醇提蛋黃油治療燙傷的藥效學(xué)探討

謝欣梅，龐曉斌

（河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物研究所，河南 開封 475004）

醇提蛋黃油治療燙傷的藥效學(xué)探討

謝欣梅，龐曉斌＊

（河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物研究所，河南 開封 475004）

目的觀察醇提蛋黃油促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的作用及其抗炎、抑菌效果。方法選用健康昆明種小鼠隨機(jī)分為燙傷對照組、濕潤燒傷膏對照組、干餾蛋黃油治療組和醇提蛋黃油治療組，建立小鼠背部Ⅱ度燙傷模型，觀察藥物對燙傷的愈合時(shí)間，考察藥物的治療效果；通過對二甲苯所致小鼠炎性耳腫實(shí)驗(yàn)和體外抑菌實(shí)驗(yàn)考察藥物的抗炎效果和抑菌作用。結(jié)果與燙傷對照組相比，醇提蛋黃油能明顯減少創(chuàng)面滲出、縮短結(jié)痂時(shí)間和愈合時(shí)間（P＜0.01），作用效果與干餾蛋黃油相近，并優(yōu)于濕潤燒傷膏（P＜0.05）；與對照組相比，醇提蛋黃油具有顯著抗炎作用（P＜0.01），其作用效果類似干餾蛋黃油（P＞0.05）并優(yōu)于濕潤燒傷膏（P＜0.05）；醇提蛋黃油的體外抑菌作用明顯優(yōu)于其他組，尤其對金黃色葡萄球菌抑制作用明顯。結(jié)論醇提蛋黃油具有明顯促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動物燙傷創(chuàng)面愈合的作用。

醇提蛋黃油；燙傷；動物模型；抗炎；體外抑菌

蛋黃油（又稱蛋黃脂質(zhì)）是雉科動物家雞的鮮卵經(jīng)分離提取而得到的卵黃提取物，主要含有卵磷脂、脂肪酸、膽甾醇、葉酸、胡蘿卜素、鈣、磷、鐵、鋅等多種藥用和營養(yǎng)成分［1－2］。蛋黃油具有清熱解毒消腫、滋陰養(yǎng)血潤燥、斂瘡生肌長肉之功效［3－6］。蛋黃油用于治療燒燙傷最早見于北周《集驗(yàn)方》治燙火燒瘡方。外用或內(nèi)服蛋黃油治療瘡、瘺、痢等疾的療法，《日華子本草》、《本草綱目》、《醫(yī)林纂要》、《本草品匯精要》等歷代專著中屢有記載［5，7－8］?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)對蛋黃油的臨床應(yīng)用、提取工藝、質(zhì)量控制等方面均有一定的研究，對蛋黃油的臨床應(yīng)用報(bào)道［9－12］很多，其臨床療效是顯著而確切的。但文獻(xiàn)所指蛋黃油絕大多數(shù)為干餾法制品，醇提蛋黃油的藥效學(xué)如何未見報(bào)道。我們實(shí)驗(yàn)分別以傳統(tǒng)干餾法、乙醇滲漉法提取蛋黃油，通過觀察藥物對燙傷的治療效果、藥物的抗炎效果和抑菌作用，比較醇提蛋黃油與傳統(tǒng)干餾蛋黃油在燒燙傷方面的療效區(qū)別，研究醇提蛋黃油對燒燙傷創(chuàng)面愈合的影響和治療作用。

1 資料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康昆明種小鼠，雌雄不限，體質(zhì)量18～22g，由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)在清潔級動物房。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

蛋黃油制品為實(shí)驗(yàn)室自行提取產(chǎn)物；美寶濕潤燒傷膏（汕頭市美寶制藥有限公司產(chǎn)品，批號：20060502）；其他試劑均為國產(chǎn)分析級。

1.3 實(shí)驗(yàn)菌種

金黃色葡萄球菌（標(biāo)準(zhǔn)型 ATCC25923）、銅綠假單胞菌 （標(biāo)準(zhǔn)型 ATCC27853）、大腸埃希氏菌（標(biāo)準(zhǔn)型ATCC25922），由河南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 儀器

多功能滲漉提取器（上海順義實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，EX－TE－03）；電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司，型號BS224S）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海益恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，DHP－9272型）。

2 方法

2.1 蛋黃油的制備

2.1.1 干餾法制品 將煮熟后的蛋黃于坩堝內(nèi)先小火后大火加熱，至蛋黃變?yōu)闉r青狀黏稠物，有青褐色油狀液體析出時(shí)，將油及時(shí)傾出。經(jīng)消毒滅菌后裝瓶備用，常溫下保存。該制品為深褐色油狀液體。

2.1.2 乙醇提取蛋黃油（滲漉法）［12－13］取雞蛋煮熟去殼，剝?nèi)〉包S，搗碎，用乙醇濕潤裝入滲漉提取器，加乙醇使其液面高出蛋黃粉2～3cm靜置36h，加適量乙醇進(jìn)行滲漉，回收乙醇即得蛋黃油。經(jīng)消毒滅菌后裝瓶備用，常溫下保存。此制品為橘黃色透明油狀物，味芳香。

2.2 動物燙傷模型的制備及處理

選取昆明種小鼠80只，隨機(jī)分為4組：燙傷對照組、濕潤燒傷膏對照組、干餾蛋黃油治療組、醇提蛋黃油治療組，每組20只。于實(shí)驗(yàn)前24h用硫化鈉脫毛劑脫毛后，生理鹽水洗凈，用直徑1.2cm、高4cm的塑料無底圓筒于脫毛處90℃水停留5s，造成Ⅱ度燙傷（病理切片證實(shí)）。燙傷后肉眼可見皮膚較白或棕黃。于燙傷0.5h后分別在燙傷部位涂抹藥物2mL（2g）／只，每天給藥2次，燙傷對照組不予給藥。以結(jié)痂全部脫落為愈合標(biāo)準(zhǔn)，觀察創(chuàng)面結(jié)痂時(shí)間、愈合時(shí)間及愈合動物數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。

2.3 二甲苯所致小鼠炎性耳腫的實(shí)驗(yàn)

選取健康雄性小鼠40只，隨機(jī)分為對照組、濕潤燒傷膏組、干餾蛋黃油組和醇提蛋黃油組，每組10只。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日給小鼠左右耳前后兩面涂以相應(yīng)藥物0.02mL／只，30min后再在右耳前后兩面涂以二甲苯致炎，左耳作對照，致炎40min后處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的打孔器打下雙耳同一部位圓片，稱重，以左、右耳片重量之差為腫脹程度，計(jì)算各組腫脹度，求出腫脹抑制率（%）。將對照組和給藥組的腫脹程度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。腫脹度（mg）＝右耳片重－左耳片重；腫脹抑制率（%）＝（對照組腫脹度－給藥組腫脹度）／對照組腫脹度×100%。

2.4 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

2.4.1 菌液準(zhǔn)備 取實(shí)驗(yàn)菌種接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，取第3代營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物（18～24h），將制成的菌懸液用細(xì)菌濃度比濁法使其菌濃度稀釋至1×106CFU／mL。

2.4.2 抑菌圈直徑測定（瓊脂擴(kuò)散法） 取直徑為12cm的平皿，傾入瓊脂培養(yǎng)基15mL，冷凝后用滅菌的棉球蘸取供試菌液，均勻涂布于培養(yǎng)基表面，待培養(yǎng)基表面干燥后用直徑為6mm的打孔器在瓊脂平皿上打孔，除去孔內(nèi)瓊脂。每種藥液設(shè)5孔，藥液分別為生理鹽水、濕潤燒傷膏、干餾蛋黃油、醇提蛋黃油，每孔加15μL藥物。于37℃培養(yǎng)24h后取出，測定抑菌圈直徑，并求出每種藥液5個(gè)孔抑菌圈直徑的平均值。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

3 結(jié)果與分析

3.1 藥物對小鼠實(shí)驗(yàn)性燙傷的影響

藥物實(shí)驗(yàn)表明，造模后多數(shù)動物出現(xiàn)不同程度全身顫抖現(xiàn)象，涂抹蛋黃油2min后全身顫抖現(xiàn)象漸減弱至停止，表明蛋黃油有明顯的止痛作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與燙傷對照組相比，醇提蛋黃油組結(jié)痂時(shí)間、愈合時(shí)間有顯著差異（P＜0.01），與干餾蛋黃油組無明顯差異（P＞0.05），其燙傷創(chuàng)面愈合速度優(yōu)于濕潤燒傷膏組（P＜0.05），表明醇提蛋黃油具有明顯促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的作用，見表1。

表1 藥物對小鼠實(shí)驗(yàn)性燙傷的影響（，n＝20）

表1 藥物對小鼠實(shí)驗(yàn)性燙傷的影響（，n＝20）

注：與燙傷對照組比較，＊P＜0.01；與濕潤燒傷膏對照組比較，＃P＜0.05。

組別 結(jié)痂時(shí)間／d 愈合時(shí)間／d燙傷對照組7.7±0.6 18.9±0.9濕潤燒傷膏對照組 5.7±1.4＊ 15.4±1.3＊干餾蛋黃油治療組 4.1±0.5＊＃ 14.0±1.5＊＃醇提蛋黃油治療組 3.9±0.6＊＃ 13.3±1.1＊＃

3.2 藥物對二甲苯所致小鼠炎性耳腫作用的影響

與對照組相比，醇提蛋黃油、干餾蛋黃油、濕潤燒傷膏對二甲苯所致小鼠炎性耳腫均有明顯抑制作用（P＜0.01），醇提蛋黃油抗炎效果優(yōu)于濕潤燒傷膏（P ＜0.05），與干餾蛋黃油無顯著性差異（P＞0.05），見表2。

表2 藥物對二甲苯引起小鼠耳腫的影響（，n＝10）

表2 藥物對二甲苯引起小鼠耳腫的影響（，n＝10）

注：與對照組比較，＊P＜0.01；與濕潤燒傷膏組比較，＃P＜0.05。

組別 劑量／（g／只） 腫脹度／mg 抑制率／%對照組 — 124.80±10.895—濕潤燒傷膏組 0.02 63.60±8.99＊ 49.04±6.58＊干餾蛋黃油組 0.02 42.80±7.01＊＃ 65.71±8.97＊＃醇提蛋黃油組 0.02 53.00±14.22＊＃ 57.53±4.54＊＃

3.3 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，醇提蛋黃油、干餾蛋黃油、濕潤燒傷膏對3種致病菌均有抑制作用，三者對金黃色葡萄球菌的抑制作用均強(qiáng)于銅綠假單胞菌和大腸桿菌；并且醇提蛋黃油對金黃色葡萄球菌顯示了較其他2種藥物更強(qiáng)的抑制作用，見表3。

表3 體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果（，n＝5）

表3 體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果（，n＝5）

注：△抑菌圈直徑≥8.0；△△抑菌圈直徑≥10.0。

組別抑菌圈直徑／mm金黃色葡萄球菌 銅綠假單胞菌 大腸桿菌生理鹽水組 － － －濕潤燒傷膏組 9.5±0.1△ 7.5±0.2 7.1±0.1干餾蛋黃油組 8.0±0.4△ 7.0±0.2 7.3±0.4醇提蛋黃油組 12.3±0.3△△ 9.2±0.1△7.2±0.3

4 討論

蛋黃油用于治療燒燙傷古已有之，即使在現(xiàn)代也是人們用于治療燒燙傷的良方，在臨床獲滿意療效［3－6］?，F(xiàn)代生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)測出蛋黃油含有蛋白質(zhì)、維生素A、核黃素、卵磷脂、油酸、亞油酸、脂肪、鋅、鐵等多種成分，這些成分在損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。如蛋白質(zhì)參與細(xì)胞的生長和生化過程，具有生物膜的功能；維生素A能促進(jìn)黏膜上皮組織的生長；鋅與人體免疫功能有關(guān)，可增加機(jī)體抗感染的能力，加速創(chuàng)傷組織的愈合；脂肪、油酸、亞油酸具有疏水性，可隔絕外來刺激，減輕局部疼痛。

蛋黃油提取方法有多種，目前臨床使用最多的仍然是干餾法，但此法出油率低，環(huán)境污染嚴(yán)重，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制，難以大規(guī)模生產(chǎn)，而其他方法制得的蛋黃油療效鮮有報(bào)道。由于蛋黃油的成分較多，不同的提取方法對成分的含量變化又有一定的影響，所以關(guān)于蛋黃油的藥理研究難度相對較大。

實(shí)驗(yàn)比較了醇提蛋黃油和傳統(tǒng)干餾蛋黃油的療效作用。結(jié)果顯示，醇提蛋黃油與干餾蛋黃油對燙傷小鼠皮膚均有明顯的治療作用（P＜0.01），療效優(yōu)于濕潤燒傷膏，且差異顯著（P＜0.05），說明蛋黃油可明顯促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合。在動物實(shí)驗(yàn)觀察中還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)蛋黃油治療的燙傷小鼠，創(chuàng)面可迅速形成完整的藥痂，此藥痂具有暫時(shí)代替皮膚的屏障作用，為防止創(chuàng)面的繼發(fā)感染創(chuàng)造了條件。

燒燙傷后微循環(huán)通透性增加可導(dǎo)致體液滲出和組織水腫，導(dǎo)致燒傷后皮膚的屏障功能被破壞，體內(nèi)的水分、蛋白質(zhì)、電解質(zhì)等可經(jīng)燒燙傷創(chuàng)面損失，微生物可經(jīng)燒燙傷創(chuàng)面侵入，引起局部或全身感染。微循環(huán)障礙的轉(zhuǎn)歸，決定著燒燙傷局部損傷程度。如果微循環(huán)淤滯加重，血栓形成增多，造成局部組織缺血缺氧，影響細(xì)胞代謝，加重組織損害，則創(chuàng)面加深；如果微循環(huán)得到改善，則可減輕局部損傷。故減輕燒燙傷后局部組織水腫，對促進(jìn)創(chuàng)面早期愈合有重要意義。我們實(shí)驗(yàn)中的由二甲苯所致小鼠炎性耳腫實(shí)驗(yàn)顯示，醇提蛋黃油具有減輕炎癥部位水腫的作用，對促進(jìn)創(chuàng)面愈合有重要意義。

調(diào)查研究結(jié)果顯示，燒燙傷患者感染的致病菌主要以金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌為主。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，在體外抑菌實(shí)驗(yàn)中，醇提蛋黃油對金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌有一定的抑菌效果，尤其對金黃色葡萄球菌抑菌效果較為明顯。醇提蛋黃油的抑菌作用表明其可有效預(yù)防燒燙傷創(chuàng)面的感染。通過以上燙傷藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，證明了醇提蛋黃油具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌和促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合等作用，表明醇提蛋黃油在治療燒燙傷方面與傳統(tǒng)干餾制品均有良好的治療作用和抗感染、抗炎消腫效果。

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［責(zé)任編輯 姬 荷］

Pharmacodynamic study on scald wound of egg yolk oil by ethanol extract

XIE Xin－mei，PANG Xiao－bin＊（Institute of Chinese Material Medical，Pharmaceutical College of Henan University Kaifeng，Henan 475004，China）

ObjectiveTo study the effect of egg yolk oil by ethanol extract on scald wound and its anti－inflammation and its anti－bacteria effect in vitro.MethodsHealthy Kunming mice of second degree scald were divided into the scalding control group，moisture burn ointment positive control group，dry distilled egg yolk oil treatment group and ethanol extracted egg yolk oil treatment group.The mice model with the grade II burn on the back were established，the healing time，the change of scald surface and the effects were observed.The experiment of inflammation caused by dimethyl－benzene on the ears of mice was carried out to observe the effect on anti－inflammation.The anti－bacteria effect of the sample was studied in vitro.ResultsCompared with that of negative control group，the egg yolk oil by ethanol extract could apparently decreased the wound extravasation and shorten healing time.It had the similar effect with that of dry distilled egg yolk oil，was better than that of moisture burn ointment.Compared with that of the control group，the egg yolk oil by ethanol extract had the significant anti－inflammatory effects（P ＜0.01）.It had the similar effect with that of dry distilled egg yolk oil（P ＞0.05），was better than that of moisture burn ointment（P ＜0.05）.and inhibitory effect on bacteria was better than that of other groups，especially on Staphylococcus aureus.ConclusionEthanol extract of egg yolk oil has obvious effect on promoting scald wound healing.

Egg yolk oil by ethanol extract；Scald；Animal Model；Anti－inflammation；Anti－bacteria in vitro

R644

A

1672－7606（2012）02－0098－04

2012－02－12

河南大學(xué)校內(nèi)項(xiàng)目（07YBZR040）。

謝欣梅（1973－），內(nèi)蒙古烏蘭浩特人，講師，從事藥物評價(jià)的教學(xué)及科研工作。

＊通訊作者：龐曉斌（1973－），男，河南洛陽人，博士，副教授，從事微生物藥物、藥物篩選的教學(xué)及科研工作。