巨噬細(xì)胞與乙型肝炎相關(guān)性肝病肝移植后乙型肝炎復(fù)發(fā)的聯(lián)系

黃元亮

巨噬細(xì)胞屬于人體一種重要的免疫細(xì)胞，同時作為一種多功能細(xì)胞，是人體內(nèi)的“清道夫”，能夠去除體內(nèi)壞死的細(xì)胞等物質(zhì)，具有抗感染、抗腫瘤、免疫應(yīng)答以及免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)效應(yīng)［1］。我國乙肝患者數(shù)量巨大，因次由乙肝所引起嚴(yán)重肝硬化、肝癌等疾病患者較多。現(xiàn)代臨床公認(rèn)，肝移植作為唯一有效的治療手段對治療終末期肝病有明顯的效果。但乙肝終末期患者肝病肝移植手術(shù)后，在未做任何預(yù)防性措施下乙型肝炎的復(fù)發(fā)率可達(dá)到80%［2］。我院通過對近年來肝移植后乙型肝炎復(fù)發(fā)患者的研究，分析噬細(xì)胞與乙型肝炎相關(guān)性肝病肝移植后乙型肝炎復(fù)發(fā)的聯(lián)系，取得了預(yù)期效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月至2012年1月在我院接受治療的巨噬細(xì)胞與乙型肝炎相關(guān)性肝病肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)患者14例作為觀察組，其中男8例，女6例，年齡為34～67歲，平均50.2歲;另將同一時期肝移植后未出現(xiàn)乙肝復(fù)發(fā)的患者11例作為對照組，男性患者6例，女性患者5例，年齡為31～64歲，平均年齡為48.7歲。兩組患者均符合參照全國傳染病與寄生蟲學(xué)術(shù)會議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且排除其他肝炎疾病(甲、丙、丁、戊型肝炎病毒混合以及重疊感染)［3］。患者均知情且簽署知情同意書。兩組患者在年齡、體重、病程等一般情況方面無明顯差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法 ①無菌操作抽取兩組患者外周靜脈血，進(jìn)行巨噬細(xì)胞的分離以及培養(yǎng)，采用Ficoll密度梯度離心法將兩組患者靜脈血標(biāo)本進(jìn)行分離，取外周血中單個核淋巴細(xì)胞，用預(yù)溫的完全培養(yǎng)基(10%小牛血清如RPMI1640培養(yǎng)基)進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，每隔2 d半量換液，連續(xù)培養(yǎng)7 d，獲得貼壁細(xì)胞。②運(yùn)用流式細(xì)胞儀機(jī)進(jìn)行檢測，記錄貼壁細(xì)胞表面CD14的表達(dá)水平。③HBV-cccDNA的實驗室檢測嚴(yán)格按照檢測試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行操作，采用熒光定量PCR法，測定并記錄培養(yǎng)所得到的巨噬細(xì)胞乙肝病毒HBV-cccDNA的載量。

1.3 結(jié)果評定 ①采用流式細(xì)胞技術(shù)，實驗室檢測細(xì)胞表面特征性標(biāo)志抗體CD14，以比較兩組貼壁細(xì)胞的分子表達(dá)情況。②采用熒光定量PCR法，檢測并記錄培養(yǎng)所得的巨噬細(xì)HBV-cccDNA。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t檢驗;計數(shù)資料采用c2檢驗，以P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 經(jīng)過實驗分析比較，觀察組和對照組巨噬細(xì)胞表面CD14分子的表達(dá)情況如表1所示。觀察組患者的巨噬細(xì)胞表面CD14分子表達(dá)率為56.17±(6.72)%，差于對照組患者的分子表達(dá)率62.20±(6.11)%，且兩組相比較具有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 觀察組和對照組巨噬細(xì)胞表面CD14分子表達(dá)率(%)

表1 觀察組和對照組巨噬細(xì)胞表面CD14分子表達(dá)率(%)

注:與對照組相比較，▲P＜0.05

CD14觀察組 14 56.17±(6.72)%組別 例數(shù)▲對照組 11 62.20±(6.11)%

2.2 經(jīng)過實驗分析比較，觀察組和對照組標(biāo)本HBV-cccDNA陽性率情況如表2所示。觀察組14例患者中，陽性例數(shù)為9例，陽性比率為64.29%;對照組11例患者中，陽性例數(shù)僅為1例，陽性比率為9.09%，且兩組相比較具有顯著性差異(P＜0.05)。

表2 觀察組和對照組標(biāo)本HBV-cccDNA陽性率比較(例%)

3 討論

乙型病毒性肝炎(HBV)是由乙型肝炎病毒引發(fā)的疾病，能夠引起肝臟的病變，HBV起病比較緩，以亞臨床型及慢性型較常見［4］。乙肝具有傳染性，主要傳播途徑是通血液、母嬰以及性接觸。目前預(yù)防以及控制HBV的根本措施是乙肝疫苗。HBV在整個世界范圍之內(nèi)呈現(xiàn)廣泛流行的趨勢，目前HBV主要在我國以及其他部分亞洲國家中廣泛流行。我國是HBV大國，我國人口中大約1/10為乙肝病毒的攜帶者，是世界上乙肝病毒攜帶者最多的國家，而且大多數(shù)沒有癥狀，僅有1/3的病毒攜帶者出現(xiàn)肝臟損害［5］。慢性HBV患者約1/3～1/2的患者最終可能發(fā)展為嚴(yán)重肝硬化、肝癌等終末期肝臟疾病，需行肝移植手術(shù)，所以我國的肝移植潛在需求量非常大。乙肝病毒具有非常強(qiáng)烈的嗜肝特性，能夠損傷肝臟細(xì)胞，破壞肝細(xì)胞的正常功能［6］。近年來隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)及核酸分子雜交術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，研究表明乙肝病毒也能夠感染肝臟外組織或者細(xì)胞，并且在其中進(jìn)行復(fù)制。國外專家學(xué)者報道證明，乙肝病毒能夠感染外周血單個核淋巴細(xì)胞系統(tǒng)，破壞人體的免疫細(xì)胞，對人體的免疫系統(tǒng)造成影響。

目前研究認(rèn)為，清除了病毒細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA，才能夠徹底清除乙肝病毒患者的攜帶狀態(tài)。在肝移植術(shù)后，患者移植肝再次被乙肝病毒感染，其病毒一定來源于患者體內(nèi)。過去醫(yī)學(xué)界認(rèn)為，乙肝病毒只能夠影響感染肝臟，但現(xiàn)在國內(nèi)外研究報道肝移植后肝再感染乙肝病毒可能來自肝外的組織或者細(xì)胞，如脾、淋巴等組織或細(xì)胞［7］。本次實驗研究中，觀察組14例患者中，陽性例數(shù)為9例，陽性比率為64.29%;對照組11例患者中，陽性例數(shù)僅為1例，陽性比率為9.09%(P＜0.05)，可見乙肝復(fù)發(fā)患者HBV-cccDNA陽性率顯著高于未復(fù)發(fā)患者。

綜上所述，在沒有外源性感染等情況下，巨噬細(xì)胞內(nèi)的HBV-cccDNA可能是乙型肝炎相關(guān)性肝病肝移植后患者乙肝復(fù)發(fā)的主要來源，臨床值得進(jìn)一步思考和研究。

［1］ 陳映，吳忠均.巨噬細(xì)胞與乙型肝炎相關(guān)性肝病肝移植后乙型肝炎復(fù)發(fā)的聯(lián)系.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15(18):2495-2496.

［2］ 劉佃香.慢性乙型肝炎及乙肝肝硬化患者與血小板功能相關(guān)性分析.醫(yī)學(xué)信息，2008，21(5):747-748.

［3］ 師長宏，江鷹，趙勇，毛峰峰，張彩琴，白冰，張海.結(jié)核分枝桿菌Hsp16.3蛋白影響小鼠巨噬細(xì)胞自噬形成的實驗研究.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27(12):1301-1303.

［4］ 劉學(xué)儉.乙肝病毒感染中醫(yī)證型與免疫功能的相關(guān)性研究.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，30(1):6-7.

［5］ 何瑤，黃文生，楊榮萍，陳瑜君，任明.不同亞群肝臟巨噬細(xì)胞在豬血清誘導(dǎo)大鼠免疫性肝損傷中作用.中國病理生理雜志，2010，26(7):1341-1347.

［6］ 黨惠兵.肝細(xì)胞生長因子聯(lián)合粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子治療骨髓增生異常綜合征.中國實用醫(yī)刊，2008，35(14):92-93.

［7］ 高曉卡，李永宏，王寶華.幾種細(xì)胞生長因子與重型肝炎.臨床肝膽病雜志，2008，24(1):62-65.