卵巢上皮性癌中MMP-7、E-鈣黏蛋白的表達及臨床意義

葉世勤，楊秀珍，張蕓中

(1.蘭州大學第二醫(yī)院婦產(chǎn)科;2.蘭州市安寧區(qū)萬里醫(yī)院婦產(chǎn)科，蘭州 730030)

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤死亡率的首位。由于卵巢癌極易發(fā)生轉(zhuǎn)移，且缺乏可靠有效的早期診斷方法，一旦發(fā)現(xiàn)，大多已成晚期。因此，通過各種方法尋找卵巢癌的特異性標志物，以進行早期診斷及防治其早期擴散、轉(zhuǎn)移和復發(fā)，就成為關鍵。本研究采用免疫組化的方法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7，MMP-7)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)在卵巢上皮性癌中的表達，旨在探討MMP-7和E-cad與卵巢癌生物學行為及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集蘭州大學第二醫(yī)院近4年存檔的53例手術切除的卵巢上皮性腫瘤組織的石蠟包埋標本及其完整的臨床資料。按WHO(1999年)分類標準進行腫瘤分型，按FIGO修訂的手術病理分期標準進行分期，良性腫瘤20例(漿液性11例，黏液性9例)，惡性腫瘤33例(漿液性15例，黏液性18例)。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期19例。按組織學分級，高、中分化16例，低分化17例。正常對照組選取行宮頸癌根治術時所切的正常卵巢組織石蠟包埋標本10例，均無癌轉(zhuǎn)移?；颊吣挲g23～70歲，平均年齡46.7歲。所有病例術前均未行化療或放療。所有標本用10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片4μm，H·E染色，實驗前再次閱片，明確診斷。

1.2 主要試劑及方法 E-cad(克隆系:4A2C7);MMP-7(克隆號1D2);S-P免疫組化染色試劑盒，以上試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。染色方法按試劑盒說明進行。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化，用高壓鍋進行熱抗原修復，修復液為pH 6.0的檸檬酸緩沖液，經(jīng)DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封固。實驗分別設陽性、陰性和缺省對照。

1.3 結(jié)果判定 MMP-7以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃顆粒著色為陽性標記，E-cad的陽性表達于細胞膜，部分胞漿著色，以細胞膜出現(xiàn)棕黃顆粒著色為陽性標記。每張切片高倍鏡下選10個高倍視野，每個高倍視野計數(shù)100個腫瘤細胞，計算出每張切片的陽性細胞百分數(shù)，分為3個等級:陽性細胞數(shù)﹤25%為陰性(-)，26% ～50%為(+)，＞ 51%為(++)。

1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理。采用χ2檢驗、秩和檢驗，兩兩比較采用Bonferroni矯正檢驗水準α，F(xiàn)isherman精確概率檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義，Spearman等級相關分析。

2 結(jié)果

2.1 MMP-7、E-cad在不同卵巢癌組織中的表達MMP-7從正常(10.0%)、良性(30.0%)到惡性(63.6%)組，其陽性表達率呈遞增趨勢(H=14.645，P=0.001)，P ＜ 0.05;E-cad 從 正 常(100.0%)、良性(65.0%)到惡性(54.5%)組，其陽性表達率成遞減的趨勢(H=6.741，P=0.034)，P＜0.05。結(jié)果分別見圖1～4。

2.2 MMP-7、E-cad的表達與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關系 MMP-7、E-cad的表達與患者的發(fā)病年齡，病理類型無關，而與卵巢癌的組織分級、臨床分期及侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關(表1)。

2.3 MMP-7、E-cad及在卵巢癌組織中表達的相關性 在33例卵巢癌中，MMP-7與E-cad表達共同陽性的為10例，共同陰性的為4例，二者單獨陽性分別為11例和8例，經(jīng)Spearman等級相關分析，表明MMP-7與E-cad的表達沒有相關性(r=-0.184，P=0.305)(表 2)。

表1 MMP-7、E-cad的表達與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關系

表2 MMP-7與E-cad在卵巢癌組織中表達的相關性

3 討論

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組Zn2+依賴性的可降解細胞外基質(zhì)(extracellar matrix，ECM)的內(nèi)肽酶，由多個結(jié)構和功能上與細胞外基質(zhì)(ECM)結(jié)構蛋白和生長因子的功能單位具有同源性的區(qū)段所組成。MMP-7是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，MMP-7基因是在用人基質(zhì)分解素-1探針研究人腫瘤cDNA文庫時發(fā)現(xiàn)的［1］。具有和其他MMP相似的理化性質(zhì)，如:同其他MMP一樣具有降解ECM和基底膜的作用。和其他MMP不同的是，MMP-7不含類血紅素結(jié)合區(qū)［2］。在多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，若MMP-7的表達明顯增強，則提示 MMP-7在腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中起著重要作用［3］。MMP-7通過降解ECM，破壞機體防御腫瘤浸潤的自然屏障，增加癌細胞的侵襲性，而促進腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移。MMP-7還通過調(diào)節(jié)細胞的黏附能力，促進腫瘤血管和淋巴管的生成，為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移提供門戶。

目前，據(jù)國內(nèi)外有關MMPs在腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移中的報道，所得結(jié)果并不一致，存在諸多爭議。Sillanpaa等［4］通過對248例原發(fā)性卵巢癌腫瘤組織的檢測及其患者的預后隨訪表明，MMP-7在腫瘤細胞的高表達是卵巢癌的一個獨立預后預測因子。胡曉霞等［5］應用RT-PCR方法發(fā)現(xiàn)，MMP-7及TIMP-3在卵巢惡性及良性腫瘤中陽性表達率明顯高于正常卵巢(P＜0.000)，但它們在卵巢惡性腫瘤中的表達水平與患者的臨床病理特征及預后無相關性。俞嵐等［6］應用核酸原位雜交和免疫組化發(fā)現(xiàn)，MMP-7、MMP-2 mRNA及蛋白的表達陽性率在卵巢癌組均顯著高于良性腫瘤組(P﹤0.05)，多因素分析，PTNM分期，兩者的表達是影響卵巢癌根治術后患者預后的獨立因素。

本研究表明，MMP-7在卵巢癌組織陽性表達率明顯高于正常組及良性組(P﹤0.05);隨著卵巢癌臨床分期的增加、組織分化程度降低和有網(wǎng)膜或淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，MMP-7的表達呈明顯上升的趨勢。這提示，MMP-7可能在卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要作用，并有望成為卵巢癌患者獨立預后的指標。

E-鈣黏蛋白是一種介導同種細胞相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。主要分布于上皮組織，是與癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移密切相關的上皮細胞分布性黏附分子。近年的研究表明，E-cad的減少、異質(zhì)性和非極性分布使細胞間的黏附減弱，癌細胞易于脫落，是癌轉(zhuǎn)移的首要環(huán)節(jié)。在大多數(shù)惡性腫瘤中，如結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌等都存在E-cad介導的細胞-細胞黏附功能的削弱或喪失［7］。E-cad表達失?；蛉笔У膼盒阅[瘤多為分化差、分期高、轉(zhuǎn)移及預后差［8］。本研究表明，卵巢癌組織中E-cad陽性表達明顯低于正常組及良性組(P＜0.05)，且隨臨床分期的增加、組織分化程度降低、有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移陽性表達率均呈下降的趨勢。這些結(jié)果與上述國內(nèi)外文獻報道基本一致。

在癌基因的研究中，許多學者提出了基因協(xié)同作用假說，認為在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個階段，至少有兩個或兩個以上功能不同的異常及獲得基因各自發(fā)揮不同的作用，并在時間和空間上相互配合，協(xié)同促進了細胞的癌變。Noe等［9］證實MMP-7 降解細胞表面的 E-鈣黏素，Mcguire 等［10］也證明了MMP-7能使E-鈣黏素在體內(nèi)發(fā)生脫落，在用博來霉素治療后的野生型小鼠支氣管肺泡灌洗液中，脫落的E-鈣黏素可以被檢測到。同等條件下的MMP-7基因敲除小鼠的肺中E-鈣黏素卻不能被檢測到。高雪等［11］在乳腺癌的研究中證實，E-cad的表達下調(diào)及MMP-7表達上調(diào)是基底細胞樣型高侵襲轉(zhuǎn)移力的發(fā)生機制之一。徐桂芳等［12］研究胃癌組織中的E-cad低表達與MMP-9的高表達與患者的預后密切相關。MMP-7可以抑制E-cad表達水平，MMP-7以E-cad為底物進行降解，從而破壞細胞之間的正常連接，導致細胞分化能力和腫瘤浸潤能力增強。我們在蛋白水平未得出MMP-7與E-cad之間的相關性(r=-0.184，P=0.1305)，可能與本實驗樣本量較少有關系。

綜上所述，本組資料表明，MMP-7的高表達、E-cad的低表達與卵巢癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為密切相關。故聯(lián)合檢測MMP-7、E-cad可作為卵巢癌生物學行為的重要指標。

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