HPLC法測(cè)定排毒養(yǎng)顏茶中大黃素、大黃酚的含量

王永泉 張建文▲ 徐德麗 董軍梅

1.山東省濰坊市中醫(yī)院，山東濰坊 261041；2.山東省濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261011

排毒養(yǎng)顏茶處方是本院應(yīng)用多年，療效確切的協(xié)定處方，根據(jù)臨床及患者需求，本院制劑中心將對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單開發(fā)，制成袋泡茶，便于患者攜帶服用，該制劑是由大黃、土茯苓、草決明、西洋參、紅參、荷葉、蘆薈等中藥組成，具有潤(rùn)腸通便，排毒養(yǎng)顏，保肝利膽，降脂降壓的功效，用于便秘、面部色素多、青春痘、高脂血癥、高血壓、口腔異味、腹痛腹脹、尿頻尿急等。本文采用高效液相色譜法對(duì)排毒養(yǎng)顏茶中的大黃素、大黃酚建立了含量測(cè)定方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（江蘇金壇市中大儀器廠）；高效液相色譜儀（Agilent公司）；ANASTAR液相色譜工作站；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（KromosilC18 5 μm 250×4.6 mm）。

1.2 試藥

供試品：排毒養(yǎng)顏茶（批號(hào)：20111214，20111215，20111216），由濰坊市中醫(yī)院制劑中心提供；大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756-200110），大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：110796-201118），購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；原藥材購(gòu)于山東海王中藥飲片有限公司；甲醇、乙腈均為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

參考《中國(guó)藥典》2010版一部大黃含量測(cè)定項(xiàng)下的條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸（77∶23）；流速為 1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm[1]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取大黃素、大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素21.8μg、大黃酚29.5μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取排毒養(yǎng)顏茶，研細(xì)，稱取1 g，加入甲醇25 mL，稱重，加熱回流提取1 h，放冷，稱重，補(bǔ)充甲醇至原重，搖勻過濾，取濾液10 mL，揮去溶劑，加入 8%鹽酸10 mL，超聲處理2 min，加入氯仿10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗，取氯仿層（酸液用氯仿再提取3次，每次10 mL，合并氯仿），減壓回收氯仿至干，加甲醇溶解，定容至10 mL。過濾，作為供試液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

取處方量，以相同工藝制備陰性對(duì)照（缺大黃）適量，依2.3項(xiàng)目下方法操作即得陰性對(duì)照液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)與專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖[2-6]，結(jié)果為：大黃素、大黃酚對(duì)照品和供試品色譜圖中大黃素、大黃酚峰與其他組分峰基線分離，分離度大于1.5，保留時(shí)間分別為9.701 min、13.139 min；陰性對(duì)照色譜圖中在與大黃素、大黃酚對(duì)照品中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)大黃素、大黃酚的測(cè)定無干擾。見圖1～3。

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱取大黃素對(duì)照品5.60 mg置25 mL容量瓶中，大黃酚對(duì)照品5.46 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，分別精密吸取對(duì)照品溶液2 mL置于同一10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度（濃度分別為44.80μg/mL、43.68μg/mL），以此為母液，分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8 mL置1 mL量瓶中，分別用甲醇稀釋至刻度，搖勻，另分別取對(duì)照品溶液 1 mL，各取10μL進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果大黃素在8.96～44.8μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=12 572 X-89 104.8，R=0.998 5；大黃酚在 8.736～43.68 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=10 167X+617，R=9 996。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定大黃素和大黃酚峰面積，結(jié)果RSD分別為1.30%、0.95%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號(hào)：20111214）5 份，各約 1 g，精密稱定，分別按2.3供試品溶液的制備項(xiàng)目下方法制備供試品溶液，測(cè)定，結(jié)果大黃素、大黃酚的RSD分別為1.34%、1.07%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取本品（批號(hào)：20111215，大黃素含量：0.467 0 mg/g，大黃酚含量：0.5267）研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，共稱取 6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液（224μg/mL）、大黃酚對(duì)照品溶液（218.4μg/mL）1 mL，按2.3供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，如法測(cè)定大黃素、大黃酚的含量，計(jì)算回收率，大黃素的平均回收率為99.66%，RSD為1.19%；大黃酚的平均回收率為98.51%，RSD為2.77%。

2.10 供試品含量測(cè)定

取三批，每批樣品取2份，分別按上述方法制得供試品溶液按確定的方法測(cè)定樣品中大黃素、大黃酚的含量，結(jié)果見表1。

3 討論

參考藥典，選擇流動(dòng)相比例為甲醇-0.1%磷酸（85∶15），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)樣品峰稍有拖尾，改變流動(dòng)相極性至甲醇-0.1%磷酸（80∶20）和甲醇-0.1%磷酸（77∶23），檢測(cè)發(fā)現(xiàn)前者拖尾現(xiàn)象消失，分離度略有改善，而后者分離度良好亦無拖尾，所以最終確定實(shí)驗(yàn)所用液相條件。

表1 樣品的測(cè)定結(jié)果

對(duì)于供試品的處理方法，采用甲醇超聲-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法和甲醇加熱回流-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的方法進(jìn)行處理，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)后者的測(cè)得含量要明顯高于前者，表明甲醇加熱回流提取的處理方法較好，所以采用甲醇加熱回流-0.8%鹽酸酸化-氯仿萃取-甲醇定容的樣品處理方法。

采用HPLC法測(cè)定排毒養(yǎng)顏茶中大黃素和大黃酚的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可以作為排毒養(yǎng)顏茶質(zhì)量控制的方法。

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