藍(lán)莓的組織培養(yǎng)及快速繁殖

姜冬，張利萍

（遼寧省森林經(jīng)營研究所，遼寧丹東 118002）

藍(lán)莓（Blueberry）又名越橘，屬于杜鵑花科越桔屬（Vaccinium），原產(chǎn)北美，多年生落葉或常綠果樹，分為高叢藍(lán)莓、矮叢藍(lán)莓、半高叢藍(lán)莓和兔眼藍(lán)莓。果實(shí)深藍(lán)色，甜酸適度，富含氨基酸，抗氧化能力列所有果品之首，堪稱“世界水果之王”，被國際糧農(nóng)組織列為五大健康食品之一［1］。

目前，國際市場上藍(lán)莓果實(shí)售價昂貴，處于供不應(yīng)求的狀態(tài)［3］。全世界有20多個國家和地區(qū)開始藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)化栽培。遼寧丹東地區(qū)起步較晚，于1997年開始引種試栽，當(dāng)時引進(jìn)藍(lán)莓品種約有50多個，主要來源美國、加拿大，現(xiàn)已篩選出適合本地區(qū)栽培的品種有5個。由于確定主栽品種之初數(shù)量有限，我們用組織培養(yǎng)技術(shù)加快繁殖，為主栽品種的推廣提供一條有效、快捷的途徑。

1 試驗材料與方法

1.1 材料來源

選取4年生藍(lán)莓半木質(zhì)化嫩莖、已木質(zhì)化的老莖和冬季休眠枝水培芽作為試材，于2007年分3次采自遼寧省森林經(jīng)營研究所苗圃基地，組培試驗于2007年在本所組培中心實(shí)驗室進(jìn)行。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗程序

外植體處理→接種→增殖培養(yǎng)→生根培養(yǎng)→移栽。

1.2.2 外植體處理

切取3cm帶頂芽或腋芽的幼嫩莖段去葉片留葉柄→流水沖洗60min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3～7min→無菌水沖洗4～5次→用濾紙吸去水分→將莖段切成1～2個腋芽的小段。

1.2.3 培養(yǎng)基制作

以MS為基本培養(yǎng)基，按激素6－BA、NAA、ZT含量的不同，誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基設(shè)4系列處理（培養(yǎng)基1～4號），生根培養(yǎng)基設(shè)2系列處理（培養(yǎng)基5～6號），培養(yǎng)基配方見表1。

表1 增殖培養(yǎng)基配方 mg·L－1

表1中培養(yǎng)基蔗糖含量：分化和繼代培養(yǎng)基為30g／L，生根培養(yǎng)基為25g／L。瓊脂8.5g／L，p H值5.6～5.8，在115 MPa氣壓下滅菌20min。

1.2.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度22～25℃，每天光照16h，光強(qiáng)2000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)

接種在初代培養(yǎng)基上的外植體在接種4天后陸續(xù)出現(xiàn)污染，接種15天后污染基本結(jié)束；莖段基部膨大，葉腋處萌發(fā)出側(cè)芽，生長狀態(tài)隨培養(yǎng)基不同而不同。

休眠枝的采集應(yīng)在當(dāng)年12月底至次年休眠芽萌動前為宜；水培時應(yīng)將水溫控制在20℃左右，每隔2～3天換水，并對枝條下部進(jìn)行清洗修剪。芽長到2～3cm時就可以接種。對于工廠化育苗來說，年繁殖數(shù)達(dá)到百萬株或者更多，就要求在各個季節(jié)和時間相互補(bǔ)充，才能不斷滿足生產(chǎn)，在用室外嫩莖和老莖做外植體時，應(yīng)充分考慮污染因素，采取有效措施降低污染率。

2.2 外植體增殖培養(yǎng)

在培養(yǎng)基的選擇上，我們曾試過MS、LS、N6、WPM等7種培養(yǎng)基，結(jié)果發(fā)現(xiàn)還是1／3MS培養(yǎng)效果最好，為此，我們選定1／3MS為試驗的基本培養(yǎng)基。激素選擇上，我們最初使用6－芐基腺嘌呤（6－BA）和糠基腺嘌呤（激動素KT），但是所示的幾個常用濃度對藍(lán)莓試管苗的增殖幾乎無效，接種的外植體，有的長時間不生長，有的只長出愈傷組織，有的長出小葉逐漸色壞死。后來我們選用了價格很昂貴的玉米素6－（4羥基－3－甲基－2－反式－丁烯基氨基）嘌呤，試驗使用濃度0.5～3.0mg／L。結(jié)果表明，玉米素濃度超過2.0mg／L，接種的外植體莖段萌芽迅速，但長勢不正常，顯示所用濃度偏高。因此玉米素濃度在1.0～2.0mg／L范圍內(nèi)都比較適合。

外植體培養(yǎng)20d左右，在A3、A4系列培養(yǎng)基中均有腋芽萌動并逐漸伸長生長，待組培苗長到4～5cm時，采用微枝扦插和叢芽增殖相結(jié)合的增殖方式，將長芽分切成帶1～2個芽的莖段，基部叢芽剝成幾塊轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，使其繼續(xù)分化出芽。50 d左右腋芽基部又能形成叢生芽。組培苗在A3系列培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)增殖分化的苗數(shù)量多且健壯，繁殖系數(shù)在8倍左右。

綜上所述，用A3系列培養(yǎng)基中1／3MS＋BA1.5 mg／L＋NAA0.2 mg／L＋ZT1.5 mg／L進(jìn)行增殖培養(yǎng)較為理想，一般在2個周期（40～50d）增值系數(shù)即能達(dá)到8倍以上。

2.3 生根培養(yǎng)

在無菌狀態(tài)下，選擇健壯的小苗切割成高2cm左右的莖段，轉(zhuǎn)入不同生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，結(jié)果表明在1／4MS中的小苗生根率均明顯優(yōu)于全量MS培養(yǎng)基，所用激素以IBA 0.5 mg／L效果最好，生根率達(dá)100%且每株可生5～10條根；所需天數(shù)最少，根條數(shù)最多，并且根系生長情況最好，所以1／4MS＋I(xiàn)BA 0.5 mg／L培養(yǎng)基為最適生根培養(yǎng)基。

同時，在溫室煉苗時，我們進(jìn)行了瓶外生根試驗，從常用生根藥劑種選擇吲哚丁酸和萘乙酸，用不同濃度浸根，處理后20天結(jié)果表明，NAA對藍(lán)莓沒有明顯催根作用，而IBA5～10mg／L催根效果都很好，生根率高、發(fā)根多、根系長，20 mg／L則基部膨大，發(fā)根短，表明濃度偏高。

瓶外生根更適合于工廠化生產(chǎn)，可以簡化程序和操作方法，顯著提高工作效率，省去培養(yǎng)基和相應(yīng)設(shè)備，降低成本，便于大量生產(chǎn)。在移栽作業(yè)中，我們還發(fā)現(xiàn)，可以將藍(lán)莓組培苗切段，2芽一段扦插于腐苔蘚中，控制好溫度與濕度，生根與成活率很好，極大的增加了繁殖系數(shù)。

2.4 組培苗移栽

當(dāng)苗根長到1～1.5cm時，打開瓶蓋，取出小苗，洗凈培養(yǎng)基，（幼枝上沾有培養(yǎng)基，常會引起幼枝發(fā)生腐爛，應(yīng)注意避免）。用多菌靈500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入0.1%高錳酸鉀消毒過的苗床上。苗床基質(zhì)分5個處理，分別為沙∶草炭土＝1∶1、沙∶蛭石＝1∶1、純沙、純蛭石、腐苔蘚。試驗結(jié)果表明，以腐苔蘚為基質(zhì)最好，成活率最高80%以上。草炭土和沙半量配置也不錯，成活率50%以上。

苔蘚用500倍多菌靈溶液浸泡撈出后稍瀝干水分，鋪到事先準(zhǔn)備好的苗床上，壓平壓實(shí)，苔蘚厚度5～7 cm。苗木移栽后，每天澆水一次，每周噴一次甲基托布津和營養(yǎng)液，每半月澆灌一次0.5%的FeSO4溶液，蓋塑料拱棚，保溫保濕，冬季溫室內(nèi)維持15～25℃，夏秋在露地搭蔭棚遮擋直射陽光，棚溫不超過28℃，7天后逐漸增加通風(fēng)量，并逐漸減少澆水，1個月后移栽到營養(yǎng)缽或者直接移栽大田。移栽前在畦內(nèi)撒少量草炭土，移栽后于生長季澆灌FeSO4溶液2～3次。移栽后當(dāng)年生長量可達(dá)20～30cm，翌春可有部分植株開花結(jié)果。

3 結(jié)論

3.1 莖段、莖尖培養(yǎng)在A3系列培養(yǎng)基中的1／3MS＋BA1.5 mg／L＋NAA0.2 mg／L＋ZT1.5 mg／L上誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)40～50d，繁殖系數(shù)8倍以上；

3.2 生根培養(yǎng)以A5系列培養(yǎng)基中的1／4MS＋I(xiàn)BA0.5 mg／L最好，生根率達(dá)100%且每株可生5～10條根；

3.3 移栽基質(zhì)以腐苔蘚為最好，成活率達(dá)80%以上。

4 討論

藍(lán)莓育苗可采用根蘗繁殖、根條繁殖、扦插繁殖［2－3］，但所需的繁殖材料增多，繁殖系數(shù)比較低，而組織培養(yǎng)能夠迅速去除病毒和更新品種，加快繁殖速度，短時間內(nèi)能迅速增加苗木數(shù)量，可以形成規(guī)模化生產(chǎn)，因而有更大的優(yōu)勢，所以引種初期一般采用組培技術(shù)進(jìn)行藍(lán)莓的生產(chǎn)。

圖1 藍(lán)莓在增殖培養(yǎng)基上的增殖情況

圖2 藍(lán)莓組培苗移栽入腐苔蘚中鍛煉

圖3 藍(lán)莓組培苗瓶外生根

圖4 藍(lán)莓組培苗溫室鍛煉

圖5 藍(lán)莓組培苗溫室成活

圖6 藍(lán)莓組培苗移栽于大田第四年結(jié)果狀況

對組織培養(yǎng)的藍(lán)莓苗應(yīng)用于生產(chǎn)，人們通常會懷疑：品種優(yōu)良性狀是否有變化，結(jié)果是否延遲，產(chǎn)量是否降低，據(jù)觀察，由外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織出苗，容易發(fā)生染色體變異，而由定芽發(fā)育成的幼枝變異少，是可以保持品種原有特性，用于生產(chǎn)性栽培的。因此，我們在繁育過程中通過激素調(diào)整試驗，避免通過愈傷組織成苗。

藍(lán)莓組培苗移栽后當(dāng)年生長量可達(dá)20～30cm，翌春可有部分植株開花結(jié)果，品種不同有差異。盛果期在5年左右，其壽命為50年。丹東地區(qū)現(xiàn)有人工栽培藍(lán)莓面積10～15hm2，主栽品種有藍(lán)豐（高叢）、北陸（半高叢）、北藍(lán)（半高叢）、北村（半高叢）、美登（矮叢）。其中前4個品種屬鮮果銷售優(yōu)良品種，美登適合做加工型品種。露地栽培的藍(lán)莓采果期在7月15日至8月15日，采收期可達(dá)1個月。溫室栽培的藍(lán)莓在5月20日結(jié)果。

［1］ 劉慶忠，趙紅軍.高灌藍(lán)莓微體繁殖技術(shù)研究初報［J］.落葉果樹，2001（5）：1－3.

［2］ 廖優(yōu)江，聶飛，何健，等.不同藥劑和基質(zhì)對美國兔眼藍(lán)漿果扦插生根影響［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（2）：53－54.

［3］ 修英濤，常鳳英，姜河，等.我國藍(lán)莓栽培研究現(xiàn)狀及發(fā)展措施［J］.遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003（3）；21－23.