海南廣藿香藥材中百秋李醇和廣藿香酮的含量測定＊

張宏武，程雪寧，魏建和，楊興全，喻長遠(yuǎn)，鄒忠梅

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193; 2.北京化工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 100029; 3.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所海南分所，海南 萬寧 571533)

廣藿香為唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.的干燥地上部分，是臨床上常用的芳香化濕藥，味辛、性微溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有芳香化濁、開胃止嘔、發(fā)表解暑的功效[1]，是著名中成藥藿香正氣丸(水)的主要組方藥材。廣藿香主要成分為揮發(fā)油類成分，主要為百秋李醇 (patchouli alcohol)[2]，因此我國藥典是以百秋李醇的含量作為廣藿香藥材質(zhì)量的評價指標(biāo)[1]。但研究表明，具有抗菌活性的主要成分為廣藿香酮(pogostone)[3]。廣藿香商品分為石牌藿香、高要藿香、海南藿香，以石牌藿香為道地藥材，但目前市場上流通的主流商品為海南廣藿香。筆者對廣藿香藥材提取方法進(jìn)行了改進(jìn)，首次建立了同時測定廣藿香藥材中百秋李醇和廣藿香酮含量的方法，并對市場上流通的主流商品海南廣藿香藥材的質(zhì)量進(jìn)行了考察。

1 儀器與試藥

Agilent 6890GC型氣相色譜儀，Agilent FID檢測器，N2為載氣;AT201型十萬分之一電子天平(梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司)。百秋李醇對照品購于中國藥品生物制品檢定所;廣藿香酮對照品為自制，經(jīng)光譜分析和GC－FID面積歸一化法測定含量為98%;試劑均為分析醇。11批海南廣藿香藥材均于2008年6月采于中國海南省，由中國醫(yī)科院藥用植物研究所海南分所楊興全助理研究員鑒定為唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth的干燥地上部分。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent DB－5彈性毛細(xì)管石英柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);程序升溫:初始溫度160℃，保持1 min，以每分鐘5℃速率升溫至220℃，保持1 min，再以每分鐘10℃速率升溫至300℃，保持10 min;檢測器溫度為300℃，進(jìn)樣口溫度為250℃;分流比為5∶1。在該色譜條件下，百秋李醇和廣藿香酮均能達(dá)到基線分離，見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取百秋李醇和廣藿香酮對照品，加正己烷制成每1 mL各含3.0 mg的溶液，作為對照品溶液。稱取廣藿香藥材約10 g，用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，精密稱取廣藿香藥材粉末2.0 g，置50 mL具塞三角瓶中，加30 mL甲醇，稱重。超聲30 min，放冷，補(bǔ)重，過濾，取中濾液作為供試品溶液，0.45 μm濾膜過濾備用。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液 25，100，200，400 μL，分別置2 mL容量瓶中，用正己烷定容，分別取稀釋后溶液及對照品溶液各1 μL注入氣相色譜儀，以百秋李醇和廣藿香酮的峰面積對質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，百秋李醇為 Y=928.62 X －6.6192(r=0.9999)，廣藿香 酮為 Y=509.27 X －16.788(r=0.9995)。結(jié)果表明，百秋李醇質(zhì)量濃度在 0.0775 ～6.200 g/L 內(nèi)，廣藿香酮質(zhì)量濃度在 0.0725～5.800 g/L 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一份對照品溶液，按2.1項下色譜條件日內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次，并連續(xù)測定5 d，記錄峰面積。結(jié)果百秋李醇和廣藿香酮日內(nèi)峰面積的 RSD分別1.39%和1.52%(n=5)，日間峰面積的 RSD分別為2.04%和2.27%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一批藥材粉末5份，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果百秋李醇和廣藿香酮峰面積的 RSD分別為1.07%和2.20%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液1 μL分別在0，2，4，8，12，24 h時進(jìn)樣。結(jié)果百秋李醇峰面積的 RSD為2.57%，廣藿香酮峰面積的 RSD為2.72%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:精密稱取同一已知含量的廣藿香藥材粉末0.8，1.0，1.2 g，置 50 mL 具塞三角瓶中，分別加入百秋李醇對照品 3.6，4.5，5.4 mg，廣藿香酮對照品 1.0，1.3，1.6 mg。依法制備供試品溶液，取續(xù)濾液，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，由測得量與加入量計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=3)

2.4 樣品含量測定

取11批海南產(chǎn)廣藿香藥材，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣1 μL，記錄峰面積，分別計算廣藿香藥材中百秋李醇、廣藿香酮含量。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 廣藿香藥材提取方法的選擇

2005年版《中國藥典(一部)》中供試品溶液的制備方法為:加三氯甲烷50 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過，合并濾液，回收溶劑至干，殘渣加正己烷溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中。筆者比較了甲醇和三氯甲烷作為提取溶劑的效果，發(fā)現(xiàn)同一份藥材使用甲醇超聲提取其百秋李醇、廣藿香酮的含量分別為0.261%和0.134%，而藥典提取方法其百秋李醇、廣藿香酮的含量分別為0.156%和0.079%。進(jìn)一步對提取次數(shù)進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)超聲1次基本可以將百秋李醇和廣藿香酮完全提取，大大簡化了操作。由于百秋李醇和廣藿香酮均為易揮發(fā)性化合物，因此在回收溶劑過程中會有較大的損失，無法客觀、準(zhǔn)確測定百秋李醇和廣藿香酮的含量，所建立的方法避免了溶劑回收問題，可比藥典方法更準(zhǔn)確地反映廣藿香藥材中兩種成分的含量。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3.2 出油率與廣藿香藥材質(zhì)量的關(guān)系

筆者用水蒸氣蒸餾法對11批海南廣藿香藥材的出油率進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)出油率與廣藿香中百秋李醇和廣藿香酮的含量并無直接關(guān)系。如編號為6的廣藿香藥材，其出油率最高(1.47%)，但其百秋李醇和廣藿香酮的含量均不是最高。但若出油率過低(＜0.6%)，百秋李醇和廣藿香酮的含量則均較低。

3.3 廣藿香藥材樣品測定結(jié)果

從11批海南產(chǎn)廣藿香藥材中百秋李醇和廣藿香酮含量測定結(jié)果來看，海南產(chǎn)廣藿香藥材中百秋李醇含量均達(dá)到藥典要求，但來自不同栽培地藥材中百秋李醇和廣藿香酮含量有一定差異，如5號、10號樣品來自長風(fēng)鎮(zhèn)地區(qū)，其廣藿香醇和百秋李醇含量均較高，而來自萬城銅鼓村的1號樣品和禮記下章村11號樣品中百秋李醇和廣藿香酮含量均較低。導(dǎo)致含量差異的原因是種質(zhì)不同，還是環(huán)境和種植條件不同，有必要進(jìn)一步考察。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:30－31.

[2]Wu JF，Xin L，Tang WY，et al.Application of comprehensive twodimensional gas chromatography－time－of－flight mass spectrometry in the analysis of volatile oil of traditional Chinese medicines[J].J Chromatography A，2004，1034(1 －2):199 －205.

[3]張廣文，藍(lán)文鍵，蘇鏡娛，等.廣藿香精油化學(xué)成分分析及其抗菌活性(Ⅱ)[J].中草藥，2002，33(3):210 －212.