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    支氣管哮喘患兒誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平變化及意義

    2012-04-13 15:16:12段國威吳曉玲
    山東醫(yī)藥 2012年40期
    關(guān)鍵詞:誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性塵螨

    王 煒,李 芳,段國威,吳曉玲,宋 青

    (1河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院,石家莊050000;2河北井陘縣醫(yī)院;3河北深澤縣醫(yī)院)

    哮喘是由多種細胞和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病。近年來隨著對哮喘發(fā)病機制的深入研究,發(fā)現(xiàn)免疫耐受的破壞也是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié)[1]。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞是一群能夠有效地調(diào)節(jié)或抑制其他免疫活性細胞功能,在誘導(dǎo)免疫耐受中發(fā)揮著重要作用的細胞[2]。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在多種免疫性疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[3]。而目前有關(guān)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性 T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無報道。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 根據(jù)2008年中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)會呼吸學(xué)組制定的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》中兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準,2009年7月~2010年12月,選擇80例對戶塵螨過敏(戶塵螨過敏原皮膚點刺試驗陽性,風(fēng)團反應(yīng)范圍≥++)的中度支氣管哮喘患兒,按臨床表現(xiàn)分為急性期組和緩解期組,每組40例,兩組患兒在性別、年齡、病程、伴隨疾病、皮膚點刺試驗結(jié)果的陽性過敏原分布情況等方面均無差異。兩組患兒采血前4周內(nèi)未全身使用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑,均未用過抗過敏藥物;均間斷應(yīng)用小至中等劑量的吸入型糖皮質(zhì)激素(布地奈德吸入劑),必要時應(yīng)用β2受體激動劑(硫酸沙丁胺醇吸入劑),不合并使用長效抗組胺及抗白三烯類藥物。同時選擇30例健康查體患兒作為對照組,此組患兒戶塵螨過敏原皮膚點刺實驗陰性。急性期組男22例、女18例,年齡(8.26± 2.72)歲;緩解期組男23例、女17例,年齡(8.83± 2.64)歲;對照組男16例、女14例,年齡(8.52± 2.47)歲。3組在性別、年齡方面無統(tǒng)計學(xué)差異。

    1.2 實驗方法 全部患兒及對照組均于清晨留取外周肝素鈉抗凝靜脈血3 mL,應(yīng)用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC),用含10%小牛血清的完全RPMI 1640培養(yǎng)基調(diào)整淋巴細胞濃度為2 ×106/mL,接種于24孔細胞培養(yǎng)板內(nèi),每孔1 mL,并給予戶塵螨浸出液20 μg/mL刺激后將PBMC于37℃ 5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后按試劑盒說明書處理標(biāo)本,經(jīng)FACSCantoⅡ流式細胞分析儀進行檢測并分析。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)均采用±s表示。各組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗和Nemenyi檢驗。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平和哮喘疾病嚴重程度相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.2 相關(guān)性分析 支氣管哮喘患兒誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平與病情呈負相關(guān)(r=-0.652,P<0.01)。

    3 討論

    調(diào)節(jié)性T淋巴細胞是指既可天然產(chǎn)生又可以經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的具有免疫抑制功能的細胞亞群。它主要包括自然調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(nTreg,F(xiàn)oxp3+IL-10-)、適應(yīng)性調(diào)節(jié) T淋巴細胞(iTreg、Tr1、Th3、T等)以及具有調(diào)節(jié)活性的固有類T細胞(自然殺傷性 T細胞、dgT淋巴細胞)等[4,5]。其中與免疫性疾病關(guān)系密切的主要有nT-reg、誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)、Tr1細胞Foxp3-IL-10+)和Th3細胞()等。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞主要通過分泌IL-10、TGF-β1等具有免疫抑制作用的細胞因子以及細胞—細胞直接接觸的抑制作用等多種機制發(fā)揮免疫抑制作用[6,7]。其中IL-10是主要的抑制性細胞因子,它可通過直接和間接機制明顯降低抗原特異性T細胞增殖[8]。IL-10可有效抑制IL-12的產(chǎn)生,而IL-12是Th1細胞分化的關(guān)鍵因子。IL-10還可阻止T細胞受體介導(dǎo)的細胞活化。以IL-10處理T細胞導(dǎo)致持久的抗原特異性T細胞無反應(yīng),以抗CD3和CD28抗體重新刺激細胞不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細胞無能,加入外源性的IL-2也不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細胞無能。除了主動抑制T細胞增殖,在特定條件下,IL-10可誘導(dǎo)Tr1的分化,人和小鼠細胞在IL-10存在時經(jīng)慢性活化可產(chǎn)生Tr1,增強Tr1的抑制作用。可見IL-10是調(diào)節(jié)性T淋巴細胞發(fā)揮免疫抑制功能的主要細胞因子。而目前有關(guān)可分泌IL-10的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無報道。

    根據(jù)本研究結(jié)果,我們認為誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞數(shù)目減少,導(dǎo)致抑制免疫功能減弱或呈低反應(yīng)性可能是引起支氣管哮喘發(fā)病的機制之一,同時也說明哮喘患兒癥狀的緩解可能與體內(nèi)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平的恢復(fù)有關(guān)。誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用,其水平可用來評估哮喘病情。

    [1]陽艷麗,潘玉琴,何幫順,等.哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T細胞和Th1/Th2的變化及其與哮喘病情的關(guān)系[J].中國當(dāng)代兒科雜志,2011,13(6):482-486.

    [2]Lan Q,F(xiàn)an H,Quesniaux V,et al.Induced Foxp3(+)regulatory T cells:a potential new weapon to treat autoimmune and inflammatory diseases[J].J Mol Cell Biol,2012,4(1):22-28.

    [3]Long SA,Buckner JH.regulatory cells in human autoimmunity:more than a numbers game[J].J Immunol,2011,187(5):2061-2066.

    [4]Sakaguchi S.Regulatory T cells in the past and for the future[J].Eur J Immunol,2008,38(4):901-937.

    [5]King C,Tangye SG,Mackay CR.T follicular helper(TFH)cells in normal and dysregulated immune responses[J].Annu Rev Immunol,2008,(26):741-766.

    [6]Wang LH,Lin YH,Yang J,et al.Insufficient increment ofregulatory T cells after stimulation in vitro with allergen in allergic asthma[J].Int Arch Allergy Immunol,2009,148(3):199-210.

    [7]Ozyilmaz E,Canbakan S,Capan N,et al.Correlation of plasma transforming growth factor beta 1 with asthma control test[J].Allergy Asthma Proc,2009,30(1):35-40.

    [8]Sakaguchi S.Regulatory T cells:history and perspective[J].Methods Mol Biol,2011,(707):3-17.

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