槲皮素對蛋黃卵磷脂含量的影響

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所 張 琳 李 垚＊ 劉紅南 劉 瑩 馮香安 金 芳 索艷麗 呼林林 劉延國

隨著生活水平不斷提高，人們對雞蛋品質(zhì)的要求也越來越高。卵磷脂又名磷脂酰膽堿，在西方國家被譽(yù)為與蛋白質(zhì)、維生素并列的 “第三營養(yǎng)素”，在機(jī)體脂質(zhì)代謝中起重要作用。卵磷脂能夠改善記憶力，促進(jìn)大腦發(fā)育（Miller，2002）。雞蛋是人們?nèi)粘Ｉ攀持袛z取卵磷脂的主要來源，因此，開發(fā)高卵磷脂含量的功能型雞蛋日益受到人們的關(guān)注。槲皮素又名櫟精，是沙棘總黃酮的主要成分，屬于黃酮類化合物中的一種。黃酮類化合物具有降血脂、調(diào)節(jié)畜禽脂質(zhì)代謝等生物學(xué)作用。目前國內(nèi)外研究表明，綠茶酚、兒茶素、大豆黃酮等黃酮類化合物能夠改善磷脂代謝，抑制磷脂氧化，提高磷脂抗氧化能力（Fu 等，2011；Naumov 等，2010），但有關(guān)槲皮素在蛋雞上的應(yīng)用研究仍鮮見報道。本試驗(yàn)旨在研究沙棘黃酮主要成分之一槲皮素對蛋黃卵磷脂含量的影響，為開發(fā)高卵磷脂雞蛋生產(chǎn)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 槲皮素購于阿拉丁公司，純度≥97%。海賽蛋雞購自哈爾濱益農(nóng)禽業(yè)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計與日糧組成 將體重和產(chǎn)蛋率相近的29周齡健康海賽蛋雞240只隨機(jī)分4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。分別為對照組（基礎(chǔ)日糧）、試驗(yàn)Ⅰ組（基礎(chǔ)日糧＋0.02%槲皮素）、試驗(yàn)Ⅱ組（基礎(chǔ)日糧＋0.04%槲皮素）、試驗(yàn)Ⅲ組（基礎(chǔ)日糧＋0.06%槲皮素）。預(yù)試期1周，試驗(yàn)共8周。日糧配制參考NRC（1994），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 采用密閉式雞舍，3層立體籠養(yǎng)。試驗(yàn)期白天為自然光照，早晚輔以人工照明，每天恒定光照為16 h，自由采食和飲水，按常規(guī)程序進(jìn)行免疫和雞舍消毒。

1.4 測定指標(biāo)

1.4.1 蛋黃中粗脂肪、卵磷脂及水分含量的測定每重復(fù)收集2枚蛋，4℃保存。用于測定蛋黃中水分、粗脂肪與卵磷脂含量。蛋黃含水量 /%=（蛋黃失重/蛋黃重）×100；蛋黃粗脂肪含量采用乙醚提取法測定；蛋黃卵磷脂含量采用紫外分光光度法測定。

1.4.2 血清生化指標(biāo)的測定 試驗(yàn)結(jié)束時每重復(fù)隨機(jī)選2只雞前腔靜脈采血，離心后制備血清，-20℃保存。血清游離脂肪酸（FFA）：化學(xué)比色法測定（試劑盒購于南京建成科技有限公司）；極低密度脂蛋白膽固醇 （VLDL-C）：Friedwald公式法測定；載脂蛋白 B（apo-B）與載脂蛋白 A1（apo-A1）：透射比濁法測定；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：磷鎢酸-鎂沉淀法測定（試劑盒購于中生北控生物科技股份有限公司）。胰島素（INS）與雌二醇（E2）采用放射性免疫法測定（試劑盒購于北京北方生物技術(shù)研究所）。測定步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)以 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 17.0軟件One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析，Duncan’s法進(jìn)行組間多重比較，以P＜0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 槲皮素對蛋黃中卵磷脂、粗脂肪及水分含量的影響 由表2可知，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅱ組蛋黃卵磷脂與粗脂肪含量分別顯著提高19.86%和5.81%（P＜0.05），其他各組間均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 槲皮素對蛋黃中卵磷脂、粗脂肪及水分含量的影響 %

2.2 槲皮素對蛋雞血清雌二醇和胰島素水平的影響 由表3可知，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅱ組E2含量顯著提高（P＜0.05），較對照組高135.43%，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組INS水平顯著提高（P＜0.05），同時試驗(yàn)Ⅱ組顯著高于其他各處理組（P＜0.05）。

表3 槲皮素對蛋雞血清E2、INS水平的影響

2.3 槲皮素對蛋黃卵磷脂相關(guān)血脂指標(biāo)的影響由表4可知，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組血清FFA含量顯著提高41.26%（P＜0.05），其他各組無顯著差異 （P＞0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組的血清VLDL-C、apo-B、apo-A1含量顯著提高（P ＜ 0.05），分別較對照組提高19.66%、26.62%和49.08%，其他各組間均無顯著差異（P＞0.05）。

表4 槲皮素對蛋黃卵磷脂相關(guān)血脂指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 槲皮素對蛋黃卵磷脂合成的影響 肝臟合成卵磷脂主要是通過CDP-膽堿與腦磷脂甲基化途徑，CDP-膽堿途徑中起始酶 （ChoK）與限速酶（CCT）的活性與卵磷脂合成量密切相關(guān)。CCT存在于細(xì)胞溶膠和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，但只有與膜結(jié)合的部分具有活性，脂肪酸能夠推動CCT與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合，使CDP-膽堿途徑順利進(jìn)行（王鏡巖等，2002）。研究發(fā)現(xiàn)，大豆黃酮、葛根總黃酮能夠顯著提高小鼠血清游離脂肪酸含量（鄧炳楠等，2012；方升等，2006）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，槲皮素能夠顯著提高血清游離脂肪酸含量，這一結(jié)果與上述報道一致。大量研究顯示，黃酮類化合物通過調(diào)節(jié)動物體的內(nèi)分泌機(jī)制，提高血清胰島素與雌二醇含量（弓琴等，2009；Yang等，2000）。此外，胰島素和雌二醇與PC合成途徑關(guān)鍵酶活性密切相關(guān)。研究顯示，17-β-雌二醇可使胎兔肺胞漿CCT活性增高，而雌二醇、乙烯雌酚（DES）等雌激素可以促進(jìn)腦磷脂（PE）甲基化生成卵磷脂、增加ChoK的數(shù)量。在體外試驗(yàn)中，胰島素處理肝細(xì)胞，對ChoK活性具有一定的調(diào)節(jié)作用（朱正美，1985）。同時，胰島素可使胰島β細(xì)胞內(nèi)卵磷脂分解代謝的關(guān)鍵酶磷脂酶Cγ1發(fā)生磷酸化，使其失活，從而抑制卵磷脂分解 （李廣文，2009）。本試驗(yàn)條件下，三個槲皮素添加組均提高了血清游離脂肪酸、雌二醇和胰島素含量，試驗(yàn)Ⅱ組卵磷脂含量顯著提高，提示蛋黃卵磷脂含量提高與血清FFA、E2與INS含量提高有關(guān)，高劑量槲皮素對蛋黃卵磷脂無顯著影響，可能與雌激素的拮抗作用有關(guān)，黃酮類化合物具有雌激素活性或抗雌激素活性的雙向作用，主要取決于受試對象本身的激素水平與機(jī)體自身狀態(tài)，當(dāng)體內(nèi)雌激素水平較高時，則與雌激素受體競爭性結(jié)合，降低雌激素的生物活性；當(dāng)內(nèi)源性雌激素水平較低時，能與受體相結(jié)合而表現(xiàn)出雌激素樣作用。由此推測，由于產(chǎn)蛋高峰期蛋雞體內(nèi)較高的雌激素水平，高劑量槲皮素主要表現(xiàn)出抗雌激素作用。

3.2 槲皮素對蛋黃卵磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 蛋禽在產(chǎn)蛋期，肝臟中合成的卵磷脂以VLDL-C與HDLC形式進(jìn)入血液，apo-B、apo-A1是 VLDL-C、HDL-C主要的載脂蛋白，為其正確組裝所必需。研究發(fā)現(xiàn)，主要成分為槲皮素、山奈酚、兒茶素等黃酮類物質(zhì)的紅桑能夠極顯著升高患有糖尿病大鼠血清中VLDL-C水平，結(jié)論顯示，紅桑提取物能夠改善血脂組成，同時對糖尿病有一定治療作用（Ikewuchi等，2011）。黃酮類化合物具有雌激素樣作用，同時有研究顯示，VLDL-C的合成與基因轉(zhuǎn)錄分別受胰島素、雌激素的調(diào)控，同時雌激素對apo-B也有一定的影響。HDL-C主要由卵磷脂構(gòu)成，肝臟合成新生HDL以磷脂和Apo-A1為主。有關(guān)黃酮類化合物的大量研究表明，黃酮類化合物對動物的脂質(zhì)代謝具有調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，以紫色甘薯中總黃酮飼喂糖尿病癥狀改善后的大鼠，結(jié)果表明，高、中等劑量處理組血清HDL-C水平極顯著升高（Jiang等，2011）。apo-A1是 HDL-C 的最主要載脂蛋白，既是卵磷脂-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）的激活劑，又是HDL-C的配體，黃酮類化合物能夠上調(diào)高密度脂蛋白代謝相關(guān)蛋白apo-A1 mRNA的表達(dá)。何旭東等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，大豆異黃酮具有預(yù)防大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的作用，試驗(yàn)結(jié)果顯示，處理組血清HDL-C顯著升高，顯著上調(diào)apo-A1 mRNA的表達(dá)。肝臟apo-A1 mRNA水平顯著增高，促進(jìn)肝臟合成apo-A1，增加血清apo-A1含量，提高血清HDL-C水平。本試驗(yàn)條件下，三個槲皮素添加組均升高了血清VLDL-C、apo-B、apo-A1含量，0.04%槲皮素顯著高于對照組，而高劑組未產(chǎn)生顯著影響，可能與雌激素的拮抗作用有關(guān)。提示，蛋黃卵磷脂含量的升高與血清VLDLC、apo-B、apo-A1 含量升高有關(guān)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，一定劑量的槲皮素可通過提高血清FFA、E2與INS含量升高蛋黃卵磷脂合成中關(guān)鍵酶的活性；通過提高血清VLDL-C、apo-B、apo-A1含量升高卵磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中脂蛋白含量，進(jìn)而使蛋黃卵磷脂含量升高。

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