EB病毒血清學(xué)檢測和EB病毒DNA定量檢測在診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥中的應(yīng)用價值

梁曾鳳 陶 佳

（1 廣東省廣州市番禺區(qū)鐘村醫(yī)院兒科，廣東 廣州 511495；2 廣州醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)院兒科，廣東 廣州 510120）

EB病毒血清學(xué)檢測和EB病毒DNA定量檢測在診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥中的應(yīng)用價值

梁曾鳳1陶 佳2*

（1 廣東省廣州市番禺區(qū)鐘村醫(yī)院兒科，廣東 廣州 511495；2 廣州醫(yī)學(xué)院附一醫(yī)院兒科，廣東 廣州 510120）

目的 探討EBV血清學(xué)檢測和EBV-DNA定量檢測診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）的應(yīng)用價值。方法 選取廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2010年1月至2011年4月期間78例診斷為IM的病例作為研究對象，使用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法檢測患者血清中EBV四項抗體，同時使用熒光定量PCR（FQ-PCR）檢測血漿中EBV-DNA負(fù)載量，對比兩組的檢測結(jié)果。結(jié)果 抗EBV-VCA-IgM抗體 陽性率93.6%，EBV-DNA陽性率為71.8%。結(jié)論 IM臨床診斷中抗EBV-VCA- IgM陽性率比同期血漿中EBV-DNA陽性率高，故不推薦對IM患者進(jìn)行常規(guī)EBV-DNA檢測，但對病程長，癥狀反復(fù)，病情重的患兒應(yīng)監(jiān)測血漿中EBV-DNA，有助于評估治療的效果及預(yù)后。

傳染性單核細(xì)胞增多癥；EB病毒抗體四項；EBV-DNA

EB病毒(EBV)是一類嗜人淋巴細(xì)胞病毒，屬于皰疹病毒的γ亞科，由Epstein、Barr等于1986年首次發(fā)現(xiàn)，EBV是一種比較容易感染的病毒，在正常人群中易感程度高，且大多數(shù)患者有血清學(xué)轉(zhuǎn)化[1]。我國對此的研究顯示，3～5歲兒童血清學(xué)陽性轉(zhuǎn)化率為80.7%～100%；10歲時可達(dá)100%。EBV的主要傳播途徑是通過唾液傳播，此外還可通過輸血傳染。BEV在人體內(nèi)只表達(dá)于潛伏感染相關(guān)聯(lián)的一些抗原，諸如EBNA-1、EBNA-3A等。但是患者機體免疫能力較低的話或在某些因素觸發(fā)條件下，身體內(nèi)潛伏的EV則可以再被激活，最終導(dǎo)致臨床發(fā)病[2]?，F(xiàn)報道如下。

表1 EB病毒四項抗體譜

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月至2011年4月廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院接收的78例診斷為IM的病例，所有病例的診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：其中男45例，女33 例，年齡2～17歲，平均年齡5.8歲。臨床表現(xiàn)：發(fā)熱76例，咽峽炎75例，頸部淋巴結(jié)腫大76例，肝腫大（＜4歲肝肋下＞2cm，＞4歲肋下可觸及）56例，脾腫大64例，皮疹18例，眼瞼浮腫33例，外周血異型淋巴細(xì)胞比例≥10%者18例，合并支氣管肺炎25例，上呼吸道感染13例，皮炎2例，血小板減少性紫癜3例，來診時病情最短3d，最長28d。

1.2 檢測方法

所有患兒入院第2天分別用促凝管和EDTA抗凝管抽取靜脈血2mL，EBV血清學(xué)檢測采用德國OUMENG公司的EBV抗體四項ELISA檢測試劑盒（VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG 和EBNA-1-IgG）；EBVDNA檢測采用達(dá)安基因股份有限公司的檢測試劑盒，使用TapMan熒光探針基因PCR擴增法。檢測方法參考試劑說明書。對VCA- IgM陰性患者，治療2周后復(fù)查抗體四項，對病程長，癥狀反復(fù)，治療效果不理想的，病情重的患兒3周后監(jiān)測血漿中EBV-DNA。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計數(shù)資料用卡方檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

EB病毒抗體檢測中，抗VCA-IgM陽性率93.6%。其血清中EBVDNA檢測的陽性率為71.8%。入院時VCA- IgM陰性者，治療2周后復(fù)查抗體四項，VCA- IgM陽轉(zhuǎn)率達(dá)95%。病程3周以上，癥狀反復(fù)，治療效果不好的，病情重的患兒復(fù)查血漿中EBV-DNA的負(fù)載量，發(fā)現(xiàn)EBV-DNA拷貝數(shù)仍＞1×103copies/mL。隨訪2例癥狀反復(fù)者，其中1例8個月后診斷為慢性活動性EB病毒感染，1例診斷為噬血細(xì)胞綜合征。EBV四項抗體譜見表1。EBV-DNA檢測結(jié)果見表2。兩組數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 EB-DNA負(fù)載量檢測結(jié)果（≥1×103copies/mL為陽性）

3 討 論

3.1 EBV血清抗體檢測

原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生抗衣殼抗原IgM和IgG(抗VCAIgM、抗VCA-IgG)；急性感染晚期，抗早期抗原IgG(抗EA-IgG)出現(xiàn)；恢復(fù)期晚期，抗核抗原IgG(抗EBNA-IgG)產(chǎn)生?？筕CA-IgG和抗EBNA-IgG可持續(xù)終身[4]。在EBV感染者體內(nèi)，抗EBV-VCA-IgM呈陽性歷來是臨床IM的診斷標(biāo)準(zhǔn)與參考依據(jù)，但是值得注意的是，EBV患者感染后的血清學(xué)反應(yīng)十分復(fù)雜，呈多樣化，另有一些病例中患者抗EBV-CA-IgM的產(chǎn)生延遲或長時間存在等不同表現(xiàn)，這為臨床IM的診治帶來一定的挑戰(zhàn)與難度。

3.2 EBV-DNA負(fù)載量檢測

EBV-DNA檢測一方面可以應(yīng)用于EBV攜帶者的低水平復(fù)制，此外，還可檢測EBV相關(guān)性疾病的活動性感染。對于EBV攜帶者而言，其淋巴細(xì)胞內(nèi)一般可能存在著較低水平的EBV-DNA載量，但是這些攜帶者的血漿或血清中則很少檢測到EBV-DNA。

對于EBV的臨床檢測方法目前有多種，Real-time PCR則是應(yīng)用最廣也是最主要的檢測方法，其具有特異性與高敏感性的特點。一般對于IM患者而言臨床不推薦使用EBV載亮檢測方法。IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達(dá)到峰值，隨后很快下降，病程22 d后，所有EBV-IM血清中均檢測不到EBV核酸。對于CAEBV患者而言，外周血中EBV的載量相比于潛伏感染的個體要顯著升高，外周血單個核細(xì)胞和血彩血清均被用來檢測EBV載量，但PMBC中EBV-DNA水平有助于CAEBV的診斷。絕大多數(shù)CAEBV患者的PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/txg DNA，而部分CAEBV患者的血清中對于EBV-DNA的檢測結(jié)果通常呈陰性，有研究表明，CAEBV患者血漿/血清中EBV-DNA水平與患者病情的嚴(yán)重與否和預(yù)后的情況密切相關(guān)。

3.3 總結(jié)

本研究表明EBV-DNA陽性率明顯低于EBV-VCA-IgM陽性率，可能與部分病例來診前已在院外抗病毒治療，或病程已超3周，導(dǎo)致EBV-IM患者血漿中檢測不到EBV核酸。故不推薦對IM患者進(jìn)行常規(guī)EBV-DNA檢測，但對病程長，癥狀反復(fù)，病情重的患兒則應(yīng)監(jiān)測血漿中EBV-DNA以有助于評估治療效果及預(yù)后轉(zhuǎn)歸。

[1] Wang PS,Evans AS.Prevalence of antibodies to Epstein-Barr virus and cytomegalovims in sera from a group of children in the People"s Republic of China[J].J Infect Dis,1986,153(1):150-152.

[2] 謝正德,申昆玲.重視兒童非腫瘤性EB病毒感染疾病的研究[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,31(2):55.

[3] Saus SE.The chronic mononucleosis syndrome[J].J Infect Dis,1988,157(3):405-412.

[4] Guuey ML,Tang WH.Laboratory Assays for Epstein-Barr Vires-Related Disease[J].J Mol Diagon,2008,4(2):279-292.

Serological detection of EB virus and EB virus DNA quantification assays in the diagnosis of infectious mononucleosis application

LIANG Zeng-feng1, TAO Jia2
1 Department of Pediatric, Panyu District Zhongcun Hospital, Guangzhou 511495, China; 2 the First Affliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510120, China

ObjectiveTo investigate the EBV serological detection and quantitative EBV-DNA assay for the diagnosis of infectious mononucleosis ( IM )application value.MethodsThe fi rst hospital of Guangzhou Medical College in 2010January -2011April78 cases were diagnosed as IM case as the research object, the use of enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) method for the detection of serum EBV four antibody, at the same time using fl uorescence quantitative PCR (FQ-PCR) were detected in the plasma of EBV-DNA load, comparing the two groups of test results.ResultsAnti EBV-VCA-IgM antibody positive rate was 93.6%, the positive rate of EBV-DNA was 71.8%.ConclusionIM clinical diagnosis of EBV-VCA - IgM positive rate than the same period in the plasma of EBV-DNA positive rate is high, it is not recommended for patients with IM routine EBV-DNA testing, but for the long course of disease,symptoms of recurrent, severe illness in children should be monitored in plasma EBV-DNA, contribute to the evaluation of therapeutic effect and prognosis.

Infectious mononucleosis virus antibody; EB four; EBV-DNA

R512.7

B

1671-8194（2012）16-0056-02

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.125

*在讀研究生