藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)技術(shù)

湯偉華

摘要：以４個藍(lán)莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ．）品種生長旺盛期的帶芽莖段為供試材料，研究了不同品種、不同基本培養(yǎng)基、不同激素組合對藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，改良的ＷＰＭ為適合藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基；添加生長素萘乙酸（NAA）對藍(lán)莓莖段的發(fā)芽率并無促進(jìn)作用，添加玉米素（Zt）能提高藍(lán)莓莖段的發(fā)芽率，改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ ０．５ ｍｇ／Ｌ為藍(lán)莓最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基；相同初代培養(yǎng)基上藍(lán)莓不同品種側(cè)芽萌發(fā)有先后，園藍(lán)最早，芭爾德溫次之，夏普蘭最后。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ．）；莖段；初代培養(yǎng)

中圖分類號：Ｓ６６３．９文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1263-02

Study on the Initial Culture Technology of Stem Segment of Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ．

ＴＡＮＧ Ｗｅｉ－ｈｕａ

（Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ， Ｌｉｓｈｕｉ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｌｉｓｈｕｉ ３２３０００， Ｚｈｅｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ， ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｉｔｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ４ Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ． ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ， ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｏｌｉｄ ＷＰＭ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ of Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ． ｉｎｉｔｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ； ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｘｉｎ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ．； ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ｚｅａｔｉｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ． ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ； ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ ０．５ ｍｇ／Ｌ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｇｒｅａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｍｅｄｉｕｍ， Ｇａｒｄｅｎｂｌｕｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ Ｂａｌｄｗｉｎ； Ｓｈａｒｐｂｌｕｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｈｅ ｗｏｒｓｔ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ． ； ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ； ｉｎｉｔｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ

藍(lán)莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｓｐ．）又名越橘或藍(lán)漿果（Ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ），屬杜鵑花科越橘屬落葉或半落葉灌木小果樹。成熟的藍(lán)莓口味酸甜適中，果肉細(xì)膩，清爽宜人，營養(yǎng)價值高，日本和美國都將藍(lán)莓列為首要抗癌食品，國際糧農(nóng)組織將其列為人類五大健康食品之一［１］。美國自２０世紀(jì)３０年代末開始對其進(jìn)行商業(yè)性栽培，中國的藍(lán)莓生產(chǎn)起步較晚，目前尚處于引種試驗階段，且引種工作正在日益擴(kuò)大［２］，由于當(dāng)前藍(lán)莓種苗量少價高，因此迫切需要對藍(lán)莓品種進(jìn)行繁殖研究。目前國內(nèi)有藍(lán)莓組織培養(yǎng)技術(shù)研究的相關(guān)報道，但對不同藍(lán)莓品種組織培養(yǎng)特性缺乏系統(tǒng)報道。為此，２００８年開始，從新昌縣西山果業(yè)有限公司引進(jìn)了兔眼藍(lán)莓優(yōu)良品種試種，并開展了不同品種組培無性繁育技術(shù)研究，現(xiàn)針結(jié)果報告如下。

１材料與方法

１．１材料

供試藍(lán)莓品種為芭爾德溫（Ｂａｌｄｗｉｎ）、粉藍(lán)（Ｐｏｗｄｅｒ ｂｌｕｅ）、園藍(lán)（Ｇａｒｄｅｎ ｂｌｕｅ）、夏普蘭（Ｓｈａｒｐ ｂｌｕｅ），選取材料類型為生長旺盛期帶芽莖段。

１．２方法

１．２．１材料處理從健康生長的植株上剪取當(dāng)年生的枝條，去除葉片，先用肥皂水洗凈，再用流水沖洗２ ｈ。在超凈工作臺上先用體積分?jǐn)?shù)為７０％的乙醇溶液表面消毒３０ ｓ，然后用１ ｇ／Ｌ的ＨｇＣｌ２浸泡８ ｍｉｎ，用無菌水沖洗５次，用無菌濾紙吸去多余水分，最后將外植體剪成單芽莖段，分別接種到不同的初代培養(yǎng)基中。

１．２．２不同基本培養(yǎng)基、不同品種對藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的影響采用改良的ＷＰＭ［３］、Ｂ５、ＭＳ ３種基本培養(yǎng)基，均添加Ｚｔ（玉米素）１．５ ｍｇ／Ｌ、蔗糖２０ ｇ／Ｌ、瓊脂６ ｇ／Ｌ，ｐＨ ５．５。４個品種單芽莖段分別接種到不同的３種初代培養(yǎng)基中，共計１２個處理，每個處理４０瓶，培養(yǎng)４０ ｄ后，通過統(tǒng)計莖段側(cè)芽的成活率間接了解側(cè)芽的發(fā)芽率，觀察其生長狀況。

１．２．３不同激素組合對藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的影響基于１．２．２的試驗結(jié)果，挑選適宜的基本培養(yǎng)基及品種，采用６種激素處理：①改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ；②改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ；③改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ；④改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ ０．５ ｍｇ／Ｌ；⑤改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ １．０ ｍｇ／Ｌ；⑥改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ ２．０ ｍｇ／Ｌ。３個品種，１８個處理，培養(yǎng)４０ ｄ后，通過統(tǒng)計莖段側(cè)芽的成活率間接了解發(fā)芽率，觀察其生長狀況。

１．２．４培養(yǎng)條件把培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)室里培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為２５ ℃，光照度為２ ０００ ｌｘ，光照時間為１２ ｈ／ｄ。

２結(jié)果與分析

２．１不同基本培養(yǎng)基對４個藍(lán)莓品種莖段初代培養(yǎng)的影響

藍(lán)莓品種在３種基本培養(yǎng)基上的表現(xiàn)不同（表１）。在改良的ＷＰＭ培養(yǎng)基上，藍(lán)莓莖段的平均成活率最高，且叢生芽分化和增殖生長最好，數(shù)量也最多，其次分別為在Ｂ５培養(yǎng)基和ＭＳ培養(yǎng)基上，而且藍(lán)莓品種在后兩種基本培養(yǎng)基上生長的外植體表現(xiàn)為叢生芽淡黃色，叢生芽分化和增殖生長差，因此Ｂ５培養(yǎng)基和ＭＳ培養(yǎng)基不太適合藍(lán)莓莖段芽的誘導(dǎo)。不同藍(lán)莓品種在改良的WPM培養(yǎng)基上的平均成活率以及叢生芽分化和增殖表現(xiàn)各異，其中表現(xiàn)最好的為園藍(lán)，最差的為粉藍(lán)，芭爾德溫和夏普蘭處于兩者之間。

２．２不同激素組合對藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的影響

由表２可以看出，藍(lán)莓在不同的激素組合下的平均成活率以及莖段叢生芽分化和增殖生長表現(xiàn)不同。

試驗結(jié)果表明，藍(lán)莓莖段的離體發(fā)芽率受到培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素的調(diào)控，添加生長素對其萌芽并無促進(jìn)作用；在供試的細(xì)胞分裂素中，單獨使用６－ＢＡ的組合的外植體也增殖，但其成活率和發(fā)芽率均低于或等于添加Ｚｔ的組合，對于處理①至處理③，隨著培養(yǎng)基中添加的ＮＡＡ濃度的增加，藍(lán)莓的平均成活率逐漸下降。處理④至處理⑥的藍(lán)莓的平均成活率較高，植株長勢良好，叢生芽的誘導(dǎo)和增殖最多，其中處理⑥的平均成活率最高，達(dá)８7．5％。綜合考慮添加Ｚｔ的成本以及處理④與處理⑥的平均成活率差異不大，故選擇處理④即改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ ０．５ ｍｇ／Ｌ為藍(lán)莓的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

２．３不同品種對藍(lán)莓莖段初代培養(yǎng)的影響

不同藍(lán)莓品種在同一濃度激素處理下側(cè)芽的萌發(fā)也有差別，其中園藍(lán)側(cè)芽萌發(fā)最早，長勢最好，1周以后側(cè)芽開始萌發(fā)，４周后約１／４的植株側(cè)芽長成６～８ ｃｍ的新梢，新梢同時也萌發(fā)出４～６個叢生芽。芭爾德溫側(cè)芽萌發(fā)時間次之，夏普蘭最后。

３討論

劉樹英等［４］，黃文江等［５，６］，馬艷麗［７］對兔眼藍(lán)莓的研究認(rèn)為品種間沒有差異，而本研究認(rèn)為同一品種在不同激素組合的初代培養(yǎng)基上成活率和發(fā)芽率表現(xiàn)各不同，說明藍(lán)莓初代培養(yǎng)基與品種有對應(yīng)性，這與之前的研究結(jié)果一致［８，９］。因此針對不同品種的培養(yǎng)基的篩選工作有待進(jìn)一步擴(kuò)展和細(xì)化。國外藍(lán)莓組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基均以改良的ＷＰＭ最好，所用的細(xì)胞分裂素多為Ｚｉｐ、玉米素核苷和ＴＤＺ［１０］，本試驗結(jié)果證實了改良的ＷＰＭ為適合藍(lán)莓初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，在不含萘乙酸（NAA）的培養(yǎng)基上生長更好，這與前人的研究結(jié)果一致［１１］；在添加了６－ＢＡ和玉米素（Ｚｔ）的培養(yǎng)基上其發(fā)芽率均在７5％以上，高于劉樹英等［１２］報道的兔眼藍(lán)莓莖段發(fā)芽率（２５％～７０％），說明Ｚｔ對于藍(lán)莓的組培具有一定的促進(jìn)作用，這為中國藍(lán)莓的工廠化育苗和商品基地的建設(shè)奠定了基礎(chǔ)。對藍(lán)莓的初代培養(yǎng)進(jìn)行了研究，而對藍(lán)莓的后續(xù)培養(yǎng)還需進(jìn)一步研究。

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