血清可溶性B7-H4在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)及臨床意義

張 波，買(mǎi)買(mǎi)提·吐?tīng)栠d木明，龐作良*

(1新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊830011;2新疆醫(yī)科大學(xué)研究生院)

腫瘤在發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中會(huì)產(chǎn)生一些正常細(xì)胞不存在的新的抗原標(biāo)記物，機(jī)體免疫系統(tǒng)通過(guò)對(duì)這些腫瘤抗原的識(shí)別而對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷與監(jiān)視，即機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫。T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在人體抗腫瘤免疫效應(yīng)中起重要作用，而T細(xì)胞活化需要雙重信號(hào)的激活，即抗原提呈細(xì)胞(APC)上的抗原肽MHC與T細(xì)胞上的TCR-CD3復(fù)合體結(jié)合，提供T細(xì)胞活化的特異性抗原刺激信號(hào)，即第一信號(hào);以及APC上的B7家族分子與T細(xì)胞上的CD28家族分子相互識(shí)別，為T(mén)細(xì)胞活化提供共信號(hào)，即第二信號(hào)［1］。B7-H4是新近發(fā)現(xiàn)的B7家族成員［2～4］，免疫組化及RT-PCR分析顯示，B7-H4在卵巢癌等［5～8］一些腫瘤組織高表達(dá)，推測(cè)B7同源體4(B7-H4)具有減弱抗腫瘤免疫應(yīng)答的作用。國(guó)內(nèi)對(duì)于血清可溶性B7-H4(sB7-H4)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的研究鮮有報(bào)道。本研究應(yīng)用ELISA法檢測(cè)NSCLC患者血清中B7-H4的表達(dá)水平，并探討其在NSCLC中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 從2010年10月～2011年8月收集新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胸外科住院患者，男30例、女21例，年齡60.88±8.50(41～79)歲，漢族39例、維吾爾族12例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，病理分類(lèi)為鱗癌26例、腺癌22例、其他類(lèi)型3例(包含大細(xì)胞癌、肉瘤樣癌)，組織分化為高分化6例、中分化34例、低分化11例，TNM分期(2009)Ⅰ期25例、Ⅱ期12例、Ⅲ期14例，均經(jīng)術(shù)后常規(guī)病理診斷確診。選取同期住院的肺部良性疾病(BPD)患者40例，包含結(jié)核、肺囊腫、錯(cuò)構(gòu)瘤、炎性假瘤、支氣管擴(kuò)張、硬化性血管瘤等，男21例、女19例，年齡 52.95±12.36(28～77)歲。所有NSCLC患者行肺癌根治性手術(shù)治療，并除外與自身免疫相關(guān)的疾病，標(biāo)本采集前未行放療、化療及免疫治療等相關(guān)腫瘤治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 B7-H4 ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于北京永輝生物科技有限公司。德國(guó)羅氏公司電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀Cobas6000及羅氏公司提供的配套CA125、CEA檢驗(yàn)試劑盒。

1.3 檢測(cè)方法 所有NSCLC和BPD患者入院后第1天及NSCLC患者手術(shù)后第2天早晨空腹采集靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清后置－70℃凍存待測(cè)，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，CA125、CEA檢測(cè)由新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel建立電子數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用SPSS16.0進(jìn)行t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)性分析，計(jì)量資料以s表示，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清sB7-H4水平 NSCLC、BPD患者血清sB7-H4水平分別為(49.78±13.46)、(17.34± 9.39)μg/L(P＜0.01)。

2.2 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

表1 血清sB7-H4與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

臨床病理參數(shù) n sB7-H4(μg/L)P性別男30 48.32±11.41 ＞0.05女21 49.54±9.49民族漢39 49.73±9.57 ＞0.05維吾爾 12 49.62±10.45年齡(歲)≤60 25 48.02±8.57 ＞0.05＞60 26 50.82±9.48吸煙是26 49.62±10.61 ＞0.05否25 49.01±9.47腫塊直徑(cm)≥5 13 49.33±14.23 ＞0.05＜5 38 49.90±10.52病理類(lèi)型腺癌 22 51.48±9.01鱗癌 26 47.76±11.72 ＞0.05其他 3 48.81±6.31組織分化高6 46.47±12.82中34 48.83±8.46 ＜0.05低11 51.63±9.27 TNM分期Ⅰ25 42.08±8.62Ⅱ12 49.62±9.73 ＜0.05Ⅲ14 52.46±10.63淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有16 51.51±9.52 ＜0.05無(wú)35 48.72±8.63

2.3 NSCLC患者手術(shù)前后血清sB7-H4水平的變化 NSCLC患者手術(shù)前、后血清sB7-H4水平分別為(49.78±13.46)、(38.35±8.36)μg/L(P＜0.05)。

2.4 NSCLC患者血清sB7-H4水平與CA125、CEA相關(guān)性 將 NSCLC血清 sB7-H4表達(dá)水平與CA125、CEA水平進(jìn)行Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示sB7-H4水平與CA125、CEA水平均呈正相關(guān)(r =0.717、0.586，P均＜0.05)。

3 討論

B7-H4(又稱(chēng) B7X和 B7sl)是2003年 Chen等［2～4］3個(gè)實(shí)驗(yàn)室利用生物信息學(xué)方法相繼發(fā)現(xiàn)的B7家族新成員，主要在抗原特異性免疫反應(yīng)中起抑制作用，其通過(guò)抑制CD+4和CD+8T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期的進(jìn)程及細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ的產(chǎn)生來(lái)負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞免疫應(yīng)答。近來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)B7-H4在卵巢癌、乳腺癌、腎癌等［5～10］腫瘤組織中過(guò)度表達(dá)，提示B7-H4可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。2006年Simon等［5］運(yùn)用ELISA法在卵巢癌患者血清中首次證實(shí)了存在高表達(dá)的sB7-H4。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明血清sB7-H4可能為 NSCLC診斷及預(yù)后提供新的依據(jù)。

本研究中血清sB7-H4在NSCLC組織中比在BPD組織中顯著高表達(dá)，與張彩娣等研究相符合［11］，說(shuō)明sB7-H4的表達(dá)水平增高可能通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫的方式加速癌細(xì)胞免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤在人體內(nèi)生長(zhǎng)，并抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而導(dǎo)致臨床上肺癌的發(fā)生，提示sB7-H4可能為NSCLC新的具有特定診斷價(jià)值的腫瘤標(biāo)記物，可用于鑒別良惡性肺部腫瘤，也說(shuō)明編碼血清sB7-H4蛋白的基因可能成為NSCLC的促進(jìn)基因。

腫瘤細(xì)胞的分化程度是最重要的腫瘤惡性生物學(xué)特征，分化越差說(shuō)明惡性程度越高，腫瘤患者的預(yù)后越差。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低分化肺癌患者血清sB7-H4的水平明顯高于高中分化癌水平，錢(qián)韻等［12］的研究也表明了這一點(diǎn)，提示NSCLC患者血清中sB7-H4的過(guò)度表達(dá)可能通過(guò)下調(diào)APC的活性和加速T細(xì)胞凋亡來(lái)抑制腫瘤免疫系統(tǒng)的監(jiān)控，從而促進(jìn)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)展和惡性轉(zhuǎn)化，使腫瘤細(xì)胞具有更大的惡性潛能。

本實(shí)驗(yàn)中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC血清sB7-H4顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的 NSCLC患者，與 Sun等［13］的研究結(jié)果相吻合，說(shuō)明sB7-H4在NSCLC的轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們發(fā)現(xiàn)術(shù)后患者血清sB7-H4水平明顯低于術(shù)前，可能是因?yàn)槭中g(shù)切除腫瘤組織后機(jī)體腫瘤負(fù)荷減輕，隨即B7-H4表達(dá)減少，說(shuō)明NSCLC患者血清sB7-H4水平與肺癌根治性手術(shù)治療有關(guān)。此外本實(shí)驗(yàn)中NSCLC患者血清sB7-H4水平與CA125、CEA水平正相關(guān)，此現(xiàn)象提示三者有望成為聯(lián)合檢測(cè)NSCLC的有效指標(biāo)。

綜上所述，血清sB7-H4在NSCLC中高表達(dá)，可能通過(guò)抑制機(jī)體抗腫瘤免疫參與免疫逃逸，可能與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。隨著研究的深入，sB7-H4可望成為 NSCLC新的分子標(biāo)記物和NSCLC免疫治療的潛在靶點(diǎn)。

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