畜產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留的檢測(cè)技術(shù)

劉 博，曹小妹，宋合興，尹 航，高文惠

（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，石家莊 050018）

由于在飼養(yǎng)過程中獸藥及飼料添加劑的大量使用而造成畜產(chǎn)品中藥物殘留，尤其是抗生素的殘留，對(duì)人體的影響很大。研究發(fā)現(xiàn)，殘留的抗生素對(duì)敏感的人能產(chǎn)生過敏反應(yīng)；有些導(dǎo)致人的再生障礙性貧血；甚至導(dǎo)致人體產(chǎn)生耐藥性，引起食源性感染和二重感染，造成中毒反應(yīng)、致畸和致殘等一系列危害。

畜產(chǎn)品中常見的抗生素有四環(huán)素類、青霉素類等。四環(huán)素類抗生素（TCs）是由鏈霉菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，主要有四環(huán)素（TC）、金霉素（CTC）、土霉素（OTC）、多西環(huán)素（DOTC）和美他環(huán)素（METC）等。四環(huán)族抗生素屬快效抑菌劑，其作用機(jī)制主要為抑制細(xì)菌肽鏈的增長(zhǎng)和蛋白質(zhì)的合成，并能引起細(xì)菌細(xì)胞膜通透性改變，從而抑制DNA復(fù)制。四環(huán)族抗生素的抗菌譜很廣，除對(duì)金黃色葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌等革蘭陽性菌及腸球菌、淋球菌等革蘭氏陰性菌敏感外，對(duì)立克次體、支原體、衣原體屬等非典型致病菌也有較好的抑菌作用[1]。

四環(huán)素類抗生素常用的是土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素等，因其價(jià)格便宜、抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、除被作為飼料添加劑以維持畜禽的健康并加速其生長(zhǎng)外，還被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物各種傳染性疾病的預(yù)防和治療。美國FDA規(guī)定四環(huán)素在豬肉中的殘留量應(yīng)＜80 μg·kg-1；國際衛(wèi)生組織和歐盟規(guī)定四環(huán)素在豬肉中的最大殘留量應(yīng)≤100 μg·kg-1；我國在無公害畜禽肉安全要求中規(guī)定的最高限量為100 μg·kg-1[2]。畜產(chǎn)品的四環(huán)素類抗生素殘留，已經(jīng)對(duì)人類健康構(gòu)成潛在危害。因此，人們也在不斷地對(duì)四環(huán)素類抗生素的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行研究和探索。本文總結(jié)了畜產(chǎn)品中殘留的四環(huán)素類抗生素常規(guī)檢測(cè)方法及新探索的方法。

1 微生物方法

微生物檢測(cè)法是應(yīng)用最早的方法，其測(cè)定原理是根據(jù)抗生素對(duì)微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作用來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留，如紙片法（PD）、抑制法（TTC）。PD法是當(dāng)樣品中存在抑菌物質(zhì)時(shí)，在紙片周圍形成一個(gè)清晰的抑菌圈，在檢測(cè)過程中培養(yǎng)基內(nèi)加入溴甲酚紫指示劑，則形成淺藍(lán)色的抑菌圈。TTC法即國標(biāo)嗜熱鏈球菌抑制法，其原理是1，2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）會(huì)與活菌體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的代謝產(chǎn)物。將液體乳高溫殺菌后添加嗜熱鏈球菌菌液，37℃培養(yǎng)一段時(shí)間后加入TTC進(jìn)行顯色。若該液體乳樣品中不含抗生素或含量低于檢測(cè)限，嗜熱鏈球菌會(huì)繼續(xù)增殖將還原并產(chǎn)生紅色物質(zhì)（陰性結(jié)果）；相反，若樣品中含有高于檢測(cè)限的抗生素，則菌體生長(zhǎng)受到抑制，指示劑TTC不能被還原，檢測(cè)試管將保持其液體乳原有的白色（陽性結(jié)果）。TTC法是較早用于液體乳中抗生素殘留定性檢測(cè)的方法，也是我國實(shí)驗(yàn)室里普遍使用的方法。其成本低廉、操作簡(jiǎn)單，但由于需要增菌步驟，需要長(zhǎng)時(shí)間才能完成檢測(cè)。對(duì)于四環(huán)素族的抗生素，該方法的檢出限為100 μg·mL-1。黃曉蓉等介紹了一種同時(shí)使用藤黃微球菌、枯草芽胞桿菌、蠟樣芽胞桿菌蕈狀變種為敏感菌，一次操作可同時(shí)檢測(cè)在肉類、水產(chǎn)品及蛋中的4大類抗生素殘留的微生物抑制方法，該方法四環(huán)素類的測(cè)定低限為0.1 mg·kg-1[2]。

2 薄層色譜法

薄層色譜法（TLC法）經(jīng)常作為樣品篩選方法，其優(yōu)點(diǎn)是速度快，可以同時(shí)在多快板上點(diǎn)樣，處理大批量樣品的時(shí)間短，溶劑用量少，不需要復(fù)雜的儀器，有利于現(xiàn)場(chǎng)用，但仍需要復(fù)雜的樣品前處理，且靈感度不高，不易定量，重現(xiàn)性不好。該方法一般使用硅膠板，用混合溶劑作展開劑，晾干后用一定的顯色劑噴霧顯色（顯色可采用生物自顯影法和化學(xué)法），用紫外檢測(cè)器（UVD）或串聯(lián)熒光檢測(cè)器（FLD）檢測(cè)。薄層色譜法檢測(cè)已用于肌肉組織和蜂蜜中的四環(huán)素檢測(cè)[3]。

3 分光光度法

分光光度法的原理是利用四環(huán)素本身在紫外區(qū)有很強(qiáng)的吸收，在一定的pH條件下，通過測(cè)定其吸光度而定量測(cè)定其含量；利用四環(huán)素與一些過渡性金屬離子發(fā)生反應(yīng)，生成有顏色的絡(luò)合物，四環(huán)素與受電子體物質(zhì)苯醌類物質(zhì)發(fā)生荷移反應(yīng)，生成荷移絡(luò)合物，根據(jù)四環(huán)素的吸收光譜發(fā)生變化從而定量測(cè)定[4]。倪永年等運(yùn)用動(dòng)力學(xué)分光光度法測(cè)得四環(huán)素的線性范圍為0.5～7.5 mg·L-1，檢測(cè)限為0.23 mg·L-1[5]。

3.1 紫外光譜法

紫外光譜法具有快速、簡(jiǎn)便、易于操作、設(shè)備簡(jiǎn)單、造價(jià)低等特點(diǎn)，非常適合抗生素的快速檢測(cè)。田益玲等將鮮乳用乙腈沉淀法去除乳蛋白后，在278 nm下測(cè)得其吸光度，然后根據(jù)工作曲線計(jì)算得到四環(huán)素的線性范圍為0.03～115.0 mg·L-1，檢出限為0.003 mg·L-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.05%，該法與國標(biāo)TTC法相比檢出限低兩個(gè)數(shù)量級(jí)。

3.2 熒光-紫外結(jié)合的分光光度法

熒光-紫外結(jié)合的分光光度法方法簡(jiǎn)便、分析精度高，但靈敏度不高。熒光法靈敏度高，但四環(huán)素類抗生素屬于弱熒光物質(zhì)，不能在熒光計(jì)上直接檢測(cè)。高紅等提出一種新的兩者結(jié)合的測(cè)定四環(huán)素類抗生素的方法，運(yùn)用該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了在熒光計(jì)上直接檢測(cè)四環(huán)素類抗生素，測(cè)得四環(huán)素類抗生素的線性范圍均為0.10～9.00 μg·mL-1，四環(huán)素、土霉素、金霉素和多西環(huán)素的檢測(cè)限分別為0.065、0.067、0.068和0.070 μg·mL-1[6]。另外，測(cè)定四環(huán)素的還有溴化十六烷基三甲基銨熒光法，其檢測(cè)下限為 0.001 μg·mL-1，線性范圍 0.01～12.0 μg·mL-1[7]。熒光法在測(cè)定牛奶中四環(huán)素也有應(yīng)用[8]。

4 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法

化學(xué)發(fā)光法的原理是四環(huán)素在堿性或酸性條件下可以降解，其降解產(chǎn)物可以和一些氧化劑如鐵氰化鉀、過氧化氫等發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，另外一些金屬離子如Cu2+等可以催化該化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法具有靈敏度高、線性范圍寬（一般可檢測(cè)到μg·kg-1甚至ng·kg-1級(jí)，線性范圍可達(dá)10-4數(shù)量級(jí)），重現(xiàn)性好，樣品處理及儀器操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛用于藥物的直接測(cè)定，也可實(shí)現(xiàn)四環(huán)素殘留量的快速測(cè)定。但是由于化學(xué)發(fā)光分析選擇性差、干擾因素多而限制了其使用，只要對(duì)這方面深入的研究以及不斷排除干擾因素，將有望成為測(cè)定四環(huán)素殘留量的較好方法。

賈寶秀等根據(jù)在酸性介質(zhì)中，高錳酸鉀能氧化四環(huán)素產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，甲醛能顯著增強(qiáng)該體系的發(fā)光強(qiáng)度而建立了一種簡(jiǎn)單快速檢測(cè)四環(huán)素的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光新方法，在最佳試驗(yàn)條件下，測(cè)定四環(huán)素的線性范圍為0～60.0 μg·mL-1，檢出限為 0.28 μg·mL-1，對(duì) 20.0 μg·mL-1四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行11次平行測(cè)定，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%[9]。

5 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）法是用高壓流動(dòng)相的驅(qū)動(dòng)使樣品通過高性能層析柱，從而使樣品中的抗生素得到高效率分離。因其具有高性能的檢測(cè)設(shè)備和先進(jìn)的操作控制系統(tǒng)，而確保了該方法有很高的靈敏度、自動(dòng)化程度高、結(jié)果重復(fù)性好，進(jìn)而使得HPLC成為目前檢測(cè)抗生素殘留廣泛應(yīng)用的一種方法。高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于畜禽肉、牛奶、動(dòng)物組織等的四環(huán)素檢測(cè)。

5.1 高效液相色譜測(cè)定的樣品前處理方法

高效液相色譜常用的樣品前處理方法有固相萃取、凝膠滲透色譜凈化、基體分散固相萃取[10]。農(nóng)以寧等用比表面積較大，具有較強(qiáng)吸附能力的多壁碳納米管的固相萃取-高效液相色譜（SPE-HPLC）方法同時(shí)測(cè)定了豬肉中四環(huán)素族，采用Oasis HLB固相萃取柱凈化萃取，Diamonsil TM C18色譜柱分離，磷酸鹽緩沖液（pH至2.5）-乙腈梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm，結(jié)果表明，土霉素、四環(huán)索、金霉素測(cè)定的線性范圍均為2～12 μg·mL-1，基底加標(biāo)回收率為93.6%～96.1%[11]。多壁碳納米管在固相萃取領(lǐng)域會(huì)有很好的發(fā)展前景。凝膠滲透色譜（GPC）方法是一種主要基于分子大小的原理進(jìn)行分離樣品的凈化技術(shù)，其具有重現(xiàn)性好回收率高，適用于多殘留分析等特點(diǎn)。謝維平等利用凝膠滲透色譜凈化-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定了動(dòng)物源性食品中四環(huán)素、土霉素、金霉素藥物的殘留，檢測(cè)限為11～33 μg·kg-1，平均加標(biāo)回收率為51.9%～95.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.4%～6.7%[12]。

5.2 高效液相色譜的檢測(cè)器

高效液相色譜常見的檢測(cè)器有熒光檢測(cè)器、二極管陣列檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器[13-16]。徐威等利用高效液相熒光檢測(cè)方法檢測(cè)動(dòng)物性食品中土霉素和四環(huán)素殘留。方法樣品經(jīng)含乙二胺四乙酸二鈉的丁二酸鈉緩沖液除蛋白后，由SPE-醋小柱提純凈化，ODS-醋柱分離，8%氧氯化鋯溶液柱后衍生化，在激發(fā)波長(zhǎng)406 nm和發(fā)射波長(zhǎng)515 nm處檢測(cè)土霉素和四環(huán)素與鋯離子的螯合物含量，本方法穩(wěn)定、快速、靈敏地檢測(cè)到的結(jié)果為土霉素和四環(huán)素的回收率分別為89.59%和92.59%，最低檢出濃度（信噪比5∶1）分別為3和5 μg·L-1，線性范圍為10 μg·L-1～10 mg·L-1，相關(guān)系數(shù)分別為 0.999 和1.0000[13]。傅承光使用常規(guī)的反相色譜條件，結(jié)合柱后調(diào)節(jié)pH及膠束增敏，建立熒光檢測(cè)方法，進(jìn)一步提高了靈敏度。4種四環(huán)素類藥物同時(shí)測(cè)定，檢出限達(dá)到8.0～75.6 pg水平，適于測(cè)定樣品中痕量四環(huán)素類藥物[14]。張春艷等應(yīng)用反相高效液相色譜-二極管檢測(cè)器（DAD），測(cè)定了乳及奶粉中四環(huán)素的含量，四環(huán)素濃度在1～100 ng呈良好線性關(guān)系，r＞0.9996，平均加標(biāo)回收率79.6%～102.0%，CVN2.28%～4.57%[15]。蔡穎等利用反相高效液相色譜-紫外檢測(cè)測(cè)定了乳制品中土霉素、四環(huán)素和金霉素殘留量，檢測(cè)限分別為土霉素15.0 μg·kg-1，四環(huán)素20.0 μg·kg-1、金霉素18.0 μg·kg-1，回收率為86.0%～102.3%[16]。

5.3 高效液相結(jié)合化學(xué)發(fā)光法

化學(xué)發(fā)光分析法（HPLC-CL）具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，加上高效液相色譜具有高效分離的特性，使得HPLC-CL法成為一種有效的痕量及超痕量分析技術(shù)。張琰圖等提出了一種高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)4種四環(huán)素類抗生素藥物的新方法，同時(shí)分離檢測(cè)4種抗生素的總時(shí)間為11 min[17]。此方法是基于四環(huán)素類抗生素藥物中的四環(huán)素、土霉素、金霉素和多西環(huán)素能夠強(qiáng)烈增敏通過恒電流電解方法在線電生BrO-和魯米諾之間產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光，4種抗生素的檢出限為0.002～0.008 μg·mL-1。

5.4 高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法

色譜的優(yōu)勢(shì)在于分離，為混合物的分離提供了最有效的選擇，但其難以得到物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，主要依靠與標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)比來判斷未知物。質(zhì)譜能夠提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，用樣量也非常少，但其分析的樣品需要進(jìn)行純化，具有一定的純度之后才可直接進(jìn)行分析。高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS-MS）已經(jīng)廣泛應(yīng)用在豬肉、牛奶等的檢測(cè)[18-21]。

5.5 高效液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用法

楊紅梅等利用高效液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定乳制品中6種四環(huán)素類抗生素的殘留，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正離子模式，可1次對(duì)6種四環(huán)素類抗生素進(jìn)行定性和定量分析，該方法的檢出限0.5～4.0 μg·L-1，測(cè)定低限牛奶為0.6～4.5 μg·L-1，乳粉為6.0～45.0 μg·kg-1，線性范圍4.0～100.0 μg·L-1，加標(biāo)回收率56.1%～104.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%～15.0%，該法具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)[21]?？道虻扔酶咝б合嗌V-電噴霧離子源串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)了豬肝樣品中四環(huán)素類及克倫特羅藥物的最低檢出限為0.02～0.56 μg·kg-1，樣品平均加標(biāo)回收率為84.4%～101.7%[22]。孫雷等用高效液相色譜-電噴霧離子源串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測(cè)了豬肉組織中四環(huán)素類藥物的殘留，四環(huán)素、土霉素和金霉素在10～400 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性，相關(guān)指數(shù)r＞0.999，方法檢測(cè)限為5 ng·g-1，定量限為10，50、100和200 ng·g-13個(gè)添加濃度的平均回收率為72.3%～94.6%，批內(nèi)批間RSD均＜20%[23]。

5.6 高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法

閆龍寶等采用高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定了嬰幼兒配方奶粉中5種四環(huán)素類抗生素殘留量，采用電噴霧正離子MRM模式檢測(cè)，該方法的檢出限為0.5～1.0 ng·mL-1，方法定量下限為5.0 ～10 μg·kg-1，線性范圍0.5～20.0 ng·mL-1，加標(biāo)回收率84.2%～92.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.20%～4.07%[24]。李月歡等采用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀快速測(cè)定畜、禽肉樣品中土霉素、四環(huán)素、金霉素的最低檢出限（LOD）分別為0.1、0.1、0.5 μg·kg-1，在5.0～80.0 ng·mL-1的線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r＞0.99，回收率在82.6%～111%，而且電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜的MRM掃描方式抗干擾強(qiáng)，使方法的靈敏度更高，選擇性更好，超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法適于畜、禽類食品中痕量土霉素、四環(huán)素、金霉素的痕量分析[25]。

6 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳法原理是在毛細(xì)管柱中充入緩沖溶液，插入處于同一水平的兩個(gè)緩沖液槽中，樣品從毛細(xì)管的一端（稱進(jìn)樣端）導(dǎo)入，當(dāng)毛細(xì)管的兩端加上一定的電壓時(shí)，帶電溶質(zhì)便朝與其電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。由于組分間的濃度不同，遷移速度不同，所以經(jīng)過一定時(shí)間后，各組分別將按其速度或濃度大小排序，依次到達(dá)檢測(cè)器而被檢出，得到按時(shí)間分布的電流譜圖。此法具有操作簡(jiǎn)單、色譜柱不受樣品污染、分析速度快、分離效率高、樣品用量少、運(yùn)行成本低等優(yōu)點(diǎn)[26]。固相萃取-高效毛細(xì)管電泳技術(shù)可以檢測(cè)牛奶中四環(huán)素類抗生素，梁佳等采用固相萃取-高效毛細(xì)管電泳法（SPE-HPCE）同時(shí)檢測(cè)了牛奶中四環(huán)素、氯霉素、土霉素和金霉素的含量，在15 min內(nèi)完全分離4種抗生素，檢測(cè)限（μg·mL-1）分別為0.5、1.5、1.0、0.5，該方法簡(jiǎn)單、可靠，靈敏度高[26]。Israel用建立在二氧化硅吸附劑的基礎(chǔ)上的磁固相萃取-毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測(cè)牛奶中的四環(huán)素類抗生素[27]。邢曉平運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)法（HPCE-ED）對(duì)雞蛋中殘留的四環(huán)素、土霉素進(jìn)行了快速測(cè)定分析[28]。韋壽蓮等首次采用柱端射壁電導(dǎo)檢測(cè)方法，結(jié)合濾波技術(shù)以pH 4.0 Tris2Cit為分離介質(zhì)，用毛細(xì)管電泳-電導(dǎo)檢測(cè)對(duì)土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素和四環(huán)素進(jìn)行了分離[29]。還有膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜技術(shù)分離4種四環(huán)素類抗生素[30]。

7 免疫分析法

免疫分析法的基本原理是以抗原或半抗原和抗體特異性結(jié)合為抗原-抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的生化測(cè)試技術(shù)。免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。免疫分析技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單快捷、速度快、靈敏度高、分析成本低等優(yōu)點(diǎn)。此法在蜂蜜中已有應(yīng)用[31]。

7.1 放射免疫分析法

陸勤等用放射免疫方法檢測(cè)了牛奶中四環(huán)素類抗生素的殘留，該法檢測(cè)牛奶中四環(huán)素、土霉素、金霉素3種四環(huán)素類藥物的最低濃度可分別達(dá)到30、100、50 μg·L-1，RSD＜3.9%（n=6）[32]。

7.2 酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要是將抗原（或抗體）吸附于固相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶染色，最后底物顯色用肉眼或分光光度計(jì)判定結(jié)果的一種檢測(cè)方法。ELISA檢測(cè)技術(shù)因其靈敏度高，特異性強(qiáng)，檢測(cè)范圍在ng～pg水平，屬于超微量分析技術(shù)[33]。其干擾小，抗原抗體的免疫反應(yīng)特異性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)類似物、有色物質(zhì)、熒光物質(zhì)對(duì)檢測(cè)的干擾很??；操作簡(jiǎn)便快捷，由于特異性強(qiáng)，簡(jiǎn)化了樣品的預(yù)處理和提取純化過程，可同時(shí)檢測(cè)數(shù)十甚至上百個(gè)樣品；安全性高，污染少，因?yàn)殪`敏度高，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度可以很低，有機(jī)溶劑用量較少，減少對(duì)檢測(cè)人員和環(huán)境的潛在危害。但ELISA也存在一些缺陷，如對(duì)試劑的選擇性很高，不能同時(shí)分析多種成分；對(duì)結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)；分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難。隨著基礎(chǔ)研究的進(jìn)展、ELISA技術(shù)的不斷改進(jìn)以及用于畜產(chǎn)品藥物殘留量分析ELI?SA試劑盒的大量生產(chǎn)，ELISA方法的優(yōu)勢(shì)將更加突出，更加符合畜產(chǎn)品分析的準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、易操作的要求。國占寶基于定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類抗生素的殘留量，開發(fā)研制四環(huán)素類抗生素競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫（ELISA）檢測(cè)試劑盒線性檢測(cè)范圍為0.05～4.05 ng·mL-1，靈敏度為0.05 ng·mL-1[34]。

8 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析檢測(cè)方法是基于膠體金免疫技術(shù)，試劑條膠體金結(jié)合墊上包被微生物受體抗體膠體金復(fù)合物，檢測(cè)線T分別包被青霉素G抗原和金霉素抗原，控制線C包被微生物受體二抗。當(dāng)樣品中含有β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類藥物時(shí)，會(huì)與檢測(cè)線包被抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)復(fù)合物，金標(biāo)復(fù)合物與檢測(cè)線包被抗原結(jié)合形成紅色線，未與檢測(cè)線包被抗原結(jié)合的金標(biāo)復(fù)合物移動(dòng)到控制線與第二抗體結(jié)合形成紅色線。檢測(cè)線顯色的強(qiáng)度與樣品所含藥物濃度成反比，檢測(cè)線淺于控制線為陽性，檢測(cè)線深于或等于控制線為陰性，控制線不全或沒有顏色為無效檢測(cè)。膠體金免疫層析法的顯著優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、可以目測(cè)結(jié)果。最快可在10 min內(nèi)就完成一批8份樣品的檢測(cè)，大幅提升了檢測(cè)速度，并且無需昂貴的儀器，有助于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大批量樣品的初篩[35]。該方法在水產(chǎn)品中四環(huán)素檢測(cè)已有應(yīng)用。付云潔采用試紙條法檢測(cè)金霉素檢測(cè)限為0.7 μg·mL-1，在四環(huán)素質(zhì)量濃度＞1.0 μg·mL-1時(shí)，與金霉素存在交叉反應(yīng)性，其結(jié)果與高效液相色譜法測(cè)定的結(jié)果一致，本方法檢測(cè)時(shí)間僅需5 min，適用于食品中金霉素殘留的快速檢測(cè)[36]。

9 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)是一種以膜、玻璃、硅等固相介質(zhì)為載體，能快速并行處理多個(gè)生物樣品，并對(duì)其所包含的各種生物信息進(jìn)行解析的微型器件，具有快速、高效、并行處理及分析自動(dòng)化能力，其最大的優(yōu)點(diǎn)在于高通量、并行化、微型化。在生物芯片上，單位面積內(nèi)可以高密度地排列大量的生物探針，已經(jīng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的生物芯片可排列5～10萬個(gè)探針·cm2。借助生物芯片技術(shù)，一次試驗(yàn)就可同時(shí)檢測(cè)多種疾病或分析多種生物樣品。目前成為畜產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)的一個(gè)高效便捷的平臺(tái)，具有極高的推廣價(jià)值[37]。Adrian等也應(yīng)用生物芯片技術(shù)對(duì)牛奶中的幾種抗生素和四環(huán)素進(jìn)行了檢測(cè)[38]。

10 小結(jié)

目前高效液相色譜及其與其他檢測(cè)方法聯(lián)用，已經(jīng)廣泛于畜產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素的檢測(cè)。但在我國關(guān)于毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)、膠體金免疫層析法和生物芯片技術(shù)在畜產(chǎn)品中抗生素的檢測(cè)應(yīng)用報(bào)道比較少，隨著這些方法的不斷完善，將會(huì)得到廣泛應(yīng)用。

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