白芷美白液體外抑制酪氨酸酶活性的實驗研究

歐喜燕，于秀華

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

隨著現(xiàn)代社會人口素質(zhì)的提高，婦女對年輕化的追求越來越迫切，皮膚護理產(chǎn)品銷售的潛在市場日益擴大。化妝品行業(yè)已經(jīng)進入了一個新的時代，或者至少進入了化妝品研發(fā)領(lǐng)域的新階段。傳統(tǒng)中醫(yī)藥由于毒副作用小，效果顯著，在護膚品中具有不可替代的作用。研究開發(fā)中藥護膚品不僅可以滿足不斷擴大的市場需求，對傳統(tǒng)中醫(yī)藥的開發(fā)也具有重大的意義。本研究主要通過體外實驗，從酪氨酸酶活性抑制方面觀察白芷美白液對皮膚美白祛斑的功能。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗藥品 白芷美白液：由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實驗中心提供；酪氨酸酶：購自美國Worthing-ton公司，2.5萬u/25 mg，批號：20110601；磷酸氫二鈉：購自北京化工廠，500 g/瓶，批號:20100203；磷酸二氫鈉：購自北京化工廠，500 g/瓶，批號:20100203。

1.2 實驗儀器 恒溫箱：型號：GZX-9146MBE，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；紫外-可見分光光度計：型號：Lambda25，美國Perkin Elmer公司產(chǎn)品。

2 實驗方法

2.1 白芷美白液制備方法 白芷2 000 g，加6倍水，浸泡4 h，蒸餾4 h，收集蒸餾液，分離得到揮發(fā)油；餾液濃縮至950 mL,加入揮發(fā)油和適量賦形劑，加水制成1 000 mL,即得。

2.2 白芷美白液抑制酪氨酸酶的實驗 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法[1]稍加修改進行實驗。白芷美白液給藥組反應(yīng)混合物2 mL：0.1 M pH 6.8 PBS0.9 mL加不同濃度的白芷美白液1 mL加0.03%酪氨酸0.1 mL。37 ℃的恒溫箱孵育10 min,加0.1 mL的酪氨酸酶(350 u/mL)水溶液，將溶液混合均勻，置于37 ℃的恒溫箱中反應(yīng)25 min后,用分光光度計于475 mm測定吸光度值(A)；空白組處理以等體積的PBS代替酪氨酸酶溶液，用分光光度計于475 mm測定吸光度值(B)；對照組以等體積的蒸餾水代替白芷美白液,用分光光度計于475 mm測定吸光度值(C)；總空白組以等體積的蒸餾水代替白芷美白液，并以等體積的PBS代替酪氨酸酶溶液,用分光光度計于475 mm測定吸光度值(D)。0.1 M pH 6.8 PBS按照2005版《中國藥典》配制。白芷美白液分為50%、80%、100%、200% 4個濃度。同時，以熊果苷(10 mg/mL)作為陽性對照組。每個濃度白芷美白液實驗均重復(fù)10次。

3 實驗結(jié)果

不同濃度的白芷美白液對酪氨酸酶活性抑制作用，見表1。

表1 不同濃度的白芷美白液對酪氨酸酶活性抑制作用(±s)

4 討論

皮膚黑素形成是一個十分復(fù)雜的過程，在皮膚黑素的形成過程中由于受到紫外線、遺傳、內(nèi)分泌、炎癥介質(zhì)、飲食不當(dāng)?shù)纫蛩氐挠绊?，色素代謝異常，皮膚黑素過快增長和分布不均，就會造成局部皮膚過黑及色素沉著，表現(xiàn)為黃褐斑、雀斑和炎癥后色素沉著等。酪氨酸酶為含Cu離子的氧化酶，其普遍存在于哺乳動物、植物和微生物中，主要參與生物體內(nèi)黑色素和其他多酚類物質(zhì)的形成過程，是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶，酪氨酸酶抑制劑就是通過抑制酪氨酸酶活性從而抑制黑色素生成,因而可用來預(yù)防和治療色素沉著等[2]。

白芷，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂其“長肌膚，潤澤，可作面脂”；《本草經(jīng)百種錄》提到“白芷極香，能驅(qū)風(fēng)燥濕，其質(zhì)又極滑，能和利血脈，而不枯耗，用之則有利而無害”。其含有易揮發(fā)成分，這些易揮發(fā)成分具有活血化瘀的作用，能使攣縮的微動脈和毛細血管得以恢復(fù)，血流速度加快，血流量顯著增多，有效地改善微循環(huán)，可以維持皮膚的生態(tài)平衡，能有效地延緩皮膚色素沉著。近年來有報道[3-6]提出白芷提取物對黑色素有顯著的抑制作用。

本研究通過體外實驗觀察了白芷美白液對酪氨酸酶活性的抑制作用，結(jié)果表明不同濃度的白芷美白液對酪氨酸酶活性均有抑制作用,從50%～100%濃度的白芷美白液有顯著的量效關(guān)系，而100%濃度以上量效關(guān)系消失。證實白芷美白液具有確切的美白祛斑功效。本研究僅通過觀察白芷美白液對酪氨酸酶活性的抑制實驗闡述其對皮膚色素沉著的改善作用，至于其是否有其他改善皮膚狀態(tài)的途徑，還有待于進一步研究。

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