降糖類中成藥中疑似非法添加格列本脲的快速篩查

徐 玫，袁 琦，羅甲宇，王璟奕，李 棟

（1.河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物分析教研室；河南 開封 475004；2.河南醫(yī)藥高級技工學(xué)校，河南 開封 475001；3.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封 475004）

降糖類中成藥中疑似非法添加格列本脲的快速篩查

徐 玫1，袁 琦1，羅甲宇2，王璟奕3，李 棟1

（1.河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物分析教研室；河南 開封 475004；2.河南醫(yī)藥高級技工學(xué)校，河南 開封 475001；3.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封 475004）

目的建立快速篩查降糖中成藥中非法添加西藥格列本脲的方法。方法首先采用紫外掃描圖譜初步判斷中成藥中是否非法添加格列本脲，然后利用磺酰脲類降糖藥試管反應(yīng)法、薄層色譜法進一步驗證。結(jié)果在該中成藥的紫外圖譜中發(fā)現(xiàn)格列本脲的特征吸收，試管反應(yīng)法中該中成藥反應(yīng)呈陽性，薄層色譜法中供試品和對照品的比移值相同。結(jié)論所建立的中成藥中非法添加西藥格列本脲快速篩查的方法簡單可行。

降糖類中成藥；格列本脲；紫外分光光度法；試管反應(yīng)法；薄層色譜法

糖尿病是目前世界上發(fā)病率較高的一種疾病，嚴(yán)重影響了人們的身體健康。國內(nèi)口服降糖藥市場的特點是以西藥為主，中成藥為輔［1］。少數(shù)不法分子利用患者對中草藥的信賴，在中藥降糖制品及部分保健食品中非法添加處方以外的化學(xué)藥品，騙取患者的信任，從而牟取暴利［2］。

格列本脲為第二代磺酰脲類降糖藥品，價格低廉，見效快速，成為許多中藥降糖制劑和保健食品中非法摻入的主要化學(xué)藥品之一，容易使患者在不知情中服用過量，危害患者的身心健康［3－4］。

目前多采用較昂貴的儀器HPLC和LC／MS進行中藥降糖制劑非法添加格列本脲的定性鑒別［5－6］。我們則是采用相對簡單的薄層色譜法（TLC）和紫外分光光度法（UV），并以市售格列本脲片為對照進行快速篩查，以此達(dá)到對降糖中成藥中是否非法添加西藥格列本脲進行確定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV1600紫外分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；三用紫外燈（型號：CN61M／MHMQZWI，北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）；AS3120超聲儀（奧特賽恩斯儀器有限公司）；BP211D電子天平（Sartorius公司生產(chǎn)）；7G328B分析天平（湘儀天平儀器廠）。

1.2 試劑

硫酸銅試液；0.01mol／L氫氧化鈉溶液；濃氨水；濃鹽酸；三氯甲烷（分析純，批號：20020617，天津市津沽工商實業(yè)公司）；環(huán)己烷（分析純，批號：20080624，天津市化學(xué)試劑一廠）；無水乙醇（分析純，批號：20090827，開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司）；冰醋酸（分析純，批號：20050309，開封化學(xué)試劑總廠）；硅膠（HG／T2354－92，青島海洋化工有限公司）。

1.3 對照品與供試品

格列本脲對照藥片（批號：090202，天津太平洋制藥有限公司）；供試品降糖膠囊由本市藥店購買。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外掃描

2.1.1 方法 取待測膠囊3粒，傾出其內(nèi)容物于燒杯中，研細(xì)，加三氯甲烷20mL，超聲10min，濾過，濾渣及濾器用三氯甲烷分次洗滌，合并洗液與濾液，于水浴75℃至干，用無水乙醇溶解并稀釋至50mL，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描。

2.1.2 結(jié)果 在格列本脲最大吸收波長處（300nm）有明顯吸收，懷疑該膠囊中非法添加了格列本脲，見圖1。

圖1 樣品膠囊光譜掃描曲線

2.2 試管反應(yīng)法［7］

2.2.1 方法 取待測樣品適量，相當(dāng)于1次口服量，作為供試品，研細(xì)，放入具塞錐形瓶中，加入20mL三氯甲烷，超聲10min，過濾，收集濾液作為供試液A；將供試液A水浴75℃ 蒸干，得殘渣，加入NaOH（0.01mol／L）溶液3mL，使殘渣充分溶解，然后使用微孔濾膜過濾，得供試液B，用試管收集供試液B；向供試液B中滴入5滴CuSO4，震蕩試液，使溶液充分反應(yīng)，得供試液C；向供試液C中滴入10滴濃氨水，震蕩試管使充分反應(yīng)，至溶液呈現(xiàn)深藍(lán)色，作為供試液D；收集供試液D并用微孔濾膜過濾，得供試液E，用試管收集供試液E；向供試液E中滴入約10滴濃鹽酸，使深藍(lán)色消失。

2.2.2 結(jié)果 經(jīng)以上6步反應(yīng)，試管中出現(xiàn)沉淀，結(jié)果呈陽性，可判斷供試品中添加了磺酰脲類化學(xué)成分，但具體成分需作進一步判斷。

2.3 薄層色譜法［8］

2.3.1 供試品溶液的制備 取待測膠囊3粒，傾出其內(nèi)容物于燒杯中，研細(xì)，加三氯甲烷20mL，超聲10min，濾過，濾渣及濾器用三氯甲烷分次洗滌，合并洗液與濾液，于水浴75℃濃縮至干，用三氯甲烷1mL溶解并定容為1mL，既得。

2.3.2 對照品溶液的制備 取格列本脲對照藥片20片于研缽中，研細(xì)，加三氯甲烷20mL，用三氯甲烷分次洗滌，合并洗液于濾液，于水浴75℃ 濃縮至干，用三氯甲烷1mL溶解并定容為1mL，既得。

2.3.3 方法 取上述供試品和對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿－環(huán)己烷－乙醇－冰醋酸（8∶12∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，結(jié)果見圖2。

圖2 樣品及對照品TLC圖

2.4 確證實驗

用小刀分別刮下圖2薄層板上的樣品及對照斑點，分別用少量乙醇溶解，過濾，在250～350nm波長區(qū)域掃描其吸收，樣品及對照品吸收一致。

3 討論

在紫外掃描圖譜中，由于供試品的濃度無法精密確定，一開始在格列本脲特征峰處的吸光度值和對照的吸光度數(shù)值有明顯差別，通過改變供試品的用量，吸光度差別逐漸縮小。本實驗雖為定性實驗，觀察紫外圖譜的峰形即可，但吸光度數(shù)值如差別太大也將不利于判斷，故通過實驗最終確定供試品的用量為3粒。

中成藥及保健食品的成分是由中藥中所含的天然化合物組成，成分復(fù)雜。如何能夠有效地提取出磺酰脲類化學(xué)降糖藥，同時又能盡量少地提取出中成藥或保健食品中復(fù)雜的天然成分，使提取過程同時成為粗分的過程，TLC法的靈敏度和專屬性非常重要。降糖類中成藥及保健食品中主要含有糖類、氨基酸類、皂苷類、黃酮類及揮發(fā)油等化學(xué)成分，這些成分大多極性較強，較難溶于弱極性有機溶劑，而磺酰脲類化學(xué)降糖藥易溶于三氯甲烷，故以三氯甲烷為提取溶劑。

中成藥成分復(fù)雜，薄層色譜分析僅通過分離、顯色，與對照品比較比移值（Rf）及斑點所顯的顏色來確證該中成藥中是否含有某一化學(xué)成分，很有可能出現(xiàn)假陽性，故通常只作為一種初篩的方法。本實驗中試管反應(yīng)法檢測結(jié)果呈陽性，即確定供試品中添加有磺酰脲類降糖藥，可排除TLC法中出現(xiàn)假陽性，不再做陰性對照實驗。試管反應(yīng)法操作步驟簡單、成本低廉、消耗低、反應(yīng)迅速，與TLC法中配制陰性對照品相比，省時省力，故可作為TLC法的補充。

由于只是快速篩查，利用正規(guī)廠家（天津太平洋制藥有限公司）生產(chǎn)的格列本脲片作為對照品，完全可行。

中藥降糖制劑和保健食品的種類較多，市場競爭激烈。少數(shù)不法分子為了增強產(chǎn)品的降血糖作用，不顧產(chǎn)品的安全性，故意在產(chǎn)品中添加化學(xué)降糖藥品。本實驗結(jié)果顯示，部分中藥降糖制劑和保健食品中被非法摻入了化學(xué)藥品格列本脲，提示有關(guān)部門今后應(yīng)進一步加強對中藥降糖制劑和保健食品的質(zhì)量監(jiān)管。

［1］侯勝田.藥品營銷調(diào)研－應(yīng)用與案例［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：348－351.

［2］宋家玉，周景樣，豐碩，等.薄層色譜法檢測降糖中藥制品中的格列本脲［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16（11）：1339－1340.

［3］許志泉.中藥摻用西藥之危害及對策［J］.山東中醫(yī)雜志，1994，13（3）：142.

［4］丁秀芬，趙文杰.糖尿病知識教育對糖尿病治療的影響［J］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2004，24（1）：12.

［5］夏順寧，王貞媛，李丹.HPLC－MS法鑒別唐樂舒膠囊中非法添加的格列本脲、格列齊特、格列美脲成分［J］.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2006，14（6）：263－265.

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［7］潘廣州，高國敬，傅偉.兩種快速檢測降糖類中成藥中添加磺酰脲類藥物方法的比較［J］.中國藥業(yè)，2010，19（4）：28－29.

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［責(zé)任編輯 時 紅］

Rapid screening for a hypoglycemic medicine suspected added in glyburide illegally

XU Mei 1，YUAN Qi 1，LUO Jia－yu2，WANG Jing－yi 3，LI Dong1（1.Pharmaceutical Analysis Teaching and Researching Section，Pharmaceutical College of Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China；2.Henan Medical Secondary School，Kaifeng，Henan 475001，China；3.College of Education Science，Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China）

ObjectiveTo establish the rapid screening method for hypoglycemic medicine illegally added in western medicine hypoglycemic drug glibenclamide.MethodsFirst UV spectrophotometry was used to isolate and identify the glibenclamide in the hypoglycemic Chinese patent drugs，then the tube reaction assay of sulfonylurea hypoglycemic drugs.TLC were used to further verification.ResultsThe feature mapping of glibenclamide was found in the UV mapping of the hypoglycemic Chinese patent drugs，the result of tube reaction assay was positive，the Rf of the reference substances and sample were the same.ConclusionThe fast screening method for proprietary Chinese medicine Western medicine hypoglycemic drugs added illegally glyburide is simple and feasible.

Hypoglycemic Chinese patentdrugs；Glibenclamide；UV spectrophotometry；Tube reaction assay；Thin layer chromatography

R917

A

1672－7606（2012）02－0095－03

2011－11－30

徐玫（1963－），女，河南 開封 人，副教授，從事藥物質(zhì)量控制的教學(xué)及研究工作。