3種方法檢測(cè)淋病奈瑟菌的比較分析及意義

馬 萍 聶慶東 殷 敏

1.清華大學(xué)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100084；2.清華大學(xué)玉泉醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100049

淋病是目前較流行的性傳播疾?。╯exually transmitted disease，STD）之一，約占全球STD 病例的3/4，在我國(guó)亦呈逐步蔓延之勢(shì)，嚴(yán)重威脅人群健康[1-2]。淋病奈瑟菌（neisseria gonorrhoeae，NG）是淋病的病原體。目前實(shí)驗(yàn)室對(duì)淋病檢測(cè)方法多種多樣，筆者對(duì)來(lái)自臨床100 例可疑標(biāo)本分別進(jìn)行分泌物培養(yǎng)法、分泌物直接涂片法、尿液淋球菌快速檢測(cè)，分析各自的陽(yáng)性率及臨床實(shí)用性，以期為基層醫(yī)院臨床提供準(zhǔn)確可靠的診斷依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源

選取筆者所在醫(yī)院2008 年3 月～2011 年11 月收治的臨床100 例疑似淋球菌感染患者，均有尿頻、尿急、尿痛、有膿性分泌物溢出等癥狀。均在未使用任何藥物前或停藥3 d 后采集2 份分泌物標(biāo)本、1 份尿液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 試劑

1.2.1 分泌物培養(yǎng)法 巧克力平板培養(yǎng)基購(gòu)自天津市金章科技發(fā)展有限公司。

1.2.2 分泌物直接涂片法 選用購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的快速革蘭染色液。

1.2.3 尿液淋球菌快速檢測(cè) 選用鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)的淋球菌檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 由門(mén)診醫(yī)生進(jìn)行分泌物標(biāo)本采集，以一次性拭子采集男性患者尿道內(nèi)2 ～4 cm 處膿性分泌物、女性患者宮頸口內(nèi)側(cè)0.5 ～1.0 cm 處分泌物黏液，取2 份標(biāo)本分別均勻涂片采用革蘭染色后（染色過(guò)程詳見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)）鏡檢，鏡檢找到白細(xì)胞內(nèi)有腎形革蘭陰性雙球菌者為陽(yáng)性。另1 份標(biāo)本置于無(wú)菌試管內(nèi)，保溫及時(shí)送檢，接種于巧克力平板，在5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)24 ～48 h，根據(jù)菌落形態(tài)用氧化酶進(jìn)行鑒定，并且涂片鏡檢為革蘭陰性雙球菌者為陽(yáng)性。

1.3.2 標(biāo)本檢測(cè) 用一次性尿杯采集初段尿標(biāo)本，1 h 內(nèi)檢測(cè)完畢。取2 mL 標(biāo)本加入反應(yīng)試管內(nèi)，垂直滴加3 滴試劑，塞緊管塞，輕輕搖勻。放置5 min 后（輕度患者可延至10 min），再輕輕搖勻1 次（若已產(chǎn)生氣泡不必再搖），觀察反應(yīng)管內(nèi)尿液上部氣泡形成情況，20 min 后結(jié)果無(wú)效。若液面上部形成一層白氣泡或液面上層管壁形成一圈細(xì)小的白氣泡者判讀為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

100 例可疑標(biāo)本中，分泌物培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果35 例、陽(yáng)性率35%；分泌物直接涂片法找到革蘭陰性雙球菌（細(xì)胞內(nèi)）39例、陽(yáng)性率39%；尿液淋病快速檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果44 例、陽(yáng)性率44%。培養(yǎng)法一直被世界衛(wèi)生組織推薦為用于診斷NG 感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”[3]，用直接涂片法、尿液淋球菌快速檢測(cè)法與培養(yǎng)法進(jìn)行比較，得出直接涂片法、尿液淋球菌快速檢測(cè)法與培養(yǎng)法的符合率分別是96%、91%。見(jiàn)表1。

表1 直接涂片法、尿液淋球菌快速檢測(cè)法與培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果比較（n）

3 討論

淋病是我國(guó)目前最常見(jiàn)的性傳播疾病之一。臨床主要表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛。男性尿道口可見(jiàn)膿性分泌物，引起尿道炎；女性可表現(xiàn)為陰道分泌物增多，宮頸可見(jiàn)膿性分泌物，引起陰道炎、盆腔炎等。慢性感染者還可導(dǎo)致不育[4]。因此快速確診是治療和預(yù)防淋病的關(guān)鍵。筆者通過(guò)對(duì)臨床100 例可疑標(biāo)本分別進(jìn)行分泌物培養(yǎng)法、分泌物直接涂片法、尿液淋球菌快速檢測(cè)。結(jié)果顯示，培養(yǎng)法陽(yáng)性率為35%，與國(guó)內(nèi)同期其他文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果[5-7]陽(yáng)性率不是很一致，這可能與受檢人群及患者男女比例有關(guān)。培養(yǎng)法的陽(yáng)性率并不是很高，這可能是因?yàn)镹G 是一種需要復(fù)雜營(yíng)養(yǎng)的脆弱細(xì)菌，不耐受干燥和低溫，要在5%CO2且濕潤(rùn)的環(huán)境下才有可能生長(zhǎng)。而且需要盡快接種標(biāo)本，床旁接種最好，但臨床往往達(dá)不到這種要求。所以致使培養(yǎng)的陽(yáng)性率并不是很高，尤其是女性患者易受很多雜菌的干擾，影響NG 的生長(zhǎng)。涂片法的陽(yáng)性率為39%，快速檢測(cè)的陽(yáng)性率為44%，以培養(yǎng)法為參考方法與之相比較，該兩種方法陽(yáng)性率均高于培養(yǎng)法，這可能與培養(yǎng)法條件要求比較高，有可能有陽(yáng)性標(biāo)本在留取到接種過(guò)程中沒(méi)有存活有關(guān)。但該兩種方法與培養(yǎng)法的符合率均高于90%。其中快速檢測(cè)法的陽(yáng)性率最高，這可能是由于快速法的原理是基于淋球菌具有一種特異性酶反應(yīng)測(cè)定系統(tǒng)，當(dāng)標(biāo)本中含有此酶時(shí)，就會(huì)發(fā)生生化反應(yīng)同時(shí)產(chǎn)生氣泡。正常情況下尿或分泌物中的雜菌產(chǎn)生此酶的活性很低不足以產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)。但當(dāng)雜菌數(shù)量大大增加時(shí)，就可引起假陽(yáng)性反應(yīng)。同時(shí)血尿和嚴(yán)重蛋白尿時(shí)也可影響結(jié)果判斷。特別是女性標(biāo)本，分泌物增多時(shí)會(huì)干擾快速檢測(cè)產(chǎn)生假陽(yáng)性。直接涂片法與培養(yǎng)法的符合率很高，比快速檢測(cè)的陽(yáng)性率略低一些，除了快速法的假陽(yáng)性反應(yīng)干擾外，也可能與分泌物的取材部位和留取方法有關(guān)。

本研究檢測(cè)的陽(yáng)性涂片標(biāo)本按照操作規(guī)程規(guī)定報(bào)告的都是在細(xì)胞內(nèi)找到革蘭陰性雙球菌。而也有文獻(xiàn)報(bào)道[8]，未找到細(xì)胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌，細(xì)胞外找到的標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)也有53%的標(biāo)本培養(yǎng)為陽(yáng)性結(jié)果。因此當(dāng)僅有胞外找到革蘭陰性雙球菌并不能完全排除淋球菌感染的可能，應(yīng)高度考慮。革蘭染色后鏡檢和淋病快速檢測(cè)法與培養(yǎng)法的符合率均在90%以上，且相對(duì)于培養(yǎng)法更簡(jiǎn)便、快速。但存在一定的假陽(yáng)性率和假陰性率，因此對(duì)于沒(méi)有培養(yǎng)條件的基層醫(yī)院而言聯(lián)合檢測(cè)分泌物涂片法和尿液淋球菌快速檢測(cè)法，可以互相彌補(bǔ)，以供臨床綜合診斷，提高淋球菌檢測(cè)的準(zhǔn)確率。

[1] 徐杰偉，何艷嫦.三種方法檢測(cè)淋病奈瑟菌的結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（12）：1301-1303.

[2] 曹陽(yáng)，熊將軍.兩種方法檢測(cè)淋球菌的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（11）：869-870.

[3] 張秀珍.當(dāng)代細(xì)菌檢驗(yàn)與臨床[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：208.

[4] 李楨，葉峰山，李連青，等.幾種淋病奈瑟菌檢測(cè)方法的比較研究[J].山西醫(yī)藥雜志，2010，39（4）：177-178.

[5] 稅開(kāi)毅.三種檢測(cè)淋病奈瑟氏菌方法結(jié)果比較[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2009，6（29）：134-135.

[6] 黃谷孫，李森真，葉珊，等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)女性淋球菌的評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34（5）：939-941.

[7] 周志光，胡永葵，黃霖慶.淋球菌快速檢測(cè)法在高危場(chǎng)所人群現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，9（20）：1566-1567.

[8] 蘇春霞，王凌，王耀榮，等.鏡檢白細(xì)胞外G-雙球菌陽(yáng)性的男性尿道分泌物淋球菌培養(yǎng)結(jié)果分析[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2011，43（6）：715-716.