及TD的比例更小，Lob結(jié)構(gòu)的比例顯著增加，TD結(jié)構(gòu)的比例顯著降低，這說(shuō)明hCG的早、晚干預(yù)組中，乳腺的發(fā)育已經(jīng)十分成熟，造成其對(duì)致癌劑相對(duì)不敏感，這樣hCG的早、晚干預(yù)組與暴露組比較患乳腺癌的概率更低。

TAM組大鼠的乳腺的結(jié)構(gòu)比率近似于暴露組，其TD結(jié)構(gòu)都十分高，而Lob結(jié)構(gòu)都十分低，TAM乳腺癌出現(xiàn)的比例與暴露組相比明顯較低，其可能原因是hCG和TAM對(duì)乳腺癌進(jìn)行預(yù)防的機(jī)制不同，在TAM下乳腺結(jié)構(gòu)并未達(dá)到成熟階段，競(jìng)爭(zhēng)性將雌激素的受體進(jìn)行控制進(jìn)而將患乳腺癌的概率降低?？瞻讓?duì)照組中大鼠乳腺并沒(méi)有完全發(fā)育，TD結(jié)構(gòu)的比例仍然很高，Lob的結(jié)構(gòu)比例較少，如致癌劑對(duì)其進(jìn)行攻擊，癌變的概率仍然很大。

hCG將乳腺最后變?yōu)槌墒斓氖侄危两襁€沒(méi)有確定。常規(guī)乳腺癌細(xì)胞、乳腺組織和卵巢中均有hCG受體，而乳腺作用中hCG直接作用或hCG作用于卵巢后提高了雌、孕激素的指標(biāo)，在孕激素以及雌激素作用下將乳腺變成熟的機(jī)制至今還不明確［3］。有進(jìn)行體外細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)表明，hCG對(duì)乳腺的癌細(xì)胞將產(chǎn)生直接的作用，將增殖的概率降低。另外，關(guān)于動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)表明，大鼠進(jìn)行短時(shí)間、低劑量的使用孕、雌激素將對(duì)患乳腺癌的可能性起到直接降低的作用，而大劑量、長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的使用孕、雌激素可使大鼠患乳腺癌概率增高。

hCG結(jié)合hCG受體共同作用下可使乳腺的癌細(xì)胞凋亡。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道，妊娠或者h(yuǎn)CG就是分支乳腺組織，并在發(fā)育上朝著小葉的方向，而單純的孕激素與雌激素就是增殖乳腺末端結(jié)構(gòu)TEB，而且孕激素+雌激素與hCG對(duì)大鼠分別作用后其乳腺組織中具有不同的基因表型［4］。這些實(shí)驗(yàn)都證實(shí)了hCG將直接保護(hù)乳腺組織，并非全部靠孕、雌激素，且在對(duì)乳腺癌進(jìn)行預(yù)防時(shí)，hCG作為其預(yù)防藥物為最佳選擇。

雖然大鼠乳腺與人類(lèi)乳腺在發(fā)展上不能完全進(jìn)行統(tǒng)一，但是應(yīng)視大鼠的各個(gè)發(fā)育階段中成癌狀況對(duì)人類(lèi)乳腺進(jìn)行進(jìn)一步分析，很多小型臨床試驗(yàn)在hCG應(yīng)用方面進(jìn)行探索與研究。hCG的使用在預(yù)防乳腺癌方面應(yīng)該是一種值得推廣的措施，與傳統(tǒng)預(yù)防的措施相比，優(yōu)勢(shì)更加明顯。hCG是由自體產(chǎn)生的，具有微小的不良反應(yīng)，在分化乳腺法上所用的時(shí)間更短，可以對(duì)腺癌的發(fā)生進(jìn)行有效地預(yù)防［5］。hCG對(duì)乳腺癌的預(yù)防要有合適人群，其用量以及作用時(shí)間的確定對(duì)開(kāi)展乳腺癌的一級(jí)預(yù)防有重要作用。

［1］陳中揚(yáng)，李文萍，王頎.甲基亞硝脲快速誘導(dǎo)大鼠乳腺原位癌模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14(9):657-659.

［2］Lopez D，Sekharam M，Coppola D，et al.Purified human chorionic gonadotropin induces apoptosis in breast cancer［J］.Mol Cancer T-her，2008，7(9):2837-2844.

［3］Pourhoseingholi MA，Mehrabi Y，Alavi-Majd H，et al.Association between risk of breast cancer and fertility factors—a latentvariable approach［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2008，9(2):309-312.

［4］Jacobson HI，Lemanski N，Agarwal A，et al.A proposed unified mechanism for the reduction of human breast cancer risk bythe hormones of pregnancy［J］.Cancer Prev Res，2010，3(2):212-220.

［5］Kocdor H，Kocdor MA，Russo J，et al.Human chorionic gonadotropin(hCG)prevents the transformed phenotypes induced by17 betaestradiol in human breast epithelial cells［J］.Cell BiolInt，2009，33(11):1135-1143.