芻議病毒感染免疫檢驗的研究進(jìn)展

董 波 郭家香

貴州省黔西縣中心醫(yī)院檢驗科，貴州黔西 551500

1 病毒引起的免疫性損害與機(jī)制

病毒能夠長期存在于宿主的細(xì)胞內(nèi)，是一類嚴(yán)格寄生在細(xì)胞內(nèi)的微小生物，它能夠?qū)е滤拗骷?xì)胞的功能性損害，造成機(jī)體的免疫功能受到抑制，造成機(jī)體出現(xiàn)免疫病理變化。①免疫抑制。病毒抑制宿主的免疫機(jī)制是通過感染免疫細(xì)胞，使免疫分子的表達(dá)下調(diào)，降低了免疫分子在血清中的濃度，以此降低了機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。②免疫損害。病毒感染導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)病理性免疫應(yīng)答，作用于非免疫應(yīng)答器官或組織就會引起免疫損傷，造成組織或器官的損害。

病毒感染造成免疫損害的機(jī)制有很多，主要有下列幾種：①病毒感染引起免疫系統(tǒng)的抑制導(dǎo)致病毒在宿主體內(nèi)成慢性感染和多重感染。②病毒編碼的蛋白質(zhì)表達(dá)在細(xì)胞膜上通過依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用和補(bǔ)體的激活，增強(qiáng)殺傷感染細(xì)胞的能力。特異性的CTL也能識別這些膜抗原，增強(qiáng)靶細(xì)胞的殺傷作用。③病毒抗原與抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，在具有路過功能的基膜及血流相對緩慢的部位沉積下來引起相應(yīng)部位出項損害。④機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)過程，激活相應(yīng)的補(bǔ)體，直接引起相應(yīng)的細(xì)胞損傷引起炎癥反應(yīng)。⑤由于交叉免疫反應(yīng)會導(dǎo)致與病毒具有相同抗原表位的細(xì)胞或組織、器官在機(jī)體的免疫應(yīng)答中受到免疫分子的作用而引起損害。

2 早期病毒檢驗方法

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗又稱ELISA試驗，是將免疫反應(yīng)的特異性和催化作用結(jié)合在一起的一種分析試驗，是運(yùn)用已知的抗體或者抗原吸附在反應(yīng)平板上，是酶標(biāo)抗原抗體反應(yīng)在放應(yīng)平板表面上進(jìn)行，常用的方法有雙抗夾心法、間接吸附試驗。其中雙抗夾心法是病毒早期的免疫學(xué)檢驗中最常用的方法，在病毒檢驗方面，酶聯(lián)免疫吸附實驗是檢驗豬偽狂犬病、藍(lán)舌病的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法。

2.2 免疫熒光試驗

免疫熒光試驗是一種免疫標(biāo)記技術(shù)，將熒光素由于已知抗體結(jié)合形成熒光抗體，用于對待檢抗原的檢查，將反應(yīng)后的抗原抗體復(fù)合物置于熒光顯微鏡下觀察，散發(fā)出相應(yīng)的熒光，借此對待見標(biāo)本中的抗原種類進(jìn)行鑒定和判斷。免疫熒光試驗也可以將熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合，用于抗體的檢測和定位。免疫熒光試驗具有高度的特異性、高效性和靈敏性，但檢測結(jié)果客觀性不強(qiáng)，技術(shù)過于復(fù)雜。

2.3 血細(xì)胞凝集試驗

血細(xì)胞凝集試驗是指血細(xì)胞有凝集的現(xiàn)象，由病毒感染引起的血細(xì)胞凝集試驗指的是血細(xì)胞表面有針對各種抗原的受體，當(dāng)機(jī)體感染病毒以后，病毒表面的抗原與紅細(xì)胞表面的抗原受體結(jié)合，是血細(xì)胞沉降率增強(qiáng)，形成凝集的現(xiàn)象。這種方法可以定性定量檢測病毒。如果機(jī)體內(nèi)存在抗病毒的抗體，那么病毒引起的血細(xì)胞凝集現(xiàn)象就會受到抑制，可用于病毒的檢出，血凝抑制試驗就是根據(jù)這種病毒凝聚紅細(xì)胞的能力和對相應(yīng)抗體的抑制的特性設(shè)計的。血細(xì)胞凝集試驗一般用于檢測梅毒螺旋體等病毒，這種方法只能確診梅毒患者，對于其他病毒的檢測此種方法是不行的。

2.3 放射免疫技術(shù)

這種檢驗方法源自于1960年的一位德國科學(xué)家創(chuàng)造的放射免疫分析技術(shù)，是運(yùn)用被同位素標(biāo)記和未被標(biāo)記的抗原與抗體之間產(chǎn)生競爭性抑制的方法，在體外微量性分析。放射免疫技術(shù)具有靈敏度高、簡便性、特異性等優(yōu)點。但由于檢測時有放射性物質(zhì)而對研究者身體具有一定的影響，檢測結(jié)果中可能會出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，容易受到外界環(huán)境因素的影響而使檢測結(jié)果出現(xiàn)異常。就目前來看放射性免疫檢查技術(shù)主要用于對乙型肝炎病毒的分類鑒定。

2.4 中和實驗法

中和試驗有叫做標(biāo)準(zhǔn)試驗法，主要檢驗法有固定血清-稀釋病毒法和固定病毒-血清稀釋法兩種。它以檢測病毒的感染力為要特點的一種檢測手段，以病毒受到血清中和后的殘留感染力為標(biāo)準(zhǔn)來判定該免疫血清抑制病毒的擴(kuò)散能力，臨床上主要用于分析病毒的抗原性和堅定病毒的類型。

2.5 免疫電泳法

免疫電泳法是利用抗原抗體的帶電性的原理，在外界環(huán)境下給予一個電場，通過觀察各種帶點的物質(zhì)的運(yùn)動速度和數(shù)量等情況，來判斷抗原抗體的中來以此來鑒別病毒種類的方法。

2.6 其他檢測方法

除了上述所說的檢測方法以外，鑒別病毒引起感染的方法也有很多，比如沉淀法，擴(kuò)散法等技術(shù)，在病毒感染檢驗中也起到了一定的作用。

3 現(xiàn)代新興病毒感染免疫檢驗技術(shù)

3.1 重組免疫實驗

重組免疫試驗主要用于HIV抗體的檢測和HCV抗體的檢測中，HCV抗原的成分十分復(fù)雜，主要有特異性的非結(jié)構(gòu)性抗原、結(jié)構(gòu)性抗原和核心抗原。這種檢驗方法比酶聯(lián)免疫吸附試驗的比優(yōu)越性體現(xiàn)在它是將各種抗原橫線式結(jié)合在硝酸、纖維素膜的橫條上，放置于長條凹槽反應(yīng)盤中，加底物顯色后能夠提示血清中存在有針對性的抗原。此外這在臨床上檢測口蹄疫的病毒中也有相關(guān)資料記載。

3.2 發(fā)光免疫試驗

發(fā)光免疫實驗室一種將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)與機(jī)體免疫反應(yīng)結(jié)合在一起的運(yùn)用光反應(yīng)來表示待測物質(zhì)的免疫成分和濃度，是一種超微量分析、無放射性的新檢驗方法，隨著技術(shù)的發(fā)展，逐漸成熟的發(fā)光免疫試驗?zāi)軌驒z測所有傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附實驗和免疫熒光標(biāo)記實驗的測定項目，它具有更突出的特異性和靈敏性。這種方法是可利用放光劑作為標(biāo)記物在安全可行的環(huán)境中進(jìn)行檢測的，以此這種技術(shù)是無害無毒的安全的檢測手段，且這種檢測無需花費很長的時間，在很短的時間內(nèi)就能檢測完，這在一定程度上迎合了臨床檢測的需要，在現(xiàn)代化病毒檢測手段中具有良好的發(fā)展前景。

3.3 膠體金技術(shù)

膠體金技術(shù)是運(yùn)用膠體金作為標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)中的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)膠體金是有氯金酸在還原劑的作用下聚集形成較小的金顆粒，可與蛋白質(zhì)結(jié)合且比影響蛋白質(zhì)的生物藥性。此外它還可以與其他多種生物分子結(jié)合形成特定的物理反應(yīng)，因此這種檢驗技術(shù)主要用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)等領(lǐng)域的檢驗中。該項技術(shù)具有特異性、簡便性、敏感性、安全性等優(yōu)點，因此在臨床上用于HIV的篩查和人體血清甲胎蛋白的檢驗。

4 討論

病毒性感染是由病毒侵犯人體，在人體的細(xì)胞內(nèi)寄生，使人體免疫力低下引起相應(yīng)的免疫損害癥狀，其損害宿主的途徑有很多，可以使降低免疫功能導(dǎo)致機(jī)體重復(fù)感染和慢性感染；也可以通過激活補(bǔ)體、ADCC效應(yīng)和CTL途徑導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)損害。由于病毒是嚴(yán)格寄生在細(xì)胞內(nèi)的，繁殖速度極快，變異的幾率極高，在臨床上僅僅依靠傳統(tǒng)的檢驗方法是不能滿足臨床診斷需求的，因此在技術(shù)的發(fā)展過程中，我們需要更加有優(yōu)勢的檢驗方法來對病毒性感染進(jìn)行更加準(zhǔn)確的檢驗。

免疫檢驗法是通過機(jī)體感染病毒后引起的免疫應(yīng)答機(jī)理，運(yùn)用免疫細(xì)胞的數(shù)量和發(fā)揮的功能來做出判斷的。隨著現(xiàn)代生物科技的迅速發(fā)展，傳統(tǒng)的許多檢驗技術(shù)逐漸被新興的檢驗技術(shù)所取代，許多效能高、安全可靠、特異簡便的技術(shù)逐漸為人們所接受，盡管如此，病毒感染的檢驗仍然存在很多的問題，這些問題的根源在于個體的差異性和生物學(xué)差異性。除此以外，操作人員的技術(shù)性和方法性也會存在一定的影響，從主觀上講，技術(shù)人員的不正當(dāng)測量方式，實驗室混亂的秩序，試驗底物濃度超標(biāo)或無效性，錯誤地引入抑制因子等都會造成檢驗結(jié)果的較大偏差；從客觀上說，選取標(biāo)本的時間、標(biāo)本的來源、使用方法的不當(dāng)、底物缺乏特異性等因素也會造成檢驗結(jié)果出現(xiàn)較大的誤差。正是因為各種因素對檢驗結(jié)果的影響，使檢驗中可能會出現(xiàn)假陽性的情況，這對于病毒感染引起的免疫學(xué)檢驗有一定的檢驗影響，因此，在對由病毒引起的免疫檢查中要有一個更加客觀的判定標(biāo)準(zhǔn)與認(rèn)識。

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