SPE法低成本快速檢測(cè)乳制品中黃曲霉毒素M₁

黃曲霉毒素，1993年被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物。其中黃曲霉毒素B₁毒性和致癌性最強(qiáng)，而黃曲霉毒素M₁是黃曲霉毒素B₁的代謝物，主要存在于牛奶中。衛(wèi)生部官網(wǎng)一份有關(guān)食物中毒的說明文件指出，黃曲霉毒素主要損傷肝臟，致癌性很強(qiáng)，我國(guó)乳及乳制品中規(guī)定黃曲霉毒素M₁限量為0.5ttg／kg。

目前檢測(cè)黃曲霉毒素的方法通常為免疫親和層析凈化高效液相色譜法和酶聯(lián)免疫吸附法([uSA)這兩種方法。酶聯(lián)免疫吸附法(LllSA)操作簡(jiǎn)單，快速，但靈敏度低且會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，需使用免疫親和柱法進(jìn)行精確定性、定量，而免疫親和柱又存在使用繁瑣、價(jià)格昂貴、儲(chǔ)存條件苛刻，保存期短等缺點(diǎn)。

迪馬科技最新開發(fā)的快速ProElutTM固相萃取方法擁有與免疫親和柱法相當(dāng)?shù)母呔然厥章式Y(jié)果，但使用成本大大降低。ProElut_TM固相萃取法單個(gè)樣品的檢測(cè)成本為免疫親和柱法的1／4，酶聯(lián)免疫法的1／2，同時(shí)ProElut_TM固相萃取法簡(jiǎn)單易操作、不需要專用的大型設(shè)備、對(duì)操作人員要求不高，特別適用于各種乳品生產(chǎn)企業(yè)及檢測(cè)機(jī)構(gòu)，將大大降低黃曲霉毒素的檢測(cè)成本。

1樣品準(zhǔn)備／提取

(1)牛奶、原料乳等液態(tài)奶制品

稱取5g樣品，加入5mL乙腈，渦旋混合1min：再加入10mL乙腈，渦旋混合1min：4000rpm離心5min，取上清液5mL，作為上樣液待凈化。

(2)奶粉、乳酪等固體奶制品

稱取2g樣品，加入5mL水，渦旋混合2min：加入5mL乙腈，渦旋混合1min：再加入1 0mL乙腈，渦旋混合1min：4000rpm離心5min，取上清液5mL，作為上樣液待凈化。

2SPE柱凈化——ProElutTM AFT黃曲霉毒素檢測(cè)專用柱1500mg／12mL(cat#65904)

(1)活化：10mL乙腈，流出液棄去：

(2)上樣：將上樣液加入柱中，接收流出液；

(3)洗脫：10mL乙腈洗脫，收集流出液。合并步驟(2)、(3)流出液：

(4)重新溶解：在40~C下用減壓蒸餾將流出液濃縮至大2mL，向旋蒸瓶中加,／XSmL無水乙醇，繼續(xù)減壓蒸餾近干，用10％乙腈水定容至0.5mL，供HPLC分析。

3分析條件

色譜柱：DiamonsiC18(2)，250mm×4.6mm×5um(Cat#99603)：

流速：1.0mL／min；

檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器(Ex：365nm、Em：435nm)：

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：20uL

流動(dòng)相：乙腈／水(25／75)。

4添加回收結(jié)果

(1)牛奶中黃曲霉毒素M1添加回收結(jié)果，見表1。

5結(jié)論

迪馬科技為乳制品檢測(cè)開發(fā)的新型，快速，低成本sPE法檢測(cè)乳制品中黃曲霉毒素M₁方法克服了免疫親和柱方法檢測(cè)費(fèi)用高、存儲(chǔ)條件苛刻、保質(zhì)期短等缺點(diǎn)，該方法具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果重現(xiàn)性好、使用成本低、存儲(chǔ)方便等優(yōu)點(diǎn)，特別適合大中型乳品企業(yè)，乳品檢測(cè)機(jī)構(gòu)等采用。

迪馬科技ProElut_TM系列固相萃取柱能夠?qū)θ橹破坊|(zhì)進(jìn)行有效地提取和凈化，黃曲霉毒素M₁回收率高，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，檢出限結(jié)果能夠滿足國(guó)標(biāo)對(duì)于黃曲霉毒素M₁的限量標(biāo)準(zhǔn)要求，值得作為種新型的乳制品中黃曲霉毒素M₁的檢測(cè)方法全面推廣。