芪蛭腎安丸對小鼠耳廓微循環(huán)的影響

詹文彥 魏福玲 王鑫國

(河北省邯鄲明仁醫(yī)院腎內(nèi)科，河北 邯鄲 056006)

芪蛭腎安丸對小鼠耳廓微循環(huán)的影響

詹文彥 魏福玲 王鑫國1

(河北省邯鄲明仁醫(yī)院腎內(nèi)科，河北 邯鄲 056006)

目的 觀察芪蛭腎安丸對小鼠耳廓微循環(huán)的影響，探討其可能作用機(jī)制。方法 將50只昆明種雄性小鼠通過尾靜脈注射腎上腺素制造微循環(huán)障礙模型，然后隨機(jī)分為芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組、空白對照組5組，每組各10只。芪蛭腎安丸低、中、高劑量組分別以1.4、2.8、5.6 g/kg芪蛭腎安丸灌胃給藥，尿毒清顆粒組以6.0 g/kg尿毒清顆粒灌胃給藥，空白對照組予等量的蒸餾水灌胃。給藥20、40 min后采用冷光源分別觀察記錄各組小鼠右耳微動脈、微靜脈管徑及紅細(xì)胞流速。結(jié)果 各組小鼠造模后耳廓微動脈、微靜脈管徑及微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速與本組造模前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組小鼠給藥20、40 min后耳廓微動脈、微靜脈管徑及微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速與本組造模后比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，空白對照組與本組造模后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 芪蛭腎安丸可明顯增加微循環(huán)障礙模型小鼠耳廓微動脈、微靜脈管徑，加快微血管內(nèi)紅細(xì)胞流速，改善小鼠耳廓微循環(huán)，其降低蛋白尿、改善腎功能可能是通過改善微循環(huán)、增加腎血流量而實現(xiàn)。

芪蛭腎安丸;微循環(huán);動物，實驗;小鼠

芪蛭腎安丸是河北省邯鄲明仁醫(yī)院院內(nèi)復(fù)方中藥制劑，是經(jīng)過十幾年的臨床經(jīng)驗提煉而成的經(jīng)驗方，具有健脾補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、解毒泄?jié)岬裙π?，對改善腎臟疾病患者的臨床癥狀、降低蛋白尿、調(diào)節(jié)脂代謝及改善腎功能等方面有較好臨床作用。本實驗擬通過觀察研究芪蛭腎安丸對小鼠耳廓微循環(huán)的影響，探討芪蛭腎安丸作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性昆明種小鼠50只，體質(zhì)量18～20 g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號DK0409－0086，動物飼料亦由該中心提供。

1.1.2 藥品 芪蛭腎安丸(河北省邯鄲明仁醫(yī)院制劑室提供，冀藥制字Z20060026，主要藥物組成:黃芪、水蛭、地龍、丹參、山楂、連翹、茯苓、白術(shù)、五味子等);尿毒清顆粒(廣州康臣藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20073256);鹽酸腎上腺素注射液(天津金耀氨基酸有限公司，國藥準(zhǔn)字H12020526)。

1.1.3 儀器 XTB－A型連續(xù)變倍體視顯微鏡，桂林光學(xué)儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 模型制備、分組及給藥方法 全部小鼠以0.1 mL/10 g分別尾靜脈注射1∶1 000鹽酸腎上腺素注射液，造成小鼠微循環(huán)障礙模型。然后將小鼠隨機(jī)分為芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組、空白對照組5組，每組10 只。芪蛭腎安丸低、中、高劑量組以 1.4、2.8、5.6 g/kg芪蛭腎安丸灌胃給藥，尿毒清顆粒組以6.0 g/kg尿毒清顆粒灌胃給藥，空白對照組予等量的蒸餾水灌胃。

1.2.2 觀察指標(biāo)及方法 采用12%氨基甲酸乙酯(烏拉坦)1.2 g/kg腹腔注射麻醉各組小鼠，以醫(yī)用橡皮膏輕貼輕拉去掉右耳廓軟毛，將小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺上，調(diào)節(jié)耳托高度，使耳廓平展在耳托上，并在耳托及耳廓上涂以液體石蠟。將小鼠觀察臺置顯微鏡載物臺上，調(diào)節(jié)冷光源適當(dāng)亮度，調(diào)整視野選擇微動脈與微靜脈，放大72倍觀察，用測微尺測量微動脈和微靜脈管徑，觀察紅細(xì)胞的流速，并按下述標(biāo)準(zhǔn)記分:快速(直線狀):4分;中速(虛線狀):3分;慢速(粒狀)2分;停止(凝滯狀):1分。各組分別于造模前、后及給藥20、40 min后觀察記錄1次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠耳廓微動脈管徑變化比較 見表1。

表1 各組小鼠耳廓微動脈管徑變化比較μm，±s

表1 各組小鼠耳廓微動脈管徑變化比較μm，±s

與本組造模前比較，*P＜0.01;與本組造模后比較，△ P＜0.05

組 別 n 造模前 造模后 給藥20 min后 給藥40 min后芪蛭腎安丸低劑量組 10 10.5±2.4 8.0±1.5* 10.2±1.5△ 12.3±1.6△芪蛭腎安丸中劑量組 10 10.3±1.5 8.1±1.4* 9.7±1.4△ 12.0±1.4△芪蛭腎安丸高劑量組 10 11.0±2.0 7.8±1.0* 10.1±0.9△ 12.1±1.0△尿毒清顆粒組 10 11.3±2.4 7.3±1.5* 10.5±1.6△ 11.4±1.2△空白對照組 10 10.7 ±1.6 7.8 ±1.0*7.8 ±1.1 8.1 ±1.7

由表1可見，各組小鼠造模后耳廓微動脈管徑與本組造模前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組小鼠給藥20、40 min后耳廓微動脈管徑與本組造模后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，空白對照組與本組造模后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 各組小鼠耳廓微靜脈管徑變化比較 見表2。

表2 各組小鼠耳廓微靜脈管徑變化比較μm，±s

表2 各組小鼠耳廓微靜脈管徑變化比較μm，±s

與本組造模前比較，*P＜0.01;與本組造模后比較，△ P＜0.05

組 別 n 造模前 造模后 給藥20 min后 給藥40 min后芪蛭腎安丸低劑量組 10 16.4±2.1 10.7±2.0* 14.0±1.0△ 15.7±1.6△芪蛭腎安丸中劑量組 10 16.7±1.9 11.1±1.9* 14.3±1.8△ 16.1±1.5△芪蛭腎安丸高劑量組 10 17.4±1.9 12.3±1.8* 14.9±1.2△ 17.0±1.2△尿毒清顆粒組 10 16.5±1.6 11.8±1.3* 15.2±1.1△ 16.1±2.1△空白對照組 10 15.9 ±1.8 11.3 ±1.6*12.4 ±1.6 12.6 ±1.3

由表2可見，各組小鼠造模后耳廓微靜脈管徑與本組造模前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組小鼠給藥20、40 min后耳廓微靜脈管徑與本組造模后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，空白對照組與本組造模后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 各組小鼠耳廓微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速評分變化比較見表3。

表3 各組小鼠耳廓微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速評分變化比較分，±s

表3 各組小鼠耳廓微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速評分變化比較分，±s

與本組造模前比較，*P＜0.01;與本組造模后比較，△ P＜0.05

組 別 n 造模前 造模后 給藥20 min后 給藥40 min后芪蛭腎安丸低劑量組 10 3.3±0.7 1.7±0.8* 2.2±0.6△ 2.3±0.7△芪蛭腎安丸中劑量組 10 3.1±0.7 1.6±0.7* 2.1±0.7△ 2.2±0.6△芪蛭腎安丸高劑量組 10 3.2±0.6 1.7±0.7* 2.3±0.7△ 2.1±0.9△尿毒清顆粒組 10 3.0±0.8 1.9±0.6* 2.4±0.7△ 2.4±0.5△空白對照組 10 3.5 ±0.5 1.6 ±0.7*1.6 ±0.5 1.5 ±0.5

由表3可見，各組小鼠造模后耳廓微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流 速評分與本組造模前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);芪蛭腎安丸低、中、高劑量組及尿毒清顆粒組小鼠給藥20、40 min后耳廓微動脈內(nèi)紅細(xì)胞流速評分與本組造模后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，空白對照組與本組造模后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

慢性腎臟疾病患者通常存在不同程度凝血活性亢進(jìn)、纖溶活化相對不足的高凝狀態(tài)，極易合并血栓，導(dǎo)致腎纖維化，從而加重腎功能的惡化。因此，針對高凝狀態(tài)而設(shè)計的治療方案是解決慢性腎臟疾病的有效方法之一。慢性腎臟疾病形成的腎間質(zhì)纖維化、腎小球硬化、腎小球內(nèi)血栓、毛細(xì)血管管腔塌陷或狹窄、小動脈硬化、腎小管的變性萎縮及腎間質(zhì)的急慢性炎性改變等，都是腎絡(luò)閉阻發(fā)生在不同病程和病理的征象［1－2］，是發(fā)生在腎臟中的微型淤積［3］，血液流變學(xué)的改變對腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有重要影響［4］。因此，活血通絡(luò)祛瘀，改善微循環(huán)是治療慢性腎臟疾病的重要環(huán)節(jié)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，慢性腎臟疾病的基礎(chǔ)病機(jī)是本虛標(biāo)實，即脾腎虧虛為本，痰濕瘀阻為標(biāo)，其中瘀血阻絡(luò)是主要的病理基礎(chǔ)之一，多主張活血通絡(luò)祛瘀法貫穿于治療慢性腎臟疾病的全過程。血液運行要靠氣來維持，氣為血之帥，血為氣之母，氣能行血、統(tǒng)血，血則可以載氣，腎絡(luò)氣血運行通暢，腎的生理功能才能正常運行。若脾腎虧虛，則氣血生化乏源，腎臟血運不足，久病入絡(luò)，血瘀日久又阻礙氣血運行，形成惡性循環(huán)。花蛭腎安丸方中黃芪、茯苓、白術(shù)、五味子健脾補(bǔ)氣，調(diào)腎利水;水蛭、地龍、丹參、山楂活血通絡(luò)，祛瘀消癥;連翹清熱解毒，消腫散結(jié)。諸藥合用，共奏健脾補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、解毒泄?jié)嶂Α，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪可改善蛋白質(zhì)代謝，改善腎血流動力學(xué)，即具有擴(kuò)張血管、降低血壓、抗血小板凝集、改善腎臟微循環(huán)的功能，從而改善高凝狀態(tài)［5］;水蛭能改善腎臟微循環(huán)、血流變和高凝狀態(tài)，防止腎髓質(zhì)和皮質(zhì)凝血［6］;地龍具有多種活性蛋白，擁有纖溶活性的蛋白水解酶，可直接參與纖溶系統(tǒng)的調(diào)節(jié)［7］;丹參有改善腎小管上皮細(xì)胞變性，增加腎血流量，改善肌酐清除率，降低尿素氮作用［8］。

本實驗研究結(jié)果顯示，芪蛭腎安丸可明顯增加腎上腺素致微循環(huán)障礙模型小鼠耳廓微動脈及微靜脈管徑，加快微血管內(nèi)紅細(xì)胞流速，改善小鼠耳廓微循環(huán)。芪蛭腎安丸的降低蛋白尿、改善腎功能的作用機(jī)制之一可能是通過改善微循環(huán)，增加腎血流量而實現(xiàn)。

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Study of effect of Qizhi Shenan pill on auricle microcirculation of mouse

ZHAN Wenyan*，WEI Fuling，WANG Xinguo.*Department of Nephrology，Handan Mingren Hospital in Hebei Province，Hebei，Handan 056006

ObjectiveTo study the effect of Qizhi Shenan pill on auricle microcirculation of mouse.Methods50 Kunming male mice with microcirculatory disorders were manufactured by tail vein injection of epinephrine.Then 50 mice with microcirculatory disorders model were randomly divided into five groups，high－，middle－，low－ dose Qizhi Shenan pill(

5.6，2.8，1.4 g/kg Qizhi Shenan pill)group，Niuduqing granule group(received 6.0 g/kg Niuduqing granule)and control group(received distilled water).Microarteries，venule diameter，microvascular erythrocyte flow rate of mouse right ear were observed with cold light source after 20 and 40 min of administration.ResultsThere was significant difference between before and after modeling on the pinna microarteries，venule diameter，microvascular erythrocyte flow rate in each group(P ＜ 0.01).There was significant difference between high－，middle－，low－dose Qizhi Shenan pill group and control group on the pinna microarteries，venule diameter，microvascular erythrocyte flow rate in each group(P ＜0.05).ConclusionQizhi Shenan pill can obviously increase the pinna microarteries，venule diameter，microvascular erythrocyte flow rate of mouse with auricle microcirculation disorders model，improve auricle microcirculation of mouse，reduce proteinuria and improve renal function by improving microcirculation and increasing renal blood flow.

Qizhi Shenan pill;Microcirculation;Animal;Experiment;Mouse

R－332;R289.61

A

1002－2619(2012)12－1869－03

1 河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥藥理教研室，河北 石家莊050091

詹文彥(1961—)，男，主任中醫(yī)師，碩士。從事腎內(nèi)科臨床工作。

2012－04－16)