高效液相色譜法測定橘紅痰咳液中柚皮苷的含量

李 慧

山東省淄博市婦幼保健院藥劑科，山東 淄博 255000

橘紅痰咳液為本院制劑，由化橘紅、蜜炙百部、苦杏仁、茯苓、制半夏、五味子、甘草7味藥物組成，具有理氣祛痰、潤肺止咳之功效，用于感冒、支氣管炎、咽喉炎引起的痰多咳嗽、氣喘等。其中化橘紅為君藥，柚皮苷為化橘紅的主要有效成分之一，參照相關(guān)文獻[1-6]，本文通過系統(tǒng)的方法學考察，建立了該制劑中柚皮苷的HPLC含量測定方法，并在此基礎上測定了柚皮苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括Lab Alliance型恒流泵、Waters966二極管陣列檢測器[活德國際貿(mào)易（上海）有限公司]、Millen nium 32 色譜工作站，Phenomenex-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），BP211D 型分析天平 （德國賽多利斯），F(xiàn)OEA26810D 型純水機（Millipore公司）。

1.2 試藥

柚皮苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110722-200610），橘紅痰咳液樣品（自制，批號：100801、100802、100803），缺少化橘紅的陰性對照樣品（自制）；水為超純水，甲醇為色譜純 （國藥集團化學試劑有限公司），其余試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamosil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-醋酸-水（38.0∶0.5∶62.0）；檢測波長：283 nm；柱溫：40℃；流速：1.0 mL/min；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

取110℃減壓干燥至恒重的柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含45 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取供試品1 mL，加甲醇稀釋并定容至25 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性溶液的制備

按照供試品溶液的制備方法，取缺少化橘紅的陰性對照樣品，制備成陰性對照溶液。

2.5 干擾試驗

按照“2.1”項下的色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照液無相應峰出現(xiàn)，表明陰性無干擾。見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

分別吸取柚皮苷對照品溶液 （44.8 μg/mL）2、4、6、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=12162X-27556，r=0.9999。 表明柚皮苷在89.6～896.0 μg范圍內(nèi)，峰面積值與進樣量（μg）之間線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗

精密吸取柚皮苷對照品溶液 （44.8 μg/mL）10 μL，按“2.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測得柚皮苷峰面積積分值分別為 5400267、5413236、5440989、5455261、5454005、5411008，平均 5429128，RSD=0.44%（n=6），表明儀器的精密度良好。

圖1 柚皮苷對照品、供試品陰性對照溶液、樣品色譜圖

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一供試液（批號：100801），分別于制備后 0、1、2、3、4、5、6 h進樣，測得樣品中柚皮苷峰面積值分別為4886932、4846555、4855303、4830029、4831674、4815527、4801096，平均4838159，RSD=0.58%，表明供試品溶液在制備后6 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重現(xiàn)性試驗

對同一批樣品 （批號：100801）分別制備6份供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件測定，計算含量分別為0.991、1.003、0.996、1.007、0.992、0.997 mg/mL， 平均 0.998 mg/mL，RSD=0.63%（n=6），表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品6份 （柚皮苷含量0.998 mg/mL），分別精密加入柚皮苷對照品0.896 mg，按“2.3”項下供試品溶液制備方法操作，按公式計算回收率，回收率（%）=[測得量（mg）-制劑中含量（mg）]/加入對照品量（mg）×100%。 回收率試驗結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.11 樣品含量測定

取三批橘紅痰咳液樣品，按“2.3”項下供試品溶液制備方法操作，按“2.1”項下色譜條件，依法測定。樣品含量測定結(jié)果見表2。

表2 橘紅痰咳液中柚皮苷的含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

化橘紅是本制劑中的主要藥材之一，柚皮苷是化橘紅的主要活性成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗過敏、抑菌及抑制醛糖還原酶等藥理作用[7-8]，為本制劑的主要有效成分之一，因此以柚皮苷含量作為制劑質(zhì)量控制的指標是較為科學合理的。

本試驗結(jié)果表明，高效液相色譜法測定橘紅痰咳液中柚皮苷的含量，操作簡便、準確，具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

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