45例早產(chǎn)兒血液真菌感染細菌培養(yǎng)結果與藥敏及免疫功能的探討分析

李宏科，鄭佳麗

(甘肅省平?jīng)鍪腥嗣襻t(yī)院，平?jīng)?744000)

新生兒(尤其是早產(chǎn)兒)免疫系統(tǒng)發(fā)育不夠成熟極易造成真菌感染。近些年真菌感染發(fā)病率逐年升高，新生兒真菌感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，給臨床診治帶來困難，如不及時發(fā)現(xiàn)異常，常常危及患兒生命。為了早發(fā)現(xiàn)，及時指導臨床治療，現(xiàn)對我院2011年5月-2012年6月發(fā)生血液念珠菌感染的早產(chǎn)兒共45例，從細菌培養(yǎng)、藥敏、體液免疫、細胞免疫等方面對早產(chǎn)兒機體感染及免疫狀態(tài)進行分析探討，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 檢測對象 病例組取自本院住院及門診患兒45例，其中男21例，女24例，年齡0～28 d。對照組為足月正常分娩健康小兒40例，其中男18例，女22例，年齡0～28 d。

1.2 檢測方法

1.2.1 菌種來源 5種常見念珠菌的標準菌株各1株，包括白色念珠菌(1株ATCC2091)，熱帶念珠菌(1株ATCC01463)，克柔念珠菌(1株ATCC6258)，近平滑念珠菌(1株ATCC22019)，季也蒙念珠菌(1株ATCC22019)，購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心。

1.2.2 念珠菌培養(yǎng) 取4℃環(huán)境下保存的念珠菌標準菌株接種于沙保羅固體培養(yǎng)基中，32℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h后挑取菌落接種于沙保羅液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫搖床培養(yǎng)24 h。

1.2.3 常規(guī)血培養(yǎng) 對上述患兒取靜脈血10 ml注入血培養(yǎng)瓶中，置于35℃環(huán)境下培養(yǎng)，如有真菌生長，挑取菌落接種于沙保羅液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫搖床培養(yǎng)24 h，對培養(yǎng)出的菌種使用法里梅里埃VITEKZ全自動微生物分析。

1.3 藥敏

1.3.1 用ATB Fungus自動分析系統(tǒng)測定 按試劑說明書操作，自動判讀結果。共測定針對氟胞嘧啶，兩性霉素B，制酶菌素，咪康唑以及酮康唑等6種抗真菌藥物的藥敏結果。

1.3.2 用紙片擴散法測定真菌對氟康唑的藥敏結果 制備酵母菌懸液，用無菌生理鹽水或水調(diào)至0.5麥氏濃度單位，用無菌棉簽蘸取菌懸液涂布于整個平皿，5～10 min后貼25 ug/片的氟康唑紙片，平皿底朝上，35℃孵育18～24 h后讀取結果。如果24 h生長不足，延長至48 h。

1.4 免疫球蛋白

1.4.1 血清 IgG，IgA，IgM，水平測定 散射比濁法，英國產(chǎn)MININEPH特定蛋白比濁儀，試劑為英國The Bijing Site公司提供的 MININEPHtm，IgG，IgA，IgM抗血清MININEPHtm試劑，使用按操作說明。

1.4.2 淋巴細胞亞群 采用武漢生物制品研究所提供的抗T細胞單克隆抗體，以APAAP單抗橋聯(lián)酶標法測定。

1.5 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 45例早產(chǎn)兒血液真菌感染情況 白色念珠菌27例，熱帶念珠菌7例，近平滑念珠菌5例，克柔氏念珠菌3例，季也蒙念珠菌3例。

2.2 藥敏結果 菌株對氟康唑、伊曲康唑、兩性霉素均高度敏感;對5-氟胞嘧啶、制毒菌素、咪康唑、益康唑、酮康唑中度敏感。

2.3 免疫球蛋白結果 見表1。病例組IgG、IgA及IgM水平均顯著低于健康兒童，差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)。

表1 真菌感染早產(chǎn)兒血清Ig含量(g/L)

2.4 T淋巴細胞亞群的測定結果 見表2。兩組比較，念珠菌感染組CD3+、CD4+、CD8+T細胞均顯著低于健康兒童(P＜0.01)，CD4/CD8比值也降低(P ＜0.05)。

表2 真菌感染早產(chǎn)兒血清T淋巴細胞亞群檢測結果

3 討論

近年來，新生兒真菌感染逐漸增多，尤其是條件致病真菌所致的感染尤為多見，直接威脅著新生兒的健康和生命。真菌感染發(fā)生原因主要為新生兒時期免疫缺陷。此外，長期應用廣譜抗生素、激素，體內(nèi)留置導管，如:靜脈插管、氣管插管的污染，以及營養(yǎng)不良、慢性感染等，都是新生兒真菌感染發(fā)生的重要因素。皮膚黏膜真菌感染(淺部真菌病)是新生兒真菌病的常見類型，全身播散型或內(nèi)臟真菌感染(深部真菌病)相對較少見，但一經(jīng)發(fā)生，臨床病情大多嚴重。由于常伴隨于其他嚴重疾病，癥狀易混淆，早期診斷甚為困難，病死率高［1］。國內(nèi)幾個醫(yī)院報道的新生兒深部真菌病絕大多數(shù)為死后病理解剖診斷。偶有生前診斷者，但多在治療開始前即死亡。因此，提高對新生兒真菌感染的警惕性，爭取盡早診斷和治療，可減少重癥感染的病死率。常見真菌病原的種類是念珠菌病，主要由白色念珠菌引起，是新生兒真菌病的常見病原［2］。

本文結果可見真菌感染以白色念珠菌感染率增高，熱帶念珠菌次之，其它念珠菌也有不同程度的感染［3］。抗真菌藥物以氟康唑、伊曲康唑、兩性霉素均高度敏感，其傳統(tǒng)藥物次之［4］。早產(chǎn)兒血清IgG、IgA降低，表明體液免疫不足。另外結果表明真菌感染早產(chǎn)兒 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值均下降，說明早產(chǎn)兒細胞免疫狀態(tài)低下。本組結果提示臨床對免疫功能低下早產(chǎn)兒或長期使用抗生素等患兒要特別注意預防和監(jiān)測真菌感染，加強與臨床微生物實驗室的聯(lián)系，一旦出現(xiàn)真菌感染，應盡快調(diào)整治療方案，對減少和控制真菌引起的院內(nèi)感染有非常重要的意義。

［1］徐 巍，嚴超英.新生兒侵襲性真菌感染67例分析［J］.臨床兒科雜志，2011，29(6):506.

［2］陳 超.新生兒常見感染性疾病診治［J］.中國實用兒科雜志，2011，26(1):3-6.

［3］吳秀娟，程 憲.新生兒真菌敗血癥四例分析［J］.中國小兒急救醫(yī)學，2011，2(8):71.

［4］謝國艷，蔡志昌，周建華，等.臨床感染深部真菌的分離鑒定和藥敏結果分析［J］.檢驗醫(yī)學，2004.19(2):123.