精漿鋅含量與精液質(zhì)量及體外受精結(jié)局的相關(guān)性

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530021)

精漿中的鋅由前列腺分泌，其作為精漿中的一種微量元素，對精子的發(fā)生、成熟和獲能具有一定的作用。目前，國內(nèi)外對精漿鋅與精液質(zhì)量關(guān)系的研究結(jié)果尚不一致。2011年7～11月，我們采用5-Br-PAPS顯色法對81例不育男性患者進(jìn)行精漿鋅含量檢測，并分析精漿鋅含量與精液常規(guī)參數(shù)、不成熟精子率及體外受精(IVF)結(jié)局的相關(guān)性?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取因輸卵管因素致不孕在我院接受IVF-ET診療的81對夫婦，男(31.73±3.52)歲，(29.31 ±3.31)歲;原發(fā)性不育30 例，繼發(fā)性不育51例。納入標(biāo)準(zhǔn):所有夫婦均為初次接受常規(guī)IVF助孕，女方年齡≤35歲，除單純輸卵管梗阻外，所有入選女性經(jīng)體檢、婦科超聲及內(nèi)分泌、血生化等檢查未發(fā)現(xiàn)其他可能影響生育的疾病。入選女性取卵子均不少于5枚，男性均能夠提供新鮮精液。術(shù)前精液常規(guī)檢查按照WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》(2011年，第五版)標(biāo)準(zhǔn)［1］，排除嚴(yán)重少弱精癥。

1.2 精液檢查 男性禁欲(5.49±1.37)d，留取0.5 ～1 mL 精液，3 000 g離心10 min，留取精漿置于－20℃冰箱儲存。參照文獻(xiàn)［2］處理方法行精液檢查。按照WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》標(biāo)準(zhǔn)［3］，測定以下參數(shù)判斷精液質(zhì)量:①精漿鋅含量:采用5-Br-PAPS顯色法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，在配有560 nm波長濾光片的酶標(biāo)比色儀上進(jìn)行檢測。通過比較吸光度值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取標(biāo)本中鋅的濃度。精漿鋅總量(μmol)=鋅濃度×精液總體積(mL)。②精液常規(guī)參數(shù):包括精液量、精子密度，精子活率、精子正常形態(tài)率(依照WHO實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，采用Diff-Quik快速染色法染色，在光學(xué)顯微鏡油鏡(×1 000)下，每片讀取200個精子，用Krüger's嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行判別，計(jì)數(shù)正常形態(tài)精子所占比率。③不成熟精子率:采用經(jīng)密度梯度離心法檢測精子核成熟度。高倍顯微鏡下觀察，至少計(jì)數(shù)200個精子。核蛋白不成熟的精子染紫藍(lán)色或紫色，核蛋白成熟的精子染紅色。計(jì)數(shù)頭部染紫藍(lán)色和紫色的精子(不成熟精子)。不成熟精子率=［(精子頭部染紫藍(lán)色精子+染紫色精子)/200］×100%。

1.3 IVF及結(jié)局判斷 女性黃體中期應(yīng)用促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)達(dá)菲林降調(diào)節(jié)，達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)后常規(guī)應(yīng)用促性腺激素啟動劑量，用Gn 4～5 d后根據(jù)陰道超聲監(jiān)測卵泡數(shù)目、大小，行血清激素測定，根據(jù)檢測結(jié)果調(diào)整Gn用量。超聲監(jiān)測到3個以上優(yōu)勢卵泡直徑≥18 mm時當(dāng)晚即肌注絨促性素10 000 U，34～36 h于陰道超聲引導(dǎo)下行穿刺取卵術(shù)。參照文獻(xiàn)［2］分析胚胎質(zhì)量，IVF受精率=受精胚胎數(shù)/獲卵數(shù)×100%，卵裂率=卵裂數(shù)/受精數(shù)×100%，優(yōu)胚率=優(yōu)胚數(shù)/卵裂數(shù)×100%。

1.4 相關(guān)性分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用Spearman相關(guān)性分析法分析精漿鋅含量與精液密度、活率、正常形態(tài)率、成熟精子率和IVF結(jié)局的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 精液指標(biāo) 精漿鋅含量(2.13±1.01)μmol。精液量(4.15 ±1.48)mL，精液密度(92.52 ±55.18)106/mL，精子活率(62.64 ±14.88)%，正常形態(tài)率(7.39 ±3.48)%;不成熟精子率 (35.16 ±10.87)%。

2.2 IVF 結(jié)局 IVF 受精數(shù)(9.68 ±4.40)枚，卵裂數(shù)(9.40 ±4.35)枚，優(yōu)胚數(shù)(5.83 ±3.73)枚。

2.3 相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析示精漿鋅含量與精液密度、精子活率、IVF受精數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.49、0.305、0.289，P 均 ＜0.05)，與不成熟精子率呈負(fù)相關(guān)(r= －0.278，P ＜0.05)，與精子正常形態(tài)率及IVF卵裂率、優(yōu)胚率無相關(guān)性(P均＞0.05)。

3 討論

近年來隨著男性不育患者逐年增多，精漿鋅含量與男性不育的關(guān)系逐漸成為研究的熱點(diǎn)之一。精液中的鋅主要來源于前列腺，在精子發(fā)生、成熟、獲能、頂體反應(yīng)和受精過程中起重要作用。

本文結(jié)果顯示，精漿鋅含量與精子密度、活率呈正相關(guān)，說明適量增加精漿鋅含量可以提高精子的密度和活率。其可能原因?yàn)?①精漿中的鋅通過干擾垂體分泌促性腺激素降低性腺功能從而使精子生成減少［3］。②鋅參與生殖系統(tǒng)多種酶的合成，這些酶可延緩精子細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，維持細(xì)胞膜的通透性，使精子具有良好的活力，故缺鋅可降低相關(guān)酶的活性，進(jìn)而影響精子發(fā)生過程［4］。但羅勝萍等［5］發(fā)現(xiàn)，精液中鋅含量過高對精子也有明顯的毒性作用，過量的鋅及其氧化物可抑制精子的酵解及氧化過程，致使精子活力下降和死精。因此，在男性進(jìn)行補(bǔ)鋅治療的同時應(yīng)監(jiān)測精漿鋅含量變化。本研究結(jié)果顯示，精漿鋅與精子正常形態(tài)率無相關(guān)性，說明精漿鋅含量并不影響精子的正常形態(tài)，這與馮播等［6］研究結(jié)果相同。

精子核蛋白的主要成分為魚精蛋白，魚精蛋白富含精氨酸和半胱氨酸，一般不含賴氨酸，人類精子發(fā)生和成熟過程中，經(jīng)歷核蛋白組型轉(zhuǎn)換過程，即富含精氨酸和半胱氨酸的魚精蛋白取代富含賴氨酸的組蛋白，苯胺藍(lán)可與富含賴氨酸的組蛋白結(jié)合而使不成熟的精子染成藍(lán)色，因此，用苯胺藍(lán)染色可檢測精子的核成熟度。本研究發(fā)現(xiàn)，精漿鋅含量與不成熟精子率呈負(fù)相關(guān)，說明精漿鋅能促進(jìn)精子核的成熟?？赡苁且?yàn)榫釉诟讲G中成熟時，魚精蛋白的巰基間形成二硫鍵，使精子核染色質(zhì)趨于穩(wěn)定，同時在前列腺液鋅離子的作用下，余下的游離巰基間形成共價鍵，促進(jìn)使精子核成熟［7］。

目前，國內(nèi)外對精漿鋅與IVF結(jié)局的關(guān)系報道相對較少。本文結(jié)果顯示，精漿鋅含量與IVF受精數(shù)呈正相關(guān)，說明適量增加精漿中的鋅含量會提高受精數(shù)，可能是因?yàn)橐欢舛鹊匿\使精液密度和活率相應(yīng)的增加，同時在排精過程中，精子吸收精漿中的鋅與細(xì)胞核染色質(zhì)的巰基結(jié)合，從而有利于受精。但本研究還發(fā)現(xiàn)，精漿鋅含量與卵裂率、優(yōu)胚率并無相關(guān)性，說明精漿鋅對受精后的胚胎質(zhì)量并無影響。

綜上所述，精漿鋅含量與男性不育密切相關(guān)，適量的精漿鋅能夠促進(jìn)精子核成熟，其含量降低將影響精子的發(fā)生、發(fā)育和成熟，引起精液密度和活率下降，從而使受精數(shù)降低。精漿鋅含量檢測對促進(jìn)男性不育的診斷及治療有一定指導(dǎo)作用。

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