中藥體外抗菌作用實(shí)驗(yàn)方法初探

陸繼梅 孟建華 安 立 安紅梅

中藥體外抗菌作用實(shí)驗(yàn)方法初探

陸繼梅 孟建華 安 立 安紅梅

中醫(yī)外科學(xué)；體外抗菌；藥敏檢驗(yàn)學(xué)實(shí)驗(yàn)

為了揭示中醫(yī)外科外用中藥的體外抗菌譜及抗菌力，以進(jìn)一步指導(dǎo)臨床應(yīng)用及組方藥物的篩選。筆者對(duì)我院應(yīng)用40年歷史的9種傳統(tǒng)制劑，以及檢索到的傳統(tǒng)方、經(jīng)驗(yàn)方和各醫(yī)院的協(xié)議方共52首方劑中出現(xiàn)的59味中藥，運(yùn)用現(xiàn)代臨床藥敏學(xué)檢驗(yàn)學(xué)方法，對(duì)其抗菌作用進(jìn)行定性、定量的細(xì)菌學(xué)研究。經(jīng)過三年的努力，初步完成了中藥體外抗菌作用的研究，現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)方法中的心得體會(huì)分享如下，以期剖磚引玉，望各位同道借鑒。

1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的問題

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)造成數(shù)據(jù)誤差。早期的中藥抑菌作用實(shí)驗(yàn)是將菌株植入不同濃度的中藥藥液中，或用挖溝法來觀測(cè)中藥體外抗菌作用。如此的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，改變了細(xì)菌的正常生存條件，所測(cè)定結(jié)果是一定濃度的中藥液對(duì)處于異常生存條件下菌種的抑菌作用值。故見文獻(xiàn)及中藥專著中許多中藥體外抗菌作用好，抗菌譜廣。在嚴(yán)格按照現(xiàn)代臨床藥敏學(xué)檢驗(yàn)學(xué)方法對(duì)中藥進(jìn)行體外抗菌作用進(jìn)行細(xì)菌學(xué)研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)中藥抗菌譜窄、抗菌力低。汞、鉛等化合物形成的丹類藥物（如紅粉、輕粉）抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)，與教科書及中藥專著中所述差異極大。

單味、單方面研究多，綜合研究少。中醫(yī)外科外用藥的臨床作用是多因素的，中藥外用于局部組織后可產(chǎn)生吸附、凝血、鎮(zhèn)痛、形成保護(hù)層（或膜）、抑菌殺菌、改善局部血液循環(huán)、促進(jìn)纖維細(xì)胞的增長、激活趨化巨噬細(xì)胞等綜合作用，對(duì)創(chuàng)面的愈合有顯著促進(jìn)作用。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中為了追求特異性指標(biāo)，往往多是單一因素研究。例如筆者的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)就忽略了上述因素，只觀察了實(shí)驗(yàn)室條件下中藥體外抗菌作用的一個(gè)方面，所得結(jié)果是一種相對(duì)值，缺乏對(duì)整體作用的評(píng)估。

研究藥物或組方時(shí)傳統(tǒng)／經(jīng)典方劑少，經(jīng)驗(yàn)方或自擬方多。在檢索資料中發(fā)現(xiàn)，對(duì)傳統(tǒng)／經(jīng)典藥物的研究比較，例如生肌散、九一丹等系統(tǒng)研究比較罕見，比較多見的是自擬方劑及單味藥的研究與觀察，缺乏廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)，難以反應(yīng)出普遍規(guī)律。

劑型作用比較研究缺乏。中醫(yī)外科治療瘡瘍的外用藥在臨床上有散劑、膏劑、水劑等劑型，但在檢索資料時(shí)未見到中藥的體外抗菌／抑菌作用研究在不同劑型以及不同劑型之間的比較研究。

2 實(shí)驗(yàn)操作中的問題

2.1工作量估計(jì)不足由于實(shí)驗(yàn)涉及藥劑科、檢驗(yàn)科、制劑室等多科室、多人的合作，需要對(duì)環(huán)節(jié)進(jìn)行控制以保證實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量，這需要提前做好充足的準(zhǔn)備協(xié)調(diào)工作，必要時(shí)制定操作手冊(cè)。盡管進(jìn)行了許多準(zhǔn)備工作，但由于對(duì)臨床藥敏檢驗(yàn)學(xué)方法的認(rèn)知有限，還是低估了其工作，尤其是進(jìn)行液體稀釋法時(shí)，工作中需要對(duì)有抑菌作用的每一味中藥從1毫克開始進(jìn)行倍倍稀釋操作，試管應(yīng)用量達(dá)數(shù)千支／次之多，致使實(shí)驗(yàn)觀察期限一拖再拖，未能按期完成。體會(huì)到如果是涉及多學(xué)科時(shí)，充分準(zhǔn)備必須是對(duì)專業(yè)細(xì)節(jié)的掌握。

2.2溶解度的影響擬實(shí)驗(yàn)觀察的中藥大致有礦物質(zhì)、植物類、脂性類。為了符合藥敏檢驗(yàn)學(xué)的操作規(guī)程，在實(shí)驗(yàn)中分為了兩大類：易溶性藥物、非易溶性藥物。易溶性的藥物進(jìn)行了水提取，非易溶性藥物進(jìn)行了研粉加工。

此種操作方法，對(duì)非易溶性藥物的觀察基本上是與臨床應(yīng)用情況符合。但對(duì)植物類藥物忽略了其溶解度與溶劑的問題，可致使有效成分不能充分析出，因此實(shí)驗(yàn)的觀察值應(yīng)該只是水溶狀態(tài)值，這將與使用不同制劑時(shí)的作用出現(xiàn)偏差。所得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)該是在一定條件下的數(shù)值，不具備普遍性。

2.3酸堿度的影響在理論上環(huán)境的酸堿度對(duì)細(xì)菌生長會(huì)產(chǎn)生影響，在實(shí)驗(yàn)之初曾經(jīng)進(jìn)行過部分藥液的測(cè)定，但隨著工作量的增加不得不放棄。對(duì)于外用中藥環(huán)境酸堿度對(duì)細(xì)菌生長的影響，筆者認(rèn)為需要進(jìn)一步的觀察，這對(duì)日后中藥外用制劑的備置有指導(dǎo)性的意義。

2.4藥物的協(xié)同作用目前的多數(shù)藥物觀察是單味藥物或是復(fù)方的研究，對(duì)藥物協(xié)同性的研究比較少。筆者的實(shí)驗(yàn)中均是采用的單味藥物觀察。在非易溶性藥物抗菌作用觀察中輕粉、紅粉、硼砂三種中藥在兩實(shí)驗(yàn)藥片之間出現(xiàn)抑菌范圍連片，形成不對(duì)稱抑菌環(huán)，出現(xiàn)明顯的協(xié)同作用，遺憾的是未做聯(lián)合用藥的抑菌作用實(shí)驗(yàn)。此現(xiàn)象對(duì)日后的組方用藥和藥物實(shí)驗(yàn)也提出一個(gè)方向，輕粉、紅粉在組方時(shí)很少同時(shí)應(yīng)用，進(jìn)一步的研究可對(duì)其用量和組方提供定量定性的指導(dǎo)作用。

2.5非易溶性藥物的制備與操作問題此類多是礦物質(zhì)類藥物，在臨床應(yīng)用時(shí)多為散劑。在制備的時(shí)候使用了小型研磨機(jī)，過200目篩備用，這比一般臨床應(yīng)用的粉劑顆粒要細(xì)。在用于瓊脂法的時(shí)候，為了保證將藥粉制成均勻的圓片狀，我們特制了環(huán)與栓。將直徑為5mm圓環(huán)放在滅菌的載玻片上，而后放入已稱重2mg藥粉攤均，用與圓環(huán)吻合的栓將藥粉壓成圓片狀。在操作過程中各環(huán)節(jié)保證無菌操作，防止交叉污染。如此的操作使藥片的形狀得以統(tǒng)一控制，保證了抑菌環(huán)測(cè)量的準(zhǔn)確性。

2.6高壓滅菌是否對(duì)中藥有效成分造成破壞為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，防止交叉污染，在實(shí)驗(yàn)中對(duì)所有的藥物均進(jìn)行了高壓滅菌。在理論上對(duì)中藥有效成分會(huì)產(chǎn)生一定的破壞，但為了與臨床使用相符合和醫(yī)療安全需要也只能如此了?，F(xiàn)在許多醫(yī)院的中藥外用散劑都進(jìn)行高壓滅菌。曾有報(bào)道特殊菌種（破傷風(fēng)桿菌）隨中藥外用換藥造成感染。其次，在臨床上除了去腐生肌散劑外，多數(shù)外用中藥散劑均制備成油紗條使用。

[1]林滔,黃寧.中草藥體外抗真菌活性實(shí)驗(yàn)方法分析[J].中國藥師,2006,3:55.

[2]陶慶春.中藥對(duì)細(xì)菌抑菌作用的體外實(shí)驗(yàn)方法學(xué)研究[J].實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志,2011,03(01):22-23.

石家莊市中醫(yī)院，河北石家莊 050011