抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響

陳波，馮莉，翟鐵軍

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

近年來(lái)，隨著藥物溶栓及冠心病介入治療，冠脈旁路移植術(shù)等的臨床應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)冠脈再通已不是難題。但人們很早就注意到心肌缺血再灌注時(shí)易引起一系列心臟與血管的不良事件，如嚴(yán)重的再灌注心律失常、心肌缺血損傷加重［1］。西醫(yī)通過(guò)電復(fù)律及藥物(如α－受體阻滯劑、利多卡因、Ca2+拮抗劑等)防治再灌注心律失常，而本實(shí)驗(yàn)選用復(fù)方中藥抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)觀察該藥對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷后心電圖的影響。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)Wistar大鼠50只(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，體質(zhì)量(250±40)g，雌雄各半。

1．1．2 實(shí)驗(yàn)用藥

抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào):川芎、黃芪、紅花、桃仁、當(dāng)歸、赤芍、黨參、川牛膝、枳殼、地龍、水蛭等組成，購(gòu)自黑龍江省藥材公司，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院煎藥室水煎濃縮而成。

通心絡(luò)膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):080822);烏拉坦(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)站分裝廠，批號(hào):080220);蒸餾水由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1．1．3 主要儀器及設(shè)備

小動(dòng)物呼吸機(jī)(DH－50型，浙江大學(xué)儀器廠);心電機(jī)(6511型，上海KOHDEN電子有限公司);電子分析天平［梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司］。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 實(shí)驗(yàn)分組

50只清潔級(jí)Wistar大鼠，隨機(jī)分為5組，假手術(shù)組、模型組、抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)高劑量組、抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)低劑量組、通心絡(luò)組，每組各10只，相同條件下分籠飼養(yǎng)。

1．2．2 給藥方法

假手術(shù)組:灌服生理鹽水，每天10ml/kg。模型組:灌服生理鹽水，每天10ml/kg?？鼓o(hù)心Ⅱ號(hào)高劑量組:灌服濃度0．72g/ml抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)，每天10ml/kg?？鼓o(hù)心Ⅱ號(hào)低劑量組:灌服濃度0．24g/ml抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)，每天10ml/kg。通心絡(luò)組:灌服通心絡(luò)，濃度為0.05g/ml，每天10ml/kg。各組于術(shù)前14天依照給藥方法分別進(jìn)行灌胃，末次給藥30min后進(jìn)行手術(shù)。1．2．3 模型制備

大鼠急性心肌梗死模型的制備［2］:用20%烏拉坦(5ml/kg)腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥固定于鼠板上，將心電儀針狀電極分別插入四肢皮下，標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)記錄心電圖。分離頸總動(dòng)脈，氣管插管，呼吸機(jī)控制呼吸(呼吸頻率55～60次/分)，經(jīng)左側(cè)第3～5肋間開胸暴露心臟，剪開心包，于左心耳與肺動(dòng)脈圓錐下方找到冠狀動(dòng)脈左前降支，在冠狀動(dòng)脈下進(jìn)針，以0號(hào)線穿過(guò)心肌表層后出針，穩(wěn)定后將直徑1．5mm的硅膠管置于結(jié)扎線與所取血管心肌表層之間，拉緊結(jié)扎線使硅膠管壓迫左冠狀動(dòng)脈，造成閉塞(假手術(shù)組僅在左冠狀動(dòng)脈穿線，但不結(jié)扎冠脈，心臟曠置，時(shí)間等同其他組)，記錄結(jié)扎前后心電圖。結(jié)扎30min后，拔去引線使冠狀動(dòng)脈再通，并觀察心電圖有無(wú)再灌注心律失常。模型(除假手術(shù)組外)成功標(biāo)準(zhǔn):中斷血流后供血區(qū)心肌顏色由鮮紅轉(zhuǎn)為暗紫，心電圖示ST段抬高與T波融合，呈弓背向上單向曲線，抬高大于0．5mv為結(jié)扎成功的指標(biāo)。30min后解除壓迫，心電圖出現(xiàn)Q波，為造模成功。

1．2．4 心電圖的處理

1．2．4．1 分別描記各組再灌注后Ⅱ?qū)?lián)的ST段，觀察Ⅱ?qū)?lián)室性心律失常的發(fā)生率。

1．2．4．2 ST段測(cè)量方法與ST段保護(hù)率的計(jì)算

ST段振幅，是以兩個(gè)相鄰且齊平的T－P段為基線，測(cè)量這兩個(gè)相鄰T－P段之間的ST段值，∑ST增幅指ST段抬高的總和。ST段保護(hù)率=［(模型組∑ST－假手術(shù)組∑ST)－(處理組∑ST－假手術(shù)組∑ST)］÷(模型組∑ST－假手術(shù)組∑ST)×100%。所有觀察指標(biāo)的數(shù)據(jù)均來(lái)源于心電圖記錄文件的Ⅱ?qū)?lián)。1．2．4．3 T 波的測(cè)量方法與 T 波保護(hù)率的計(jì)算［3］

本實(shí)驗(yàn)對(duì)心肌缺血程度的觀察指標(biāo)為T波的變化。T波高度測(cè)量:分別選取缺血前、缺血中、再灌注后Ⅱ?qū)?lián)體表心電圖，選擇清晰波形分析測(cè)量導(dǎo)聯(lián)T波振幅，以P－R段為基線，每時(shí)間點(diǎn)測(cè)5個(gè)連續(xù)波形，取其平均值。記錄并計(jì)算T波的變化值(△T=缺血中、缺血后T波值－缺血前T波值)，無(wú)論升高或降低，均取變化的絕對(duì)值。

T波保護(hù)率=［(模型組∑△T－假手術(shù)組∑△T)－(處理組∑△T－假手術(shù)組∑△T)］÷(模型組∑△T－假手術(shù)組∑△T)×100%

1．2．5 統(tǒng)計(jì)分析

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通心絡(luò)組兩只大鼠造模失敗，死亡。

2．1 心電圖的改變

2．1．1 各組大鼠∑ST和ST段保護(hù)率的變化

缺血后各組無(wú)顯著差別(P＞0．05);再灌注后各組與模型組比較有顯著差別(P﹤0．05);中藥高劑量組與通心絡(luò)組比較無(wú)顯著差別(P＞0．05);中藥低劑量組與通心絡(luò)組組比較有顯著差別(P﹤0．05);中藥高劑量與中藥低劑量組比較有顯著差別(P﹤0．05)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護(hù)率(±s)

表1 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖∑ST及ST段保護(hù)率(±s)

注:與模型組比較，*P﹤0．05;與通心絡(luò)組比較，△P﹤0．05;中藥高劑量組與低劑量組比較，#P＜0.05。

組別∑ST mV ST段保護(hù)率%缺血后 再灌注后假手術(shù)組 － － －模型組 0．26±0．03 0．26±0．03 －中藥高劑量組 0．23 ±0．03 0．12 ±0．03*# 53．85中藥低劑量組 0．25±0．04 0．20±0．03＊△ 23．08通心絡(luò)組 0．25 ±0．03 0．14 ±0．02*46．15

2．1．2 各組大鼠△T和T波保護(hù)率的變化

大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎后再灌注，可以引起大鼠的心肌缺血再灌注損傷，表現(xiàn)心電圖的T波發(fā)生改變;抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)和通心絡(luò)可顯著抑制再灌注大鼠心電圖△T的改變，具有很明顯的T波保護(hù)作用。缺血前各組∑△T無(wú)明顯差異;缺血中，與假手術(shù)組相比，模型組和各藥物組△T明顯增大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);與模型組相比，各藥物組△T改變明顯減小(P＜0．05)。再灌注后，與假手術(shù)組相比，模型組和各藥物組△T明顯增大(P＜0．05);與模型組相比，各藥物組△T明顯減小(P＜0．05);與各藥物組△T沒(méi)有明顯差異(P＞0．05)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護(hù)率(±s)

表2 各組大鼠缺血再灌注損傷心電圖△T及T波保護(hù)率(±s)

注:與模型組比較，◇P﹤0．05;與假手術(shù)組比較，△P﹤0．05;同組內(nèi)與缺血中比較，#P﹤0．05。

組別△TmV T波保護(hù)率%缺血后△T 灌注后△T模型組 0．141 ±0．015 0．088 ±0．015#－假手術(shù)組 0．003±0．005◇ 0．003±0．005◇# －通心絡(luò)組 0．111 ±0．015◇△ 0．057 ±0．012◇△# 35．88中藥低劑量組 0．118 ±0．014◇△★ 0．066 ±0．013◇△★# 25．88中藥高劑量組 0．114 ±0．016◇△★ 0．056 ±0．012◇△★#37．65

2．1．3 各組對(duì)大鼠心肌再灌注損傷后室性心律失常發(fā)生率的影響

抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)高、低劑量組以及通心絡(luò)組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組(見(jiàn)表3)。

表3 各組室性心律失常發(fā)生率

3 討論

心肌缺血再灌注損傷主要與鈣超載、氧自由基的損害有關(guān)。鈣超載是心肌缺血再灌注誘發(fā)心肌頓抑及心律失常的重要發(fā)生機(jī)制。由于Ca2+波動(dòng)激活內(nèi)向離子流，引發(fā)延遲后除極，當(dāng)舒張期膜電位的波動(dòng)達(dá)到閾值就可激發(fā)早搏，加上缺血與非缺血區(qū)之間傳導(dǎo)速度不一致形成折返沖動(dòng)導(dǎo)致心律失常。心肌細(xì)胞內(nèi)高Ca2+對(duì)心肌細(xì)胞的損傷，細(xì)胞內(nèi)高Ca2+導(dǎo)致線粒體攝鈣增加，消耗ATP，并與磷酸根結(jié)合干擾氧化磷酸化，使ATP生成減少;Ca2+升高可激活磷脂酶引起細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜的損傷，ATP酶加速ATP消耗，蛋白酶促進(jìn)細(xì)胞膜和結(jié)構(gòu)蛋白的分解，核酶激活引起染色體損傷。氧自由基的損傷是因缺血再灌注時(shí)通過(guò)黃嘌呤氧化酶途徑產(chǎn)生大量的氧自由基，導(dǎo)致體內(nèi)氧自由基聚集，使細(xì)胞膜通透性、流動(dòng)性增加，表現(xiàn)為心肌細(xì)胞電活動(dòng)紊亂而產(chǎn)生心律失常［4－5］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)高、低劑量組以及通心絡(luò)組的室性心律失常發(fā)生率明顯低于模型組，而ST段及T波保護(hù)率明顯高于模型組。表明抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)對(duì)缺血再灌注損傷的心肌有保護(hù)作用。因此，推測(cè)抗凝護(hù)心Ⅱ號(hào)可能有以下作用:1)抑制鈣超載可以減少室性心律失常的發(fā)生率，進(jìn)一步減少鈣超載對(duì)心肌頓抑的影響;2)清除氧自由基的作用，減輕氧自由基對(duì)心肌的損害，減少室性心律失常的發(fā)生率，發(fā)揮保護(hù)受損心肌。

［1］張麗，張麟．缺血再灌注損傷與心肌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展［J］．中國(guó)現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志，2006，5(10):43 －45．

［2］施新猷．醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1979:235．

［3］CheungPY，sawckiG，Wozniak M，et al．Martix metalloproteinase － 2 conrtibuets to isehemia － rePerfusion in ury in the heart［J］．Circulation，2000，101(15):1833 －1839．

［4］周波，陳飛，仲維娜，等．從 NO、NOS變化探討瓜蔞薤白白酒湯對(duì)心肌缺血再灌注損傷的防治作用［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(3):36－38．

［5］薛建軍，張凌云，譚萍．參附注射液對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展［J］．西部中醫(yī)藥，2011，24(10):98 －101．