奧沙利鉑雜質(zhì)研究進展

牛 沖，劉桂花，張中湖(.山東省食品藥品檢驗所，山東濟南500;.山東瑞中醫(yī)藥有限公司，山東濟寧7000)

奧沙利鉑是繼順鉑、卡鉑之后的第3代鉑類抗癌藥物，主要通過產(chǎn)生烷化結(jié)合物作用于DNA，形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián)，從而抑制DNA的合成及復(fù)制。臨床主要用于氟脲嘧啶治療失敗后的結(jié)(直)腸癌轉(zhuǎn)移患者以及胃癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌等癌癥。1996年在法國批準(zhǔn)上市，2002年得到美國FDA的認(rèn)可。奧沙利鉑收載于歐洲藥典7.0版(EP 7.0)，國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-104)-2003Z。劑型有注射用奧沙利鉑、奧沙利鉑注射液及奧沙利鉑甘露醇注射液，其中注射用奧沙利鉑收載于國家標(biāo)準(zhǔn) WS1-(X-090)-2003Z，雜質(zhì)檢驗方法同原料。為給奧沙利鉑甘露醇注射液在線監(jiān)控示范生產(chǎn)線提供技術(shù)支持，完善我國奧沙利鉑原料及制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文綜述了奧沙利鉑及其制劑的雜質(zhì)研究進展，為下一步開展實驗室研究奠定基礎(chǔ)。

1 奧沙利鉑雜質(zhì)來源分析

奧沙利鉑經(jīng)典的合成工藝以四氯鉑酸鉀為起始原料，與反式環(huán)己二胺反應(yīng)得二氯環(huán)己二胺合鉑、加入硝酸銀溶液反應(yīng)、過濾除去氯化銀沉淀，母液中加入草酸鉀或草酸鈉反應(yīng)，減壓濃縮后制得奧沙利鉑粗品，經(jīng)過重結(jié)晶精制得成品［1］?；蛘咧苯右远?碘)環(huán)己二胺合鉑為起始原料，經(jīng)類似的處理方法制得奧沙利鉑［2～5］。何健等人提供了一種無銀合成奧沙利鉑的新工藝，由四氯鉑酸鹽與反式環(huán)己二胺反應(yīng)得二氯環(huán)己二胺合鉑，再與草酸鹽反應(yīng)得目標(biāo)化合物，不引入對人體有害的重金屬Ag［6］。

由合成工藝可見，奧沙利鉑原料的雜質(zhì)主要有起始原料草酸(雜質(zhì)A)、合成中間體二氯二胺環(huán)己烷合鉑。在合成反應(yīng)中，可能生成的副產(chǎn)物二水合二胺環(huán)己烷合鉑(雜質(zhì)B)及其聚合物(雜質(zhì)E)和二羥合奧沙利鉑(雜質(zhì)C)。工藝所用反式環(huán)己二胺為反式-1R，2R-環(huán)己二胺，其中混有的反式-1S，2S-環(huán)己二胺雜質(zhì)也可參與反應(yīng)生成奧沙利鉑的左旋異構(gòu)體(雜質(zhì)D)。另外由于合成中用到硝酸銀溶液，可能引入重金屬Ag。各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)見圖1。

2 奧沙利鉑雜質(zhì)控制

EP 7.0采用不同的色譜條件，選擇不同的波長，分別對奧沙利鉑雜質(zhì)A(草酸)、雜質(zhì)B(二水合二氨環(huán)己烷鉑)、雜質(zhì)E(雜質(zhì)B二聚體)、雜質(zhì)C(二羥合奧沙利鉑)以及雜質(zhì)D(奧沙利鉑左旋異構(gòu)體)進行控制。國家標(biāo)準(zhǔn)僅采用一個色譜條件(見表1)對雜質(zhì)總和進行了控制，且限度遠(yuǎn)高于EP 7.0。國家標(biāo)準(zhǔn)檢測波長250 nm，此檢測波長與草酸205 nm、雜質(zhì)B 215 nm、雜質(zhì)C 210 nm及雜質(zhì)E 215 nm的檢測波長相差較大，各雜質(zhì)與奧沙利鉑結(jié)構(gòu)上亦有很大差異，其響應(yīng)值相差甚遠(yuǎn)，按國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗不能真實反映各雜質(zhì)總量，無法有效控制其中的雜質(zhì)。

圖1 奧沙利鉑各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)圖

表1 歐洲藥典(EP 7.0)與中國衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)對奧沙利鉑雜質(zhì)控制的比較

3 奧沙利鉑雜質(zhì)研究狀況

目前國內(nèi)對奧沙利鉑研究主要側(cè)重于臨床及不良反應(yīng)，雜質(zhì)研究文獻較少。黃毅嵐等人采用HPLC法對奧沙利鉑及注射用奧沙利鉑的有關(guān)物質(zhì)進行了研究。采用甲醇∶水(5∶95)為流動相，對波長的選擇進行了考察，紫外吸收顯示200～400 nm波長范圍內(nèi)奧沙利鉑無明顯吸收峰，但在230～260 nm的波長范圍內(nèi)吸收較強且曲線平緩，同時，通過對255、250、240 nm波長處的有關(guān)物質(zhì)的測定比較，在250 nm波長處檢出雜質(zhì)量最大，因此選用250 nm波長檢測有關(guān)物質(zhì)，方法與國家標(biāo)準(zhǔn)基本一致［7］。傅萍等人對注射用奧沙利鉑有關(guān)物質(zhì)檢查法中發(fā)現(xiàn)的問題進行了探討研究，參照EP 6.0和英國藥典(BP)2010年版奧沙利鉑雜質(zhì)C的方法對檢出波長、色譜柱進行了篩選，并進行了方法學(xué)研究，同時將檢測結(jié)果與現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)方法進行比較。研究表明，奧沙利鉑在200～250 nm波長范圍內(nèi)吸收較強，草酸與雜質(zhì)C在200～220 nm波長范圍內(nèi)有最大吸收，而破壞性雜質(zhì)在210 nm波長附近的吸收值可滿足檢測要求。在雜質(zhì)檢出方面，參照EP 6.0的方法均能檢出雜質(zhì)A、雜質(zhì)C，而國家標(biāo)準(zhǔn)方法不能檢出草酸。在雜質(zhì)檢出數(shù)量上，參照EP 6.0的方法檢出的雜質(zhì)數(shù)較國家標(biāo)準(zhǔn)方法的多［8］。有研究表明，奧沙利鉑的代謝產(chǎn)物草酸鹽作用于感覺和運動神經(jīng)原細(xì)胞膜上的Na+通道，使Na+內(nèi)流幅度及動作電位減弱，導(dǎo)致其急性神經(jīng)毒性的發(fā)生［9，10］。劉穎等人參照EP 5.0奧沙利鉑草酸的檢驗方法對注射用奧沙利鉑中的草酸進行了研究［11］。劉祝東等人對奧沙利鉑手性異構(gòu)體進行了分析。通過對色譜柱固定相類型、使用范圍、適應(yīng)溶劑及流動相極性等方面的對比研究，選擇Chiralcel OD-RH手性色譜柱。國家標(biāo)準(zhǔn)采用水作為溶劑，易造成色譜峰的變形，采用甲醇為溶劑，峰形正常［12］。

4 奧沙利鉑制劑穩(wěn)定性研究

臨床上注射用奧沙利鉑在用水或5%葡萄糖溶液配置成溶液后立即使用，一般不超過8 h。如誤用0.9%氯化鈉溶液稀釋，則奧沙利鉑立即轉(zhuǎn)換為高生物活性的單氯、二氯或二水合二胺環(huán)己烷合鉑［13］。奧沙利鉑的水溶液不穩(wěn)定，在水中會逐漸降解為雜質(zhì)B、雜質(zhì)C及雜質(zhì)E［14］?；诜坩槃┰谂R床應(yīng)用的各種缺點，科研人員對臨床易于使用的奧沙利鉑水溶液進行了研究。Ibrahim通過研究表明濃度在1～5 mg/ml的奧沙利鉑水溶液在pH 4.5～6的范圍內(nèi)3個月穩(wěn)定［15］。隨后的研究表明，這種簡單的奧沙利鉑水溶液不夠穩(wěn)定［16］。Andre研究了聚烯烴袋裝保存的0.7 mg/ml的奧沙利鉑5%葡萄糖溶液，在低溫(3～7℃)和室溫(20～24℃)儲藏條件下，30 d內(nèi)穩(wěn)定［17］。Audrey研究了0.25 mg/ml的奧沙利鉑5%葡萄糖溶液在PVC包裝袋中的穩(wěn)定性，在低溫(4℃)和室溫儲藏條件下，90 d內(nèi)穩(wěn)定［18］。5 mg/ml奧沙利鉑水溶液在催化量(0.001% ～0.005%)的糖(乳糖、葡萄糖、蔗糖)存在的情況下，40℃溫度及70%濕度下，3個月內(nèi)穩(wěn)定。同時研究表明，加入0.001%～0.02%糖的奧沙利鉑溶液在含量的降低、雜質(zhì)的增加等方面要優(yōu)于加入0.05%以上(特別是5%)糖的奧沙利鉑溶液［19，20］。草酸及草酸鹽［14］、乳酸-乳酸鹽［16］、丙二酸-丙二酸鹽［21］、酒石酸-酒石酸鹽［22，23］、丙二醇、甘油、麥芽糖醇、蔗糖以及肌醇［24］等，均可作為pH調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑提高奧沙利鉑水溶液的穩(wěn)定性。目前國內(nèi)上市的奧沙利鉑注射液中，均加入甘露醇，作為滲透壓調(diào)節(jié)劑及穩(wěn)定劑。Michaela發(fā)明了一種專門用于貯存奧沙利鉑注射液的環(huán)烯共聚物密封塑料瓶。玻璃瓶中，奧沙利鉑水溶液與玻璃瓶表面之間的作用力比塑料瓶大，而且玻璃瓶釋放出的痕量的金屬離子能加快奧沙利鉑的降解，使之降解為草酸、雜質(zhì)B及雜質(zhì)E，而塑料瓶在儲存及高溫滅菌過程中，均不釋放金屬離子［25］?；谏鲜鲈?，EP 7.0在奧沙利鉑雜質(zhì)B的檢驗中，溶液的配置及進樣瓶均選用聚丙烯材料。

5 結(jié)語

奧沙利鉑及其制劑的主要雜質(zhì)為草酸、雜質(zhì)B、C、D、E，草酸為奧沙利鉑的合成原料，雜質(zhì)B、C、D及E均為反應(yīng)副產(chǎn)物，同時原料及制劑在放置過程中均可能降解產(chǎn)生上述雜質(zhì)。建議奧沙利鉑甘露醇注射液在線監(jiān)測示范生產(chǎn)線采用無銀生產(chǎn)工藝，使用聚丙烯材料內(nèi)包裝，增加外層不透光包裝，儲存條件改為10℃低溫保存。內(nèi)部質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)采用EP 7.0標(biāo)準(zhǔn)，對5個雜質(zhì)分別控制。建議國家標(biāo)準(zhǔn)由單一波長對雜質(zhì)總和進行控制，改變?yōu)閷Ω麟s質(zhì)分別控制，并制定合理的限度，確保奧沙利鉑及其制劑的安全。

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