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    抗巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌藥物微球制劑的研究進(jìn)展

    2012-01-25 14:32:34郭振勇靳海龍北京結(jié)核病胸部腫瘤研究所首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院北京101149
    中國(guó)藥房 2012年33期
    關(guān)鍵詞:結(jié)核菌利福平西沙

    郭振勇,劉 碩,靳海龍(北京結(jié)核病胸部腫瘤研究所/首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院,北京 101149)

    抗巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌藥物微球制劑的研究進(jìn)展

    郭振勇*,劉 碩,靳海龍(北京結(jié)核病胸部腫瘤研究所/首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院,北京 101149)

    目的:為抗巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌藥物微球制劑的進(jìn)一步研發(fā)提供參考。方法:根據(jù)文獻(xiàn),綜述了幾種處于研究階段的不易進(jìn)出巨噬細(xì)胞的抗結(jié)核菌藥物(利福平、莫西沙星、氧氟沙星等)所制微球制劑的研究進(jìn)展。結(jié)果與結(jié)論:這幾種微球制劑具有較其普通藥物更強(qiáng)的抗結(jié)核菌作用??梢?jiàn)微球作為藥物載體,對(duì)攜帶藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞、快速殺滅巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌提供了一條可行的道路。

    結(jié)核病;巨噬細(xì)胞;微球;研究進(jìn)展

    結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染所致,為當(dāng)今世界三大傳染性疾病之一,全球有1/3的人口感染過(guò)結(jié)核病。平均每年新增加800萬(wàn)感染患者,并有大約300萬(wàn)人死于結(jié)核病[1]。巨噬細(xì)胞是廣泛存在于人體各種組織的細(xì)胞群,是人體免疫系統(tǒng)的一部分,它通常能夠吞噬外來(lái)致病原,并利用其核內(nèi)體或溶酶體對(duì)病原體進(jìn)行消化處理,形成食物泡,最終將之降解。結(jié)核桿菌主要通過(guò)巨噬細(xì)胞表面受體C3以及CR1、CR3、CR4等發(fā)揮調(diào)節(jié)作用而侵入巨噬細(xì)胞,一旦進(jìn)入后,能夠抑制食物泡的成熟,從而逃過(guò)巨噬細(xì)胞的降解,進(jìn)而導(dǎo)致人體發(fā)病[1]。

    在過(guò)去30年中,還沒(méi)有一種具有全新結(jié)構(gòu)或全新作用機(jī)制的抗結(jié)核菌藥物上市,雖然最近幾年人們加大了研制抗結(jié)核菌藥物的投入,但是研制出的新藥不多。目前臨床上所用的抗結(jié)核菌藥物仍然是幾十年前開(kāi)發(fā)的,并且隨著結(jié)核桿菌耐藥情況的日益加重,許多藥物的抗菌效果不斷下降。另外,世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的治療結(jié)核病的療程為6~9個(gè)月,有的患者可能需要更長(zhǎng)療程,這就使得患者的用藥依從性差,而依從性差不但使得患者的療程更長(zhǎng),更嚴(yán)重的是可能導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性,使疾病發(fā)展成為耐藥性結(jié)核,更加難以治愈。這就迫使人們?cè)陂_(kāi)發(fā)新藥的同時(shí),對(duì)現(xiàn)在應(yīng)用的抗結(jié)核菌藥物進(jìn)行劑型改造,以期解決目前這種危急狀況,其中對(duì)于攜帶抗結(jié)核菌藥物微球和納米粒制劑的研究是一個(gè)重點(diǎn)。本文根據(jù)文獻(xiàn),綜述了抗巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌藥物微球制劑的研究進(jìn)展情況,現(xiàn)介紹如下。

    1 抗巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌藥物微球制劑的優(yōu)點(diǎn)

    導(dǎo)致結(jié)核病久治不愈的主要原因之一就是結(jié)核菌被巨噬細(xì)胞吞噬后,將巨噬細(xì)胞作為宿主,并在其中存活、生長(zhǎng)。而要想殺死這些細(xì)菌,抗結(jié)核菌藥物必須能滲透入巨噬細(xì)胞,并達(dá)到足夠的量,才能有效地殺滅這些細(xì)菌。莫西沙星、氧氟沙星對(duì)培養(yǎng)基中結(jié)核菌H37Rv的最小抑菌濃度(MIC)均為0.5mg·L-1,而對(duì)J774A.1(巨噬細(xì)胞編號(hào))小鼠巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌的MIC分別為1.0、2.0mg·L-1,后者是前者的2~4倍[2]。導(dǎo)致這種結(jié)果出現(xiàn)的原因至少可部分解釋為二者滲透進(jìn)入巨噬細(xì)胞的能力有差異,所以在某種程度上可以說(shuō)巨噬細(xì)胞為結(jié)核桿菌提供了一個(gè)保護(hù)作用。

    微球制劑的出現(xiàn)為解決這一問(wèn)題提供了有效的途徑。目前制作微球一般采用的生物可降解材料如聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、羥基乙酸共聚物(PGA)、乳酸共聚物(PLA)等,微球進(jìn)入巨噬細(xì)胞后,主要集聚在吞噬溶酶體內(nèi),然后降解[3]并將其攜帶的藥物釋放出來(lái),發(fā)揮抗結(jié)核作用。經(jīng)過(guò)這樣處理的藥物往往能主動(dòng)地被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬,在巨噬細(xì)胞中聚集,產(chǎn)生高于MIC幾倍甚至幾十倍的藥物濃度[4],對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的藥物敏感性結(jié)核桿菌、甚至耐藥性結(jié)核桿菌起到殺滅作用。另外,藥物從微球或納米粒中的釋放可以達(dá)數(shù)天[5],這對(duì)減少抗結(jié)核菌藥物給藥次數(shù)、解決治療結(jié)核病的另外一個(gè)難題即提高患者的用藥依從性提供了可能。

    微球的另一個(gè)特性就是其粒徑較小,使其可以用于肺部吸入給藥。研究[6,7]表明,微球經(jīng)肺部吸入后,與原料藥相比,一方面使得支氣管巨噬細(xì)胞內(nèi)藥物濃度增加了30多倍,另一方面這種局部給藥的方式可以降低血及肝臟中藥物的濃度,從而降低了藥物的全身不良反應(yīng),尤其是肝臟毒性。

    2 幾種抗結(jié)核菌藥物微球制劑的研究進(jìn)展

    常用于抗結(jié)核菌的藥物中有部分可以自由進(jìn)出巨噬細(xì)胞,如異煙肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇等,其他藥物如利福平、氧氟沙星、莫西沙星、卡介菌、重組結(jié)核菌抗原等一些藥物不易進(jìn)出巨噬細(xì)胞,所以現(xiàn)在的研究主要集中在后幾類(lèi)藥品。這幾種藥物的微球制劑雖然目前還沒(méi)有上市,但是前期研究已表明其對(duì)于攜帶藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞前景較好,將其進(jìn)展情況介紹如下。

    2.1 利福平微球

    利福平是當(dāng)前臨床抗結(jié)核菌病的一線用藥,殺菌作用強(qiáng),在液體培養(yǎng)基中對(duì)結(jié)核菌H37Rv的MIC達(dá)到0.05~0.1μg·mL-1,在固體培養(yǎng)基中為0.25μg·mL-1,可以滲透進(jìn)入巨噬細(xì)胞而發(fā)揮殺菌作用。但是隨著耐藥菌株的不斷出現(xiàn),利福平的耐藥情況不斷惡化。在2000年全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)的抽樣調(diào)查中顯示,我國(guó)利福平的耐藥率達(dá)到30%[8]。為增強(qiáng)利福平的殺菌作用,同時(shí)也為了克服細(xì)菌對(duì)利福平的耐藥問(wèn)題,有必要對(duì)利福平進(jìn)行制劑改造,以提高利福平滲透進(jìn)入巨噬細(xì)胞的能力。

    2.1.1 利福平微球的直徑對(duì)于巨噬細(xì)胞攝入微球量的影響[4,9]。有研究[4]利用微球技術(shù)將利福平包裹起來(lái),以期提高進(jìn)入巨噬細(xì)胞的藥物含量,并對(duì)微球的理化性質(zhì)進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)了攜帶藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞最適合的條件,認(rèn)為微球的直徑對(duì)于提高支氣管巨噬細(xì)胞吞噬微球的能力起決定作用;而制備微球材料的分子量及其在微球中所占的比例則相對(duì)影響較小,但后二者對(duì)于微球攜帶利福平的效率和藥物在巨噬細(xì)胞內(nèi)從微球的釋放起關(guān)鍵作用。研究結(jié)果表明,直徑為3.5μm的微球進(jìn)入巨噬細(xì)胞的能力最強(qiáng),有80%的巨噬細(xì)胞吞噬了微球;而直徑為6~10μm的微球,只有40%~60%的巨噬細(xì)胞吞噬了微球。這與Hirota等[10]的研究結(jié)果類(lèi)似。當(dāng)細(xì)胞個(gè)數(shù)與微球的數(shù)量比例一定時(shí),吞噬直徑為3μm微球的巨噬細(xì)胞的數(shù)量是吞噬直徑為6~10μm微球的細(xì)胞個(gè)數(shù)的3倍。但二者的研究[4,10]結(jié)果有所不同,Hirota等研究中吞噬直徑為1μm微球細(xì)胞個(gè)數(shù)大于吞噬直徑為3μm微球的細(xì)胞個(gè)數(shù),說(shuō)明微球直徑越小,越容易被吞噬。但由于直徑3μm的微球攜帶藥物的量較大,并且能夠進(jìn)入大部分巨噬細(xì)胞,所以選擇直徑3μm的微球?yàn)樽罴褩l件。這類(lèi)微球適宜于肺部直接噴霧給藥,可以起到局部用藥在局部產(chǎn)生較高濃度的效果。

    2.1.2 利福平微球的體外殺菌效果[4]。按照上述條件制備的微球(利福平含量為14mg·L-1)與巨噬細(xì)胞共同孵化4h后,測(cè)得巨噬細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度為3.5mg·L-1,此濃度是對(duì)利福平敏感的結(jié)核桿菌MIC的70倍,而普通利福平進(jìn)入巨噬細(xì)胞的量幾乎檢測(cè)不到。Hirota等[11]的研究結(jié)果類(lèi)似,分別將2.5mg·L-1的利福平微球和5μg·mL-1的利福平溶液與巨噬細(xì)胞共同孵化7d后,前者所得巨噬細(xì)胞內(nèi)利福平的含量反而是后者的10倍。

    在一項(xiàng)考察體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞內(nèi)殺菌效果的研究中表明,相同劑量的利福平微球(按利福平計(jì)算14mg·L-1)7d時(shí)能清除90%的結(jié)核菌,14d時(shí)的細(xì)菌清除率達(dá)到99%,而利福平溶液殺菌效果不明顯;只有當(dāng)利福平溶液濃度為100mg·L-1時(shí)能清除90%的細(xì)菌,表明利福平溶液對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核菌的殺菌效果僅為利福平微球的10%。

    2.1.3 利福平微球的體內(nèi)殺菌活性。Yoshida等[4]的研究結(jié)果表明,利福平微球的體內(nèi)活性與利福平溶液相比,雖然可降低肺內(nèi)活菌計(jì)數(shù),但并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能與給藥方式有關(guān),研究者采用噴霧的方式給藥,由于直徑3μm的藥物微球顆粒太小,極易隨氣體呼出體外所致。而Suarez等[12]用氣管插管的方式分別給予利福平微球和利福平溶液發(fā)現(xiàn),利福平微球與利福平溶液組相比,肺內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)顯示有明顯差異。

    2.2 莫西沙星微球

    莫西沙星是最近應(yīng)用于臨床的抗耐藥結(jié)核菌藥物,是喹諾酮類(lèi)藥物中抗結(jié)核作用最強(qiáng)的,其殺菌作用幾乎等同于利福平。但是莫西沙星只能部分進(jìn)入巨噬細(xì)胞[2],為了增強(qiáng)其細(xì)胞內(nèi)抗結(jié)核作用并減少給藥次數(shù),Kisich等[13]對(duì)攜帶莫西沙星微球(PBCA-MOX)的療效進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,PBCAMOX在巨噬細(xì)胞中聚集的量幾乎是莫西沙星溶液的3倍,對(duì)于結(jié)核菌的MIC比莫西沙星溶液降低了10倍,并且在巨噬細(xì)胞中存在的時(shí)間長(zhǎng)6倍。由此可以看出,制作成微球后能提高莫西沙星巨噬細(xì)胞內(nèi)殺滅結(jié)核菌的能力,并且能達(dá)到一個(gè)緩釋作用。

    2.3 氧氟沙星微球[14]

    氧氟沙星是喹諾酮類(lèi)中最早用于治療耐藥性結(jié)核菌病(MDR-TB)的二線藥物,但與莫西沙星類(lèi)似,在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),只有大約50%的藥物能夠進(jìn)入巨噬細(xì)胞;當(dāng)以微球?yàn)檩d體時(shí),巨噬細(xì)胞對(duì)氧氟沙星的攝入量提高了1.7~2.1倍。動(dòng)物體內(nèi)研究表明,與口服、靜脈給予氧氟沙星溶液相比,其藥-時(shí)曲線下面積(AUC)/90%菌株最低抑菌濃度(MIC90)分別增加了10.9和9.3倍。AUC/MIC90可代表喹諾酮類(lèi)藥物的殺菌效果,所以氧氟沙星制成微球制劑后,其抗結(jié)核菌的作用得到了明顯提高。

    2.4 含多種藥物微球

    由于抗結(jié)核菌病的治療需要多種藥物聯(lián)合使用,以減少耐藥的發(fā)生和提高療效,故有研究者將2種(異煙肼和利福平)或3種(異煙肼、利福平和乙胺丁醇)藥物同時(shí)包裹于微球中[15]。無(wú)論從藥物的AUC,還是體內(nèi)、外抗菌效果方面都得以較大提高,且不會(huì)增加藥物毒性[16];而且即使降低微球中藥物劑量至常用劑量的2/3,其在動(dòng)物體內(nèi)的療效也沒(méi)有降低[17]。從這些微球的粒徑(平均為1.88μm)來(lái)看,其具備被巨噬細(xì)胞吞噬的條件,但這些微球是否能夠進(jìn)入巨噬細(xì)胞有待于進(jìn)一步證實(shí)。

    2.5 卡介苗和重組結(jié)核菌抗原微球

    在結(jié)核病的預(yù)防和治療中,卡介苗和重組結(jié)核菌抗原占有重要的地位,經(jīng)非口服給藥后,其可能通過(guò)刺激人體免疫系統(tǒng)降低肺部細(xì)菌量以及減輕肺部病變[18]。但是這些疫苗屬于蛋白類(lèi)物質(zhì),在血液中轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)極易受到體內(nèi)一些酶及巨噬細(xì)胞破壞,所以如果能經(jīng)肺部給藥,一方面可以直接到達(dá)作用部位,減少破壞;另一方面,肺部是結(jié)核桿菌感染的基本部位,肺部巨噬細(xì)胞是結(jié)核桿菌的第1個(gè)宿主[19],故肺部給藥將能較好地發(fā)揮這類(lèi)藥物的作用。

    將重組結(jié)核菌抗原TB10.4-Ag85B包裹進(jìn)入微球后,經(jīng)噴霧給藥,與原溶液相比更能刺激T淋巴細(xì)胞分泌白介素2[20],顯示其更好地刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)的能力。

    3 結(jié)語(yǔ)

    目前結(jié)核病的治療對(duì)醫(yī)務(wù)工作者而言依然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn),尤其是當(dāng)結(jié)核菌“躲入”巨噬細(xì)胞內(nèi)時(shí)可呈現(xiàn)出休眠狀態(tài)。這種休眠狀態(tài)的結(jié)核菌很難徹底清除,并可能導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。而微球制劑能夠增加藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞的量[21],增強(qiáng)藥物的療效;并且這種制劑的緩釋特性,可以減少患者服藥次數(shù),提高患者的用藥依從性,從而降低耐藥率的發(fā)生。故以微球?yàn)檩d體進(jìn)行抗結(jié)核菌藥物的輸送,為結(jié)核病的治療提供了一種較好的選擇。

    [1] Vergne I,Chua J,Deretic V.Tuberculosis toxin blocking phagosome maturation inhibits a novel Ca2+/calmodulin-PI3K hVPSE34cascade[J].J Exp Med,2003,198(4):653.

    [2] Shandil RK,Jayaram R,Kaur P,et al.Moxifloxacin,ofloxacin,sparfloxacin and ciprofloxacin against mycobacterium tuberculosis:evaluation of in vitro and pharmacodynamics indices that best predict in vivo efficacy[J].Antimicrob Agents Chemther,2007,51(2):576.

    [3] Onoshita T,Shimizu Y,Yamaya N,et al.The behavior of PLGA microspheres containing rifampicin in alveolar macrophages[J].Colloids Surf B Biointerfaces,2010,76(1):151.

    [4]Yoshida A,Matumoto M,Hshizume H,et al.Selective delivery of rifampicin incorporated into poly(DL-lactic-glycolic)acid microspheres after phagocytotic uptake by alveolar macrophages,and the killing effect against intracellular mycobacterium bovis Calmette-Guerin[J].Microbes Infect,2006,8(9-10):2484.

    [5] Zahoor A,Rajesh P,Sadhna S,et al.Novel chemotherapy for tuberculosis:chemotherapeutic potential of econazole-and moxifloxacin-loaded PLG nanoparticles[J].Int J Antimicrobial Agents,2008,31(2):142.

    [6] Takenaga M,Ohta Y,Tokura Y,et al.Lipid microsphere formulation containing rifampicin targets alveolar macrophages[J].Drug Dilivery,2008,15(3):169.

    [7] Pandey R,Sharma S,Khuller GK.Chemotherapy efficacy of nanoparticle encapsulated antituberculosis drugs[J].Drug Deliv,2006,13(4):287.

    [8] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.2000年全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查材料匯編[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:3-4.

    [9]Makino K,Nakajima T,Shikamura M,et al.Efficient intracellular delivery of rifampicin to alveolae macrophages using rifampicin-loaded PLGA micropheres:effects of molecular weight and composition of PLGA on release of rifampicin[J].Colloids Surf B Biointerfaces,2004,36(1):35.

    [10] Hirota K,Hasegawa T,Hinata H,et al.Optimum conditionsforefficientphagocytosisofrifampicin-loaded PLGA microspheres by alveolar macrophages[J].J Control Release,2007,119(1):69.

    [11] Hirota K,Hasegawa T,Nakajima T,et al.Delivery of rifampicin-PLGA microspheres into alveolar macrophages is promising for treatment of tuberculosis[J].J Control Release,2010,142(3):339.

    [12] Suarez S,O’Hara P,Kazantseva M,et al.Respirable PLGA microspheres containing rifampicin for the treatment of tuberculosis:screening in an infectious disease model[J].Pharm Res,2001,18(9):1315.

    [13] Kisich KO,Gelperina S,Higgins MP,et al.Encapsulation of moxifloxacin within poly(butyl cyanoacrylate)nanoparticles enhances efficacy against intracellular Mycobacterium tuberculosis[J].Int J Pharm,2007,345(1-2):154.

    [14]Hwang SM,Kim DD,Chung SJ,et al.Delivery of ofloxacin to the lung and alveolar macrophages via hyaluronan microspheres for the treatment of tuberculosis[J].J Control Release,2008,129(2):100.

    [15] Pandey R,Sharma S,Khuller GK.Oral solid lipid nanoparticle-based antitubercular chemotherapy[J].Tuberculosis(Edinb),2005,85(5-6):415.

    [16] Pandey R,Sharma S,Khuller GK.Oral Poly(DL-lactideco-glycolide)nanoparticle based antituberculosis drug delivery:toxicological and chemotherapeutic implications[J].Indian J Exp Biol,2006,44(6):459.

    [17] Pandey R,Zahoor A,Sharma S,et al.Nanoparticle encapsulated antitubercular drugs as a potential oral drug delivery system against murine tuberculosis[J].Tuberculosis(Edinb),2003,83(6):373.

    [18] Garcia-Contreras L,Wong YL,Muttil P,et al.Immunization by a bacterial aerosol[J].Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(12):4656.

    [19] Skeiky YA,Sadoff JC.Advances in tuberculosis vaccine strategies[J].Nat Rev Microbiol,2006,4(6):469.

    [20] Shi S,Hickey AJ.PLGA microparticles in respirable sizes enhance an in vitro T cell response to recombinant Mycobacterium tuberculosis antigen TB10.4-Ag85B[J].Pharm Res,2010,27(2):350.

    [21] Hirota K,Hasegawa T,Nakajima T,et al.Phagostimulatory effect of uptake of PLGA microspheres loaded with rifampicin on alveolar macrophages[J].Colloids Surf B Biointerfaces,2011,87(2):293.

    R978.3

    A

    1001-0408(2012)33-3152-03

    DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.33.33

    2011-09-22

    2011-11-14)

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