壯骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王文化，張 杰，施務(wù)務(wù)

壯骨膠囊主要由當(dāng)歸、川芎、肉桂、地龍、丹參、冰片等15味中藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛、補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨。用于股骨頸骨折手術(shù)后股骨頭缺血性壞死，骨壞死中晚期等癥。為了控制制劑的質(zhì)量，對(duì)冰片、當(dāng)歸、川芎進(jìn)行薄層鑒別，建立了高效液相色譜法測(cè)定本品中肉桂酸的含量。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀:Agilent 1100;日本島津SPD-10A VP、LC-10AT VP;超聲清洗機(jī)(JCX-300 W，山東濟(jì)寧超聲電子儀器廠)。

1.2 試劑 當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材、冰片、肉桂酸對(duì)照品(均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為:120927-200310、120918-200507、110743-200303、110786-200403)，硅膠G(青島海洋化工廠)，甲醇為色譜純，水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 冰片的鑒別［1］取本品內(nèi)容物以及按處方制法制的缺冰片的陰性對(duì)照各1 g，加乙醚5 ml，超聲處理5 min，濾過，濾液作為供試品溶液;另取冰片對(duì)照品適量，加乙醚制成每毫升含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液4 μl，對(duì)照品溶液2 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯(19:1)為展開劑，用展開劑飽和15 min，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃烘干至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，檢出冰片。陰性無干擾。見圖1。

圖1 冰片薄層色譜

2.1.2 當(dāng)歸、川芎的鑒別［2］取本品內(nèi)容物以及按處方制法制的缺當(dāng)歸以及川芎的陰性對(duì)照品各2 g，加乙醚30 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液低溫?fù)]干，殘?jiān)右掖? ml 使溶解，作為供試品溶液;另取當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材適量，加乙醚15 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右掖既芤? ml 使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述4 種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以醋酸乙酯－石油醚(60℃～90℃)(15:85)為展開劑，用展開劑飽和15min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，檢出當(dāng)歸及川芎。陰性對(duì)照無干擾。見圖2。

2.2 含量測(cè)定［3-5］

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:依利特 Hypersil(ODS 25 μm，4.6 mm×250 mm);以甲醇－0.1%磷酸溶液(55:45)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm;柱溫為室溫;流速為1 ml/min;進(jìn)樣量為20 μl。

圖2 當(dāng)歸薄層色譜

2.2.2 對(duì)照品液的制備 精密稱取肉桂酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml 含6 μg 的溶液，即得。

2.2.3 供試品液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品內(nèi)容物，研細(xì)，取適量，精確稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25 ml 甲醇，密塞，稱量定重，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，濾過(0.45 μm 濾膜)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方制備不含肉掛酸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得。

2.2.5 方法學(xué)考察 專屬性試驗(yàn):照上述色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖3。肉桂酸的保留時(shí)間在17.5 min，陰性樣品溶液對(duì)測(cè)定無干擾。

圖3 A:肉桂酸對(duì)照品 B:壯骨膠囊樣品 C:陰性樣品

2.2.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)行測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程為:Y =1383113.3 X－71972.90，R =0.9999(n =5)。結(jié)果表明肉桂酸進(jìn)樣量在24.56～172.8 ng 范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好線性關(guān)系。

2.2.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次測(cè)定。依法測(cè)定肉桂酸峰面積，結(jié)果其RSD 值為1.67%(n =6)，表明精密度良好。

2.2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取同一批供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h 進(jìn)樣，依法測(cè)定肉桂酸峰面積，結(jié)果RSD 值為1.14%。表明供試品溶液穩(wěn)定。

2.2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，平行測(cè)定6 次。結(jié)果RSD=2.02%(n=6)。表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5.5 回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的樣品6 份，精密稱定，精密加入一定量肉桂酸對(duì)照品。照上述供試品制備方法制備供試品溶液，按含量測(cè)定方法測(cè)定肉桂酸含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.80%，RSD 為1.15%。

2.2.6 樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件依法測(cè)定3 批樣品中肉桂酸的含量，結(jié)果3 批樣品中肉桂酸的含量分別為:0.2196，0.2525，0.2722 mg/g。

3 討論

本方為中藥復(fù)方制劑，本文所建立的冰片、當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別方法，專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、方法重現(xiàn)性良好等優(yōu)點(diǎn)。由于當(dāng)歸和川芎含有主要共性成分，因此薄層色譜鑒別陰性對(duì)照采用雙缺味，可為含當(dāng)歸和川芎的制劑的色譜鑒別提供方法和依據(jù)。

冰片在制劑過程中容易揮發(fā)而影響含量，對(duì)進(jìn)行了薄層鑒別，有利控制制劑的質(zhì)量和監(jiān)控生產(chǎn)工藝。

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