乙型肝炎和丙型肝炎患者血清抗肝特異性抗體測定

趙明才，陳 瓊，羅光成，王 梓，王 強，陳 悅

(1.川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科;2.川北醫(yī)學院風濕免疫研究所，四川 南充 637000)

病毒性肝炎是由多種肝炎病毒所引起的，以肝 病變?yōu)橹鞯娜硇詡魅静?。其中乙型肝炎病?hepantitis B virus，HBV)在我國一般人群中的感染率高達60%左右，丙型肝炎病毒(hepantitis C virus，HCV)感染率為3.2%。機體的免疫系統(tǒng)根據(jù)病毒和細胞相互作用的不同過程與結果導致免疫保護和免疫損傷，機體將可能通過分子模擬機制或超抗原等激發(fā)免疫反應，導致T細胞過度激活或破壞，產生自身抗體，其程度可能與感染者肝功能損害和病毒復制水平有密切關系［3］。慢性病毒性肝炎患者體內常檢測出多種自身抗體，自身抗體的出現(xiàn)引發(fā)機體多種組織器官功能的紊亂和病理損傷，加重肝炎病毒感染患者的肝功能障礙。本文對HBV、HCV患者及健康體檢者的肝細胞膜特異性脂蛋白(liver specific lipoprotein，LSP)和去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotin receptor，ASGPR)血清水平進行檢測，觀察肝炎病毒感染患者的肝組織損傷細胞水平表現(xiàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院2011年1月至2011年10月期間住院患者，HBV感染患者51例，HCV感染患者55例的血清標本，35例健康體檢者為正常對照組，血清標本－80℃保存;全自動生化儀7170檢測血漿丙氨酸氨基轉移酶(alannine aminotransferase，ALT)和總膽紅素(total bilirubin，TB)水平。采用上海源越公司生產的anti-LSP和anti-ASGPR ELISA試劑盒，通過雙抗一步法進行測定。

1.2 分組情況

根據(jù)患者ALT＞40 U/mL水平將其分為ALT升高組(H)和ALT正常組(N)。

1.3 統(tǒng)計學分析

對結果采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，使用ANOVA檢驗，Dunnett(2-sided)a與正常對照組比較，HBV與HCV組間采用獨立樣本t檢驗，采用Spearman相關性分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HBV感染組實驗結果

HBV患者與健康對照組實驗結果和AVONA統(tǒng)計分析結果見表1，通過 Dunnett(2-sided)a比較HBV(H)與健康對照組anti-LSP和anti-ASGPR比較有統(tǒng)計學差異，P 值分別為 0.04、0.01。通過Spearman相關性分析anti-ASGPR與ALT具有相關性(r:0.47，P:0.02)。

表1 HBV實驗組與健康對照組實驗結果

2.2 HCV感染組實驗結果

HCV患者與健康對照組實驗結果和AVONA統(tǒng)計分析結果見表2，通過Dunnett(2-sided)a比較HCV(H)與健康對照組anti-LSP比較有統(tǒng)計學差異，P值分別為0.04。通過Spearman相關性分析anti-LSP與anti-ASGPR 具有相關性(r:0.55，P:0.01)。

表2 HCV實驗組與健康對照組實驗結果

2.3 HBV與HCV組anti-LSP和anti-ASGPR表達水平比較

在ALT＞40時anti-ASGPR在HBV患者表達高于 HCV組(t:6.07，P:0.001)，ALT正常水平時HBV患者 anti-LSP表達高于 HCV組(t:3.68，P:0.001)。

3 討論

LSP是肝細胞膜上的一種大分子的膜脂蛋白與細胞內成分的混合物，含有大量肝細胞漿膜抗原。LSP能誘導并能維持抗肝細胞膜的自身免疫反應。LSP可激活中性粒細胞和庫普弗細胞，產生一系列炎性介質和細胞毒介質，如氧自由基、蛋白水解酶等，致使肝細胞的進一步損傷。LSP抗體介導的肝細胞受損傷是通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)。Anti－LSP的產生促使自身B細胞反應活性增高，刺激Th細胞，并對被病毒感染導致自身抗原改變的肝細胞失去耐受性。ASGPR是肝特異性膜蛋白的組分之一，在肝臟實質細胞表面特異性表達，是僅存在于肝細胞肝竇面細胞膜上的一類跨膜糖蛋白，是靶向基因最有效的受體。高效的異源低聚物的內吞受體，亦是病毒的侵入位點，其主要功能是去除去唾液酸糖蛋白和凋亡細胞、清除脂蛋白［1－2］。

HBV侵襲機體在肝細胞內復制，然后從肝細胞中逸出，并不直接引起肝細胞的損害，而是在肝細胞膜表面上形成特異性的病毒抗原。激活細胞免疫產生致敏淋巴細胞，與肝細胞膜表面上的病毒抗原LSP相結合后釋放出各種體液因子，如淋巴毒素、細胞毒因子、趨化因子、移動抑制因子、轉移因子等，在對病毒殺滅同時亦可對肝細胞造成損害，引起壞死和炎癥反應［3］。HCV通過入侵肝細胞，同時通過多種途徑損害免疫系統(tǒng)破壞機體的免疫耐受性，誘發(fā)產生自身免疫反應從而加重肝損傷［4］。丙型肝炎患者血清中存在多種自身抗體，HCV患者自身抗體的出現(xiàn)不僅與HCV感染有關，而且與HCV感染的嚴重程度、病程長短有關。

Yang等［5］研究發(fā)現(xiàn)纖連蛋白和ASGPR均介導HBsAg結合到肝細胞表面，纖連蛋白作為ASGPR的天然配體，纖連蛋白與ASGPR是HBV包裹蛋白中的組成部分。HBV通過pre-S1與ASGPR連接進入細胞，在ASGPR介導的細胞毒性和降解作用下，HBV的DNA編碼到宿主的基因組中，導致病毒血癥的發(fā)生和肝臟炎癥的發(fā)生［6］。在門靜脈周圍肝細胞壞死時在外周血能檢測到anti-LSP，急慢性乙肝感染時會有anti-LSP的表達，anti-LSP水平可反應肝細胞壞死的程度并與疾病輕重相關。ASGPR是吸引致敏肝浸潤淋巴細胞可能性最大的靶抗原，ASGPR作為肝炎癥疾病時體液免疫和細胞免疫反應的指標，定量測定anti-ASGPR有助于監(jiān)測疾病活動性［7］。肝炎病毒感染患者的Anti－ASGPR的存在證實了其與疾病慢性化的高發(fā)病率有關［8］。

本實驗結果中HBV和HCV患者anti-LSP和anti-ASGPR水平較健康對照組增高，ALT水平升高時抗肝特異性抗體表達明顯增高，表明LSP、ASGPR可反映肝細胞損傷，且與疾病嚴重程度成正相關，并通過免疫反應參與HBV、HCV對肝細胞損傷。通過對anti-LSP與anti-ASGRP測定能夠對肝細胞損傷程度進行監(jiān)測，可幫助了解肝臟功能代償情況及機體的免疫表現(xiàn)，為臨床診療與監(jiān)測提供依據(jù)。肝炎病毒感染者中有一部分伴發(fā)自身免疫性肝炎，對抗肝特異性抗體的檢測有助于臨床的鑒別診斷，對治療和預后具有重要的幫助。

［1］Nishikawa M.Development of cell-specific targeting systems for drugs and genes［J］.BiolPharmBull，2005，28(2):195 － 200

［2］Mamidyala SK，Dutta S，Chrunyk BA，et al.Glycomimetic ligands for the human asialoglycoprotein receptor［J］.J Am Chem Soc，2012，134(4):1978 －1981

［3］朱友雙，孫慶元，蒙 敏，等.免疫淀粉微球的制備及其結合特性［J］.化工進展，2008，27(7):1052 －1055

［4］檀玉芬，閆惠平，趙 艷，等.丙型肝炎和自身免疫性肝炎自身抗體的特點分析［J］.中國實驗診斷學，2007，11(5):622 －625

［5］Yang J，Wang F，Tian L，et al.Fibronectin and asialoglyprotein receptor mediate hepatitis B surface antigen binding to the cell surface［J］.Archives of Virology，2010，155(6):881 －888

［6］Treichel U，Meyerzum Büschenfelde KH，Stockert RJ，et al.The asialoglycoprotein receptor mediates hepatic binding and uptake of natural hepatitis B virus particles derived from viraemic carriers［J］.J Gen Virol，1994，75(11):3021 － 3029

［7］Hausdorf G，Roggenbuck D，F(xiàn)eist E，et al.Autoantibodies to asialoglycoprotein receptor(ASGPR)measured by a novel ELISA-revival of a disease-activity marker in autoimmune hepatitis［J］.Clin Chim Acta，2009，408(1-2):19 －24

［8］Diao J，Michalak TI.Virus-induced anti-asialoglycoprotein receptor autoimmunity in experimental hepadnaviral hepatitis［J］.Hepatology，1997，5(3):689 －696