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    馬鈴薯脫毒試管苗繁殖及溫室移栽技術(shù)研究

    2012-06-07 03:50:34李彥榮
    湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年17期
    關(guān)鍵詞:試管苗床成活率

    常 瑛,李彥榮

    (甘肅省農(nóng)墾農(nóng)業(yè)研究院,甘肅 武威 733006)

    馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)為茄科茄屬植物,是我國重要的糧、經(jīng)、飼兼用作物,在我國分布廣泛,栽培面積占世界第2位。甘肅省馬鈴薯常年播種面積達(dá)60萬hm2以上,約占全國播種面積的10%,列西北五省第1位,是我國馬鈴薯主要生產(chǎn)及加工基地之一[1]。近年來,隨著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,播種面積逐年擴大,產(chǎn)生了較好的經(jīng)濟和社會效益。但由于馬鈴薯是無性繁殖作物,經(jīng)過多年留種種植后,體內(nèi)病毒如馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)、馬鈴薯X病毒(PVX)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、馬鈴薯S病毒(PVS)、馬鈴薯M病毒(PVM)和類病毒(PSTV)等逐代傳遞并積累,使馬鈴薯植株矮化,莖稈細(xì)弱,葉片失綠、卷曲或皺縮,薯塊變小或畸形而減產(chǎn)30%~50%,對生產(chǎn)造成嚴(yán)重的危害。自1955年法國Monel首次采用馬鈴薯莖尖剝離生產(chǎn)無病毒植株生產(chǎn)脫毒薯苗應(yīng)用以來,世界各地紛紛采用馬鈴薯莖尖脫毒快繁技術(shù)。我國也于上世紀(jì)70年代初進行了馬鈴薯莖尖組織培養(yǎng),有效地防止了病毒感染和品種退化,提高了良種繁育的速度和產(chǎn)量。馬鈴薯無病毒苗的繁育及溫室移栽主要技術(shù)在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用,有著重要的現(xiàn)實意義。

    1 脫毒苗的培養(yǎng)

    1.1 馬鈴薯莖尖材料的處理

    1.1.1 莖尖接種材料的選取 脫毒處理所用莖尖取自生長活躍的芽,頂芽的莖尖成活率最高。馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒的效果與莖尖大小直接相關(guān),莖尖附近的病毒濃度呈遞減分布,莖尖越小脫毒效果越理想。由于莖尖越小成活率越低,莖尖大小及芽的選擇就尤為重要,一般取帶1~2個葉原基的莖尖約0.1~0.5 mm[2-4]。葉原基提供莖尖生長和發(fā)育的內(nèi)源生長素和細(xì)胞分裂素。尤其應(yīng)注重莖尖大小,一般按0.2~0.5 mm長度切取,易脫毒、也易成活,既保證了一定的成活率,又能排除大多數(shù)病毒。

    1.1.2 莖尖接種材料的消毒 莖尖接種材料的常見消毒方法有3種(表1)。一般情況下,剪取含葉原基的馬鈴薯莖尖芽條1~1.5 cm,采用常規(guī)消毒法既能達(dá)到消毒的目的。如果莖尖材料脫毒前能夠結(jié)合化學(xué)、物理熱處理、光照等效果更佳。

    表1 徑尖接種材料的消毒方法

    1.1.3 莖尖的接種 將經(jīng)消毒處理的莖尖材料置于體視鏡的承物臺上,在40倍的目鏡下左手拿鑷子夾住莖尖材料,右手用解剖針由外向里逐層將莖尖生長點的小葉片和葉原基剝離掉,最后只保留帶1~2個葉原基的生長點,大小約為0.2~0.3 mm。

    莖尖剝離后,用解剖針“切”下生長點接種于經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)基上,封嚴(yán)瓶口放于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。

    1.2 莖尖培養(yǎng)

    1.2.1 培養(yǎng)基 馬鈴薯莖尖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ),并添加其它植物激素,以提高成苗率,縮短試管苗生長周期。實踐證明,6-芐基腺嘌呤(6-BA)、赤霉素(GA3)和萘乙酸(NAA)是馬鈴薯試管苗快繁中使用較多的植物激素。6-BA是誘導(dǎo)莖尖產(chǎn)生叢生芽的主要物質(zhì);GA3能顯著促進試管苗株長高,特別是生長矮小的試管苗對培養(yǎng)基中GA3濃度有明顯反應(yīng);NAA除能增加試管苗高度外,還能延長試管苗各節(jié)節(jié)間長度和增加切段繁殖的可用節(jié)數(shù)。

    羅玉等[2]在MS的基礎(chǔ)上,添加0.1 mg/L GA3、0.1 mg/L NAA和0.05 mg/L 6-BA時,成苗較多,都有愈傷組織化的情況;林叢發(fā)等[3]則在MS的基礎(chǔ)上,添加0.05 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、0.1 mg/L GA3和3%蔗糖,pH值5.8;而崔根芳等[5]研究認(rèn)為采用2倍MS液體培養(yǎng)基,添加0.1 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、0.3 mg/L生長延緩劑B9、0.3%的活性炭和2.5%蔗糖,不僅能縮短試管苗生長周期,加快繁殖速度,提高移栽成活率,而且還可降低成本,比常規(guī)固體培養(yǎng)省時2/3,相對節(jié)電50%,省工40%,降低培養(yǎng)基成本30%,植株在液培中能充分得到熱、氣、水、養(yǎng)的協(xié)調(diào)供應(yīng),生長快而健壯。

    1.2.2 培養(yǎng)條件 莖尖培養(yǎng)條件是:溫度23~25℃;光照強度2 000~4 000 lx;光照時間為12~16 h/d左右。若高于26℃易產(chǎn)生頂部燒苗現(xiàn)象,33℃以上,則瓶苗停止生長[3]。在正常條件下,經(jīng)過30~40 d的培養(yǎng),可見到莖尖有明顯的增長。大約3~4個月后就能長成小植株。

    1.3 病毒檢測

    病毒檢測的目的,是鑒定所獲得的試管苗是否完全脫除所有病毒。病毒檢測方法有兩種:一種是生物學(xué)方法,一種是血清學(xué)方法。目前血清學(xué)方法應(yīng)用普遍的是“酶聯(lián)免疫法(ELISA)[6]”。

    1.4 脫毒試管苗繼代擴繁

    經(jīng)病毒檢測獲得不帶任何病毒的試管苗后,首先在三角瓶或罐頭瓶內(nèi)進行擴繁。試管苗快速擴繁是脫毒馬鈴薯種薯繁殖的第一步。通過繼代擴繁使試管苗達(dá)到一定的基數(shù)是提高脫毒種薯生產(chǎn)量的關(guān)鍵,只有繁殖出足夠的試管苗,才能保證繁殖出足夠的脫毒微型薯。脫毒苗繼代擴繁是在無菌條件下切取帶1~2個葉片和腋芽的節(jié)段接種于繼代培養(yǎng)基上,待其長滿瓶后再切段接種繁殖。

    1.4.1 繼代擴繁培養(yǎng)基 試管苗快速繁殖,既可采用固體培養(yǎng)基,也可采用液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的成分是MS培養(yǎng)基,pH值5.6,不加有機物和植物激素。固體培養(yǎng)基中加入0.8%瓊脂(也可用魔芋粉),液體培養(yǎng)基則不加瓊脂。

    1.4.2 莖節(jié)切段繁殖方法 莖節(jié)切段繁殖,是在無菌條件下將保存的基礎(chǔ)試管苗,按莖節(jié)切段接種于擴繁培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。每個三角瓶內(nèi)培養(yǎng)5~7個獨立節(jié)段(罐頭瓶可培養(yǎng)15~20個),置于組培室普遍采用的多列多層組培架上立體培養(yǎng),培養(yǎng)溫度23~25℃,光照強度3 000 lx,光照時間16 h/d。培養(yǎng)20 d左右,脫毒苗達(dá)到5~7 cm、莖粗0.6~0.8 mm、葉片5~8片時就可移栽。

    1.4.3 壯苗培育 為了提高馬鈴薯脫毒試管苗的移栽成活率,通過繼代擴繁不僅要培育繁殖出足夠數(shù)量的試管苗,而且更應(yīng)培育壯苗。其措施一是充分利用太陽散射光[8];二是在培養(yǎng)基中提高鉀離子的濃度;三是添加合適濃度的生長延緩劑B9。王巧玲等[7]研究認(rèn)為,當(dāng)加入140~155 mg/L KH2PO4、10~20 mg/L B9時,培育的試管苗高度合適、粗壯、葉片大、好移栽,成活率達(dá)100%;趙克蓉[8]在MS培養(yǎng)基中添加30 mg/L B9和500 mg/L的矮壯素(CCC)來控制試管苗徒長,達(dá)到增加莖粗,縮短節(jié)間長度,增強試管苗長勢的目的。

    2 馬鈴薯脫毒苗的溫室移栽

    2.1 脫毒苗煉苗

    脫毒馬鈴薯試管苗是在無菌、有營養(yǎng)供給、適宜光照、溫度和100%的相對濕度環(huán)境中生長的,并有適宜的生長激素調(diào)節(jié)其生長代謝。一旦試管苗從試管內(nèi)移到試管外,環(huán)境條件發(fā)生了變化,由異養(yǎng)變?yōu)樽责B(yǎng),由無菌變?yōu)橛芯珊銣?、高濕、弱光向自然變溫、低濕、強光過渡,葉片的光合能力、氣孔的適應(yīng)能力和根的主動吸收能力需要逐漸發(fā)展,葉片表面的角質(zhì)層需要逐漸形成。因此,通過光培煉苗,盡可能使試管苗適應(yīng)外界生存的環(huán)境,以提高移栽成活率。脫毒馬鈴薯試管苗移栽前,首先打開瓶口,逐漸降低濕度,增強自然光光照,通過馴化,新葉逐漸形成蠟質(zhì),產(chǎn)生表皮毛,降低氣孔開度,逐漸恢復(fù)氣孔功能,減少水分散失,促進新根發(fā)生,以適應(yīng)環(huán)境。一般情況下初始光線應(yīng)為日光的1/10,其后每3 d增加10%,逐漸達(dá)到7 000~10 000 lx,中午適當(dāng)遮蔭;濕度按開始3 d為飽和濕度,其后每2~3 d降低5%~10%,直到與大氣相同。經(jīng)過7~10 d左右的煉苗后,脫毒馬鈴薯試管苗就可進行移栽了。

    2.2 苗床的準(zhǔn)備

    2.2.1 苗床的配制 移栽脫毒苗的苗床介質(zhì)關(guān)鍵是疏松通氣,適宜的保水性,而且不易滋生雜菌。一般選用粗粒狀蛭石、粗沙、爐灰渣、鋸木屑等,或?qū)⑺鼈円砸欢ǖ谋壤旌鲜褂??;蛟谒芰洗笈锏葴厥覂?nèi)南北向用干凈的河沙或蛭石配制苗床,最好采用蛭石,或蛭石和珍珠巖按1∶1的配比,并用水和好(手握成團但不淌水),鋪在溫室床內(nèi),厚度3~5 cm,刮平后消毒待栽。

    2.2.2 苗床的消毒 消毒時用代森錳鋅750~800倍液,或敵克松800~900倍液,或多菌靈1 000倍液,或百菌清600~800倍液,或1%福爾馬林溶液任選一種。苗床消毒5 d后即可進行移栽。

    2.3 脫毒苗移栽及管理

    經(jīng)過5~7 d的光培煉苗后,試管苗就可由瓶內(nèi)移栽到苗床上。移栽前浸濕或澆濕苗床基質(zhì),移栽時一定要避開中午的強光,或采取遮陽網(wǎng)遮蔭措施,降低光強。

    移栽時采用開淺溝栽苗,按行距4~5 cm,株距3 cm左右開深1~2 cm的淺溝,把用15℃(35~40℃)的清水洗凈根部液體(固體)培養(yǎng)基的幼苗栽入,大苗宜深,小苗宜淺,栽后輕輕擠壓苗基部,并用噴(灑)壺適時適量噴(灑)水,使苗根部與基質(zhì)接觸,但不可出現(xiàn)積水現(xiàn)象。然后在其上部用塑料薄膜搭一高20~30 cm的小拱棚。

    試管苗移栽后,根據(jù)溫室內(nèi)溫度和光照強度適當(dāng)遮蔭,控制光溫條件。溫度:馬鈴薯喜冷涼,不耐高溫,塊莖形成和膨大的最適宜溫度為16~18℃,晝夜溫差大對塊莖形成和膨大有利,溫度過高,蒸騰作用加強,并易滋生細(xì)菌類,同時,溫度不宜過低,否則幼苗生長遲緩或不易成活。濕度:拱棚內(nèi)前5 d保證苗床90%以上的濕度,7 d后在小拱棚上逐漸增加開孔數(shù),降低濕度,15 d后去掉小拱棚。光強:自然光周期下3 000~10 000 lx。脫毒苗成活后,根據(jù)苗情每隔1~2 d噴澆1次小水,苗弱時可噴施0.5%~1.0%的尿素或0.2%的磷酸二氫鉀等營養(yǎng)液,10~15 d一次,苗徒長時噴施多效唑或矮壯素。

    [1] 李繼明,李守強,田世龍,等.甘肅馬鈴薯貯藏保鮮中存在的問題及建議[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技,2009,(11):21-23.

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    [3] 林叢發(fā),魏澤平,羅仰奮,等.馬鈴薯試管苗培育快繁八要點[J].福建農(nóng)業(yè)科技,2001,(1):37.

    [4] 曹孜義,劉國民.實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M].甘肅:科學(xué)技術(shù)出版社,1996.

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