順鉑脂質(zhì)體腹腔緩釋化療治療S180腹水瘤小鼠腫瘤的臨床研究

孟衛(wèi)東 初瑞雪

山東省聊城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 聊城 252000

癌性腹水作為腫瘤晚期的表現(xiàn)，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，加速了病期的進(jìn)展，一旦發(fā)生，患者的中位生存期僅為數(shù)周至數(shù)月。盡管癌性腹水患者的生存期有限，但成功的姑息治療對(duì)患者也能起到提高生活質(zhì)量及延長生存期的效果。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腹腔內(nèi)化療在治療癌性腹水方面較全身化療具有顯著優(yōu)勢。然而，由于傳統(tǒng)化療藥物對(duì)腫瘤組織的穿透力有限，作用時(shí)間短，對(duì)已在腹膜上形成轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的治療十分困難。故尋求副作用低、療效佳的新的癌性腹水的治療方法，是近年來國內(nèi)外腫瘤界一直探討的課題。本文通過觀察順鉑脂質(zhì)體對(duì)腹水瘤模型小鼠腹腔內(nèi)給藥的療效，探討順鉑脂質(zhì)體腹腔緩釋化療對(duì)腹水瘤鼠的治療作用，為臨床有效控制腹水及腹膜轉(zhuǎn)移提供較好的途徑。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

順鉑注射液（江蘇恒瑞醫(yī)藥）；順鉑脂質(zhì)體及空白脂質(zhì)體（協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物所）；小鼠S180腹水瘤細(xì)胞（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病研究所）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性小鼠40只，腹腔內(nèi)種植S180細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)1×107/mL）0.2 mL，24 h后將其隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組、順鉑注射液組、順鉑脂質(zhì)體組，每組各10只。順鉑注射液組、順鉑脂質(zhì)體組給藥劑量為10 mg/kg，生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組為等體積生理鹽水和空白脂質(zhì)體，分別于第1、4、7、10天對(duì)各組小鼠腹腔注射相應(yīng)藥物。觀察小鼠毛色、精神、活動(dòng)狀態(tài)等，每日測量各組小鼠腹圍及體重。最后1次給藥后繼續(xù)4 d觀察，然后頸椎脫臼法處死小鼠，采集腹水，并觀察各組小鼠腹膜轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤情況。

1.3 順鉑脂質(zhì)體的制備[1-3]

按比例精確稱取卵磷脂、膽固醇和三油酸甘油酯使其完全溶解，緩慢滴加1.0 g/L順鉑的5.0%葡萄糖溶液約10 mL。渦旋振蕩成初乳，取初乳1.0 mL注入含0.04 mol/L輔助乳化劑的4.0%葡萄糖溶液中，渦旋振蕩成復(fù)乳，用氮?dú)獯党袡C(jī)溶劑，即得脂質(zhì)體混懸液。

1.4 觀察指標(biāo)

動(dòng)物模型建立后觀察各組死亡時(shí)間和數(shù)量，評(píng)價(jià)生存鼠的生存狀態(tài)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用方差分析及q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腹水瘤小鼠一般情況

順鉑注射液組、順鉑脂質(zhì)體組在給藥第4天均有1只小鼠排水樣便；順鉑注射液組第4、7天分別有3只和6只出現(xiàn)進(jìn)食減少、精神萎靡癥狀。

2.2 荷瘤鼠體重變化情況比較

給藥4 d后，各組小鼠體重變化不明顯（P＞0.05），給藥第7、10、12天時(shí)，生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組、順鉑注射液組與順鉑脂質(zhì)體組比較，體重均明顯增加（均P＜0.01）。見表1。

2.3 荷瘤鼠腹圍變化情況比較

給藥4 d后，各組小鼠腹圍變化不明顯（P＞0.05），給藥第7、10、12天時(shí)，生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組、順鉑注射液組與順鉑脂質(zhì)體組比較，腹圍均明顯增加（均P＜0.01）。見表2。

表1 荷瘤鼠體重變化情況比較（，g）

表1 荷瘤鼠體重變化情況比較（，g）

注：與其他三組比較，①P＜0.01

組別 只數(shù) 第0天 第4天 第7天 第10天 第12天生理鹽水對(duì)照組空白脂質(zhì)對(duì)照組順鉑注射液組順鉑脂質(zhì)體組10 10 10 10 22.4±2.6 23.3±2.2 22.6±3.1 23.5±2.6 28.1±2.8 27.6±3.3 28.5±4.2 27.8±3.6 36.3±5.1 37.1±6.3 36.5±5.0 31.3±5.4①41.8±6.5 41.6±7.2 39.5±6.5 33.1±4.5①42.3±8.2 42.4±7.5 41.0±7.2 35.1±6.4①

2.4 荷瘤鼠腹水變化情況比較

動(dòng)物模型建立后第15天處死所有動(dòng)物，生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組、順鉑注射液組小鼠死亡后立即解剖收集腹水定量?？瞻字|(zhì)對(duì)照組與生理鹽水對(duì)照組、順鉑注射液組與生理鹽水對(duì)照組，兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。而順鉑脂質(zhì)體組與其他三組比較，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見表3。

2.5 生存期及腹腔轉(zhuǎn)移比較

生理鹽水對(duì)照組、空白脂質(zhì)對(duì)照組、順鉑注射液組、順鉑脂質(zhì)體組小鼠生存期分別為（12.2±1.7）、（12.0±1.3）、（14.5±1.8）、（18.2±2.1）d。與生理鹽水對(duì)照組比較，順鉑注射液組和順鉑脂質(zhì)體組小鼠的生存期明顯延長（P＜0.05）。順鉑脂質(zhì)體組明顯長于順鉑注射液組（P＜0.05）。生理鹽水對(duì)照組與空白脂質(zhì)對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。動(dòng)物模型建立后第15天解剖所有小鼠，前三組均發(fā)現(xiàn)腸系膜上多發(fā)粟粒狀結(jié)節(jié)改變，順鉑注射液組僅2只小鼠發(fā)現(xiàn)腸系膜多發(fā)粟粒狀結(jié)節(jié)改變；順鉑脂質(zhì)體組未發(fā)現(xiàn)腸系膜上粟粒狀結(jié)節(jié)改變。

表2 荷瘤鼠腹圍變化情況比較（，cm）

表2 荷瘤鼠腹圍變化情況比較（，cm）

注：與其他三組比較，①P＜0.01

組別 只數(shù) 第0天 第4天 第7天 第10天 第12天生理鹽水對(duì)照組空白脂質(zhì)對(duì)照組順鉑注射液組順鉑脂質(zhì)體組10 10 10 10 6.23±0.57 6.22±0.71 6.20±0.66 6.19±0.38 6.37±1.36 6.31±1.22 6.35±1.43 6.33±1.16 8.35±2.24 8.39±2.31 8.01±2.56 7.35±2.13①10.79±3.43 10.83±4.11 9.05±4.02 7.45±2.67①11.07±5.43 11.21±4.42 10.65±5.87 8.21±2.15①

表3 荷瘤鼠腹水變化情況比較（，mL）

表3 荷瘤鼠腹水變化情況比較（，mL）

注：與其他三組比較，①P＜0.01

組別 只數(shù) 腹水量生理鹽水對(duì)照組空白脂質(zhì)對(duì)照組順鉑注射液組順鉑脂質(zhì)體組10 10 10 10 14.23±1.55 13.98±2.87 10.45±2.01 0.35±0.05①

3 討論

順鉑是一種廣譜抗癌藥，不僅能殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制細(xì)胞修復(fù)，還具有較強(qiáng)的放療增敏作用[4-6]，但順鉑具有較大的腎毒性、骨髓抑制和消化系統(tǒng)不良反應(yīng)[7]，為提高其抗癌效果、降低副作用，國外學(xué)者[8-9]將其制成脂質(zhì)體應(yīng)用于臨床。國內(nèi)已有學(xué)者采用生物膠為載體與順鉑結(jié)合，組成藥物—載體復(fù)合物，利用載體在體內(nèi)的緩慢降解而達(dá)到對(duì)順鉑注射液的控釋作用，從而使得順鉑注射液在腫瘤局部形成高濃度，延長了其抗腫瘤作用時(shí)間。理論上提出在手術(shù)切除腹腔腫瘤或殘存少量癌組織的情況下，利用腹腔緩釋化療能有效殺滅腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞和腹膜微小轉(zhuǎn)移灶，達(dá)到降低腹膜種植率、改善預(yù)后的效果[10]。

本研究結(jié)果顯示，小鼠經(jīng)腹腔注射一定濃度的順鉑脂質(zhì)體后，腹水的形成受到相當(dāng)程度的抑制，統(tǒng)計(jì)學(xué)證實(shí)，腹水產(chǎn)生量明顯少于對(duì)照組（P＜0.05）。在生存時(shí)間方面，順鉑注射液組和順鉑脂質(zhì)體組較生理鹽水對(duì)照組及空白脂質(zhì)對(duì)照組具有明顯優(yōu)勢（P＜0.05），而順鉑脂質(zhì)體組明顯優(yōu)于順鉑注射液組（P＜0.05）。生理鹽水對(duì)照組與空白脂質(zhì)對(duì)照組之間無明顯差異（P＞0.05）。說明在總生存期方面，順鉑脂質(zhì)體腹腔緩釋化療療效最佳。

綜上所述，本研究用小鼠腹水瘤模型模擬了腹腔內(nèi)腫瘤播散的臨床現(xiàn)象，對(duì)比了順鉑腹腔化療和順鉑腹腔緩釋化療的療效。結(jié)果證實(shí)，順鉑腹腔緩釋化療在更長的時(shí)間里，抑制了腫瘤細(xì)胞增殖，延長了動(dòng)物的存活時(shí)間，能有效控制腫瘤性腹水及腫瘤的腹膜轉(zhuǎn)移。

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