白芍提取物中芍藥苷反相高效液相色譜法測定的含量分析

劉志娟

（永興縣人民醫(yī)院，湖南 郴州 423300）

白芍提取物中芍藥苷反相高效液相色譜法測定的含量分析

劉志娟

（永興縣人民醫(yī)院，湖南 郴州 423300）

目的 研究白芍提取物中芍藥苷反相高效液相色譜法測定的含量分析。方法 在特定的條件下進(jìn)行采用反相高效液相色譜法進(jìn)行生白芍、酒白芍、炒白芍、醋白芍等白芍提取中芍藥苷的含量分析。結(jié)果 反相高效液相色譜法測定的含量分析后含量最高的是生白芍，其次是酒白芍同芍藥片的含量，最少的是醋白芍及炒白芍含量，其中RSD的變化大致相同。結(jié)論 采用反相高效液相色譜法測定白芍提取物中芍藥苷的含量，具有準(zhǔn)確、方便、簡單、安全的優(yōu)點(diǎn)，適宜使用及推廣，更能有利的對(duì)白芍制藥的方法進(jìn)行測定。

白芍提取物；芍藥苷；反相高效液相色譜法；含量分析

白芍是中藥中一種具有很強(qiáng)的補(bǔ)血功效，還有斂陰養(yǎng)血、柔肝祛痛、平抑肝陽、提高免疫等作用，較常用于肝陽上亢、肝陰不足、脾虛肝郁，血?dú)馓撊酢⒒蜓獰彡幪?、盜汗、失血等癥[2]。芍藥苷為中藥芍藥主要發(fā)揮作用的成分。依據(jù)國內(nèi)外研究報(bào)道，證明芍藥提取物中，芍藥苷的主要作用為增強(qiáng)自由基修復(fù)及抗損傷，抵抗神經(jīng)毒性損害及調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量等作用，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有預(yù)防血小板聚集、血液黏度下降、調(diào)節(jié)微血管循環(huán)、增加血管擴(kuò)張及抗氧化能力、預(yù)防及治療驚厥等功效?，F(xiàn)經(jīng)醫(yī)學(xué)專家的深入研究證明，其具有良好的保護(hù)神經(jīng)作用。

中醫(yī)中藥是我國發(fā)展的特色性的疾病治療方法，在我國也得到了很深入的研究，中藥天然物利用其特有的功能進(jìn)行疾病的治療和預(yù)防，其生長環(huán)境的差異及生長溫度的不同，采摘及制作工序、制作方法的差異等各種原因影響，都會(huì)導(dǎo)致其療效和作用產(chǎn)生顯著的差異。進(jìn)行不同產(chǎn)地及品種的藥效控制相同是非常困難的。所以，進(jìn)行中藥提取物的含量深入的研究及探索為現(xiàn)代中醫(yī)藥學(xué)的主要發(fā)展方向之一，準(zhǔn)確的控制中藥提取物中的有效含量，也是中藥現(xiàn)代化研究的重要方法。在近些年的《中國藥典》中僅進(jìn)行少量中藥品種，提取物及其含量的研制方式、方法。其浸膏及流浸膏僅僅應(yīng)用了滲漉的方式制備。但使用滲漉方法進(jìn)行中藥的制備操作復(fù)雜、消耗時(shí)間長，浪費(fèi)較多的溶劑。為求更好的制備方法，本文選取對(duì)不同的白芍中藥制劑，使用煎煮的方法，依據(jù)流浸膏的制備過程進(jìn)行制備白芍的提取物。并根據(jù)相關(guān)的研究，制定高效液相色譜法檢測白芍提取物中的主要有效成分芍藥苷的含量控制定量方法，已達(dá)到白芍提取物的含量精準(zhǔn)的控制。實(shí)驗(yàn)研究證明，此方法具有簡單、迅速、精密度高，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 儀器及材料

選用島津液LC2010高效相色譜儀，Agilent色譜工作站，頻率25kHz的KQ2200DA型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品）[1]。

1.1.2 材料選用

芍藥苷對(duì)照購自中國藥品生物制品檢定所，（批號(hào)為110736-20933）。色譜純甲醇（美國Tedia試劑公司）；水為重蒸餾去離子水。生白芍選取（天津飲片廠生產(chǎn)），白芍的泡制品（按照天津市中藥飲片泡制規(guī)范自制產(chǎn)品）[3]。

1.2 方法

1.2.1 白芍炮制方法

酒白芍：清水洗凈后浸泡2d，按照1∶10的比例，用10kg黃酒，噴灑在100kg的白芍片上，攪拌均勻，浸潤浸透，后曬干。將麩皮炒熱同白芍片一起炒，直至稍有發(fā)黃，并有香味散發(fā)，使用篩子篩干凈麩皮即可。醋白芍制作：依據(jù)2∶10的比例，使用米醋20kg，噴灑在100kg，的白芍片上，攪拌均勻，浸潤浸透，后 采用文火進(jìn)行炒干放涼即可。炒白芍：將麩皮先放入鍋中炒熱，后同白芍片一起炒，直至稍有發(fā)黃，并有焦斑時(shí)，使用篩子篩干凈麩皮即可。

1.2.2 色譜的條件

色譜柱為：Aichrom Bond-AQ C18（150mm×4.6mm），流動(dòng)相：乙醇0.1%，磷酸溶液（14∶86）。柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL，流速1.0mL/min。理論板數(shù)按照芍藥峰約4000。

1.2.3 白芍提取物的制作方法

在制作完成的白芍飲片制品中，各取0.1g，放置在真空干燥箱內(nèi)溫度設(shè)置在80℃，之后放涼，取出放置在容量為50mL的燒杯內(nèi)，注入乙醇溶液稀釋到指定的濃度，搖勻靜置后取上清液，使用微孔膜過濾，配制成1.0mg/mL的乙醇溶液，作為實(shí)驗(yàn)使用的溶液。主要成分為乙醇、芍藥苷。

取對(duì)照品的芍藥苷適量，精準(zhǔn)稱量，使用甲醇定容到5mL燒杯內(nèi)，攪拌均勻，制成1.0mg/mL的溶液，即為對(duì)照品甲醇溶液。主要成分：甲醇、芍藥苷。

1.2.4 芍藥苷檢測方法

采用對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液10μL，輸入液相色譜儀內(nèi)，依據(jù)色譜的條件測定，樣品的含量依據(jù)干燥品的計(jì)算方法計(jì)算，采用外標(biāo)法進(jìn)行芍藥苷的含量計(jì)算。另外本品還采用超聲的方法進(jìn)行了檢測。

2 結(jié) 果

反相高效液相色譜法測定的含量分析后含量最高的是生白芍，其次是酒白芍同芍藥片的含量，最少的是醋白芍及炒白芍含量，其中RSD的變化大致相同，詳見表1。超聲的檢測方法檢測的芍藥苷的含量測定同反相高效液相色譜法測定的含量無明顯差別。

表1 不同種類的白芍藥材中芍藥苷的含量測定

3 討 論

中藥含量的精準(zhǔn)控制一直以來成為困擾中藥學(xué)研究的重大難題，是嚴(yán)重影響中醫(yī)藥學(xué)的現(xiàn)代化進(jìn)步發(fā)展嚴(yán)重的障礙。中藥學(xué)專家教授研究，采用多種方法盡量進(jìn)行控制中藥中有效成分的含量，最主要性的操作及控制技術(shù)，難關(guān)還沒有得到解決，沒有顯著的進(jìn)展和提高。近些年來，進(jìn)行中藥提取物的研究，中間產(chǎn)性物已經(jīng)成為中醫(yī)藥學(xué)的熱點(diǎn)研究，但還未取得解決問題的方法，例如單味藥的含量控制方法，進(jìn)行中藥方劑配伍中的成分相互的藥理功效及其機(jī)制、及怎樣從技術(shù)理論上，明確進(jìn)行表達(dá)等基本問題的處置。雖然也會(huì)有部分的研究報(bào)道，采用各種辦法進(jìn)行蒲公英、金銀花等中藥提取物中有效成分的含量控制研究，因?yàn)椴捎玫闹兴幉课徊煌?、產(chǎn)地及生長環(huán)境的差異等不同方面的問題，采用滲漉的制備方法不確定能進(jìn)行中藥中有效成分的完全性提?。桓挠糜袡C(jī)性溶劑，也僅能提取一部分的單一有效成分。本文的研究方法用水為試驗(yàn)溶劑，使用傳統(tǒng)的煎煮的方法，參照浸膏及流浸膏的過程進(jìn)行制備其提取物，供試驗(yàn)，不僅能提取現(xiàn)有明確的有效成分含量，還可以保持傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)理論中所提出的起綜合性作用的成分不會(huì)被丟失；不僅能延伸傳統(tǒng)的中醫(yī)藥學(xué)整體思維及預(yù)防完全性按化學(xué)成分對(duì)中藥進(jìn)行研究的弊端，還可以按中醫(yī)藥學(xué)理論最大限度的保證原始藥材的藥理功效性質(zhì)，尤其是用來控制單味的中藥含量的標(biāo)準(zhǔn)。

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonialactiflora Pall.的干燥根主要采挖的季節(jié)是春季和秋季，采挖后祛除頭尾和細(xì)根，放置于滾開的沸水中祛除外皮，或是去除外皮后進(jìn)行再煮后曬干。古代醫(yī)學(xué)者覺得生白芍的制備是原藥進(jìn)行去除后切片，可以生入藥，其主要功效有柔肝養(yǎng)血、滋陰平肝的療效。在西醫(yī)藥學(xué)研究認(rèn)為其主要功效是，鎮(zhèn)靜、安神、抗菌、退熱、止痛、抗驚厥、提高機(jī)體免疫力等。還具有減少胃酸的分泌、降低血小板聚集、預(yù)防血栓形成、保護(hù)肝臟的療效[4-5]。進(jìn)行加工炮制后的酒白芍是采用黃酒及白芍炮制而成，具有綜合寒性行散補(bǔ)中的療效；炒白芍以白芍及麩皮混合炒制而成具有和絡(luò)養(yǎng)血及止痛健脾的療效。中藥白芍藥中的主要有效成分為芍藥苷，其含有五沒食子酰葡萄糖、芍藥苷內(nèi)酯、沒子酸甲酯等，其具有良好的抗痙攣?zhàn)饔?。其主要用途是行?jīng)腹痛、月經(jīng)不調(diào)、崩漏、盜汗、自汗，其肝氣不和導(dǎo)致的腹痛、脅痛及手足抽搐疼痛，肝陽亢盛導(dǎo)致的眩暈、頭痛等癥[6]。本研究中反相高效液相色譜法測定的含量分析后含量最高的是生白芍，其次是酒白芍同芍藥片的含量，最少的是醋白芍及炒白芍含量，結(jié)果證明炮制的方法會(huì)對(duì)白芍提取物中的芍藥苷的有效成分含量存在一定的影響。

綜上所述，采用反相高效液相色譜法測定白芍提取物中芍藥苷的含量，具有準(zhǔn)確、方便、簡單、安全的優(yōu)點(diǎn)，適宜使用及推廣，更能有利的對(duì)白芍制藥的方法進(jìn)行測定。更能推動(dòng)中醫(yī)中藥的發(fā)展及進(jìn)步。

[1] 周德,王芳,文永蘭.白芍藥材中芍藥苷含量比[J].醫(yī)學(xué)信息,2011,24(5):2995.

[2] 莫可豐.白芍芍藥苷含量測定方法的研究[J].廣西中醫(yī)藥,2003,26(2):6-7.

[3] 劉浩.反相高效液相色譜法測定白芍提取物中芍藥苷的含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2010,21(9):2392-2393.

[4] 李越峰,楊武亮,沈菲,等.高效液相色譜測定白芍中芍藥苷的含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(2):438-439.

[5] 林康,劉放.芍藥及芍藥苷含量的研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2003,13(5):321-322.

[6] 劉磊,何再安.高效液相色譜法測定金銀花提取物中綠原酸的含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(6):1426.

R282.7

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1671-8194（2012）16-0084-02

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.031