HS-SPME-GC法測定頭孢噻肟鈉中多種有機(jī)溶劑殘留量

黃念桃 李弘弢*

（1 武漢維奧制藥有限公司，湖北 武漢 430223；2 湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065）

頭孢噻肟鈉[1]（cefotaxim sodium），為第三代半合成肟型頭孢菌素。對革蘭陰性菌的抗菌活性高于第一、二代頭孢菌素，尤其對大腸桿菌作用強(qiáng)，對大多數(shù)厭氧菌有強(qiáng)效抑制作用。頭孢噻肟鈉在生產(chǎn)制造過程中，由于處理工藝的因素，原料藥不可避免存在多種有機(jī)溶劑殘留，影響產(chǎn)品的質(zhì)量，進(jìn)而對人體產(chǎn)生不良反應(yīng)及毒害，因此，對原料藥、輔料及成品出廠需要嚴(yán)格的溶劑殘留檢驗。本文嘗試采用頂空固相微萃取-氣相色譜法（HS-SPME-GC）[2-6]，利用SPME前處理技術(shù)的特點，克服8種待測有機(jī)溶劑沸點差異較大的問題，一次同時進(jìn)行測定，方法快速、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 6980N 氣相色譜儀，氫焰離子化檢測器（FID），配Chemstation色譜工作站（安捷倫科技有限公司）；100μm聚二甲基硅氧烷（PDMS）、65μm聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯（PDMS/DVB）、50/30μm DVB/CAR/PDMS、85μm聚丙烯酸酯（PA）萃取頭（美國Supelco公司）；PC-220溫度調(diào)節(jié)式磁力攪拌器（美國Corning公司）；賽多利斯BP211D電子分析天平（德國賽多利斯股份公司）；艾柯純水器（成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試劑

DMAC為進(jìn)口色譜純，購自美國天地試劑公司；甲醇、四氫呋喃均為國產(chǎn)色譜純，乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯為國產(chǎn)分析純。

1.3 樣品

頭孢噻肟鈉原料為桂林大華制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號為BE101012、101015、101016。

1.4 色譜條件

AT.OV-1301（30m×0.32mm×1μm）；流速1.5mL/min，分流比5：1；柱溫：40℃（5min），5℃/min升至90℃（0 min），25℃/min升至180℃（5min）； 進(jìn)樣口溫度：220℃ ；檢測器FID：250℃；氣體流量尾吹N2：35 mL/min；；H2：35 mL/min；Air：350 mL/min

2 試驗與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、DMAC各約0.25 g，二氯甲烷約0.1g，置于50 mL容量瓶中，作為對照品儲備液，置冰箱（4℃）保存。取5.00 mL對照品儲備液至50 mL容量瓶中，作為對照品溶液。實驗時再根據(jù)需要用超純水稀釋至相應(yīng)的質(zhì)量濃度。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密稱取頭孢噻肟鈉約0.5 g置12 mL頂空瓶中，精密加入3 mL超純水，密封，即得。

2.2 SPME-GC測定方法

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液3 mL至12 mL頂空瓶中，立即密封，在75℃平衡20 min，再萃取40min，進(jìn)樣，拔出萃取頭，立即插入氣相色譜儀汽化室中解析10 min，記錄色譜圖。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

在上述色譜條件下進(jìn)樣分析對照品溶液，丙酮、異丙醇、二氯甲烷的分離度分別為2.83、3.43，乙酸乙酯和四氫呋喃的分離為3.60。甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃的理論塔板數(shù)分別為30877、60134、83102、81680、119238、180598、179254、1699571。色譜圖見圖1、圖2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 樣品溶液色譜圖

2.4 HS-SPME條件試驗

2.4.1 萃取涂層的選擇

取甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、DMAC濃度分別為30.0μg/mL， 50.0μg/mL， 50.0μg/mL，50.0μg/mL， 6.00μg/mL， 7.20μg/mL， 50.0μg/mL， 10.9μg/mL的混合對照品溶液，在色譜條件及頂空條件一致的情況下，分別用PDMS，PA，DVB/CAR/PDMS，高度交聯(lián)PDMS/DVB 等4種不同涂層的萃取頭分析對照品溶液。結(jié)果PDMS/DVB 高度交聯(lián)的萃取頭對各物質(zhì)的萃取效果最好，各組份的峰型最好，響應(yīng)良好。

2.4.2 萃取溫度考察

精密量取濃度為500μg/mL的甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、DMAC及二氯甲烷濃度為100μg/mL的混合對照品溶液3mL分別于55℃，65℃，75℃，85℃先預(yù)熱20min，再萃取50min。根據(jù)3次平均峰面積大小，選擇萃取溫度。實驗選擇萃取溫度為75℃。

2.4.3 萃取時間考察

精密量取濃度為500μg/mL的甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、DMAC及二氯甲烷濃度為100μg/mLL的混合對照品溶液3mL，分別在75℃先預(yù)熱20min再分別萃取30min，40min，50min，60min。根據(jù)三次平均峰面積大小，選擇萃取時間。實驗選擇萃取時間為40 min。

2.4.4 取樣體積考察

精密量取濃度為500μg/mL的甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、DMAC及二氯甲烷濃度為100μg/mL的混合對照品溶液1、2、3、4、5mL分別在85℃先預(yù)熱20min，再分別萃取15min。根據(jù)三次平均峰面積大小，選擇取樣體積。實驗選擇取樣體積為3 mL。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

取標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品溶液分析，做出C-A圖，求得線形范圍和回歸方程。結(jié)果見表1，在表1所示各濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 檢測限與定量限的測試

將標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐步稀釋，直到能檢測到明顯的信號為止（以信號＞3倍噪聲為檢出），得甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，四氫呋喃，DMAC的檢測限（μg/mL）分別為20，10，2.5，2.5，0.5，0.0625，0.0625，10。以信號＞10倍噪聲為準(zhǔn)，得甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，四氫呋喃，DMAC的定量限（μg/mL）分別為100，20，5，5，1，0.25，0.25，20。

2.5.3 精密度試驗

將0.5%對照品混合溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，計算甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，四氫呋喃，DMAC的RSD分別為：6.9%，2.1%，2.3%，1.2%，6.2%，1.6%，2.8%，6.6%。

表1 回歸方程與線性范圍試驗結(jié)果

2.5.4 回收試驗

分別精密稱取頭孢噻肟鈉樣品約0.5 g 共9份，平均分為3組，分別加入低濃度（100μg/mL）甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯和四氫呋喃，25μg/mL二氯甲烷，150μg/mL DMAC）混合對照品溶液、中濃度（125 μg/mL甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，乙酸乙酯和四氫呋喃，35μg/mL二氯甲烷，200μg/mL DMAC）混合對照品溶液、高濃度（167μg/mL甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，乙酸乙酯和四氫呋喃，45μg/mL二氯甲烷，250μg/mL DMAC）混合對照品溶液各3mL，溶解混合，測定。結(jié)果見表2。

表2 回收率與精密度試驗結(jié)果（n=3）

2.6 樣品測定

稱取頭孢噻肟鈉樣品0.5 g，加水3 mL于12 mL頂空瓶中，立即密封，在75 ℃平衡20 min，再萃取40min，進(jìn)樣，記錄峰面積值，按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表3，色譜圖見圖2。由以上實驗得知，頭孢噻肟鈉中的甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，四氫呋喃和DMAC未檢出，丙酮含量低于中國藥典限度要求。

表3 樣品測定結(jié)果（% n =5）

3 討 論

3.1 萃取頭涂層的選擇

商用SPME萃取頭雖然在本實驗中的萃取能力低于自制萃取頭，但制作工藝的成熟，萃取頭之間重現(xiàn)性好。試驗所選四種商用萃取頭的涂層各具代表性，實驗結(jié)果基本反映了其各自的特點，涂層的選擇需綜合考慮8種被測組分的情況。

3.2 HS-SPME萃取條件的選擇

本實驗對萃取溫度、萃取時間、取樣體積分別做了詳細(xì)系統(tǒng)的優(yōu)化實驗。結(jié)果是在萃取溫度為75℃，萃取時間為40min，取樣體積為3mL時，各組份的出峰情況最優(yōu)。

3.3 萃取頭的解吸

固相微萃取進(jìn)樣測定后，萃取頭仍有少許殘留（殘留峰值一般占測定峰值的1%左右），因此，解吸是必要的，特別是經(jīng)由高濃度向低濃度測定。實驗研究，經(jīng)過兩次解吸，可以完全消除殘留的影響。

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