甲型H1N1流感疫苗血清抗體消長(zhǎng)研究＊

鄭奎城，沈曉娜，楊式芹，周朝暉，謝劍鋒，陳 煒，翁育偉，嚴(yán)延生

甲型H1N1流感為新發(fā)呼吸道傳染病，傳染性強(qiáng)，人群普遍易感。接種甲型H1N1流感疫苗是控制其流行的經(jīng)濟(jì)、科學(xué)的有效方法之一［1］。WHO建議在人群中大規(guī)模開(kāi)展疫苗接種，以形成免疫屏障，降低其大流行的可能性［2］。2009年10月我國(guó)在世界上率先成功研制甲型H1N1流感疫苗，并在全國(guó)范圍進(jìn)行大規(guī)模人群接種。事實(shí)證明，國(guó)產(chǎn)甲型H1N1流感疫苗具有較高的安全性和較好的免疫原性，適合在健康人群中普遍接種［3－5］。然而，對(duì)于人體在接種甲型H1N1流感疫苗后產(chǎn)生的抗體的持久性、消長(zhǎng)規(guī)律尚無(wú)充分的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。為此，本研究對(duì)接種甲型H1N1流感疫苗的對(duì)象在接種后1年內(nèi)不同時(shí)間段的血清抗體進(jìn)行測(cè)定，以探索其變化規(guī)律，為制定甲型H1N1流感免疫策略提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 研究對(duì)象 調(diào)查對(duì)象為來(lái)自福建省九個(gè)設(shè)區(qū)市，均未罹患甲型H1N1流感，但在2009年11月之后首次接受甲型H1N1流感疫苗接種的自然人群，共128名，其中男性85名，女性43名。對(duì)象年齡按≤17歲、18～55歲、≥56歲分組，分別有49名、40名和39名。

1．2 血清采集及抗體檢測(cè)方法 分別于接種甲型H1N1流感疫苗后的第3個(gè)月、第6個(gè)月、第9個(gè)月、第12個(gè)月采集各調(diào)查對(duì)象的靜脈血，血清分離后置－80℃保存，由福建省疾病預(yù)防控制中心采用血凝抑制試驗(yàn)方法 （HI）檢測(cè)血清甲型H1N1流感HI抗體。以霍亂菌液和雞血球分別去除血清中非特異抑制素和非特異凝集素，采用微量半加敏紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)進(jìn)行血清抗體測(cè)定，以能完全抑制雞血球凝集的血清最高稀釋度倍數(shù)的倒數(shù)為HI效價(jià)。結(jié)果判定以HI滴度≥1∶10為起點(diǎn)，以HI滴度≥1∶40為陽(yáng)性抗體水平。若HI＜1∶10，則計(jì)算為1∶5。HI滴度的最高檢測(cè)上限為1∶5 120。

1．3 試劑 甲型H1N1流感病毒抗原源自其代表株 A／California／07／2009（H1N1）。病毒抗原及霍亂菌液均由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心國(guó)家流感中心提供。

1．4 數(shù)據(jù)分析 用Microsoft Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)，以SPSS 11．5分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2．1 接種疫苗后血清HI抗體水平變化 如表1所示，128名調(diào)查對(duì)象在接種疫苗后的第3個(gè)月HI抗體陽(yáng)性率為61．7%，抗體幾何平均滴度（GMT）為40；在第6個(gè)月則分別為47．7%和28．4；在第9個(gè)月為40．9% 和24．5，在第12個(gè)月為35．43% 和23．6，在不同時(shí)間段，HI抗體陽(yáng)性率和GMT的差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。進(jìn)一步以性別分層分析發(fā)現(xiàn)，無(wú)論男性或女性，在第3、6、9和12個(gè)月，抗體陽(yáng)性率和GMT的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。對(duì)男女性進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，在第3個(gè)月，女性的抗體陽(yáng)性率和GMT均高于男性（P＜0．05），而在其余時(shí)間段與男性相當(dāng)。

按≤17歲、18～55歲、≥56歲分組分析發(fā)現(xiàn)，各個(gè)年齡組的血清抗體陽(yáng)性率在不同的時(shí)間段之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而抗體GMT的差異則有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。在同一時(shí)間段，不同年齡組的抗體陽(yáng)性率和GMT差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

表1 調(diào)查對(duì)象在接種疫苗后各時(shí)間段的血清HI抗體水平Tab．1 Levels of serum HI antibody in recipients at different time after vaccination

表2 各年齡組在接種疫苗后各時(shí)間段的血清HI抗體水平Tab．2 Levels of serum HI antibody in different age groups and different time after vaccination

2．2 血清HI抗體陽(yáng)性者在不同時(shí)間段抗體水平變化 如表3所示，全體128名對(duì)象在接種疫苗后的第3個(gè)月，血清HI抗體呈陽(yáng)性的有79名，其GMT為104．09。這79名抗體陽(yáng)性者在第6、9和12個(gè)月，抗體陽(yáng)性率和GMT則分別降低為75．95%和 58．33；64．56% 和 45．23；54．43% 和41．82，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。以性別分層分析顯示，無(wú)論男女性，在不同時(shí)間段，抗體陽(yáng)性率和GMT均有顯著差異（P＜0．01），而在同一時(shí)間段，男女性之間的差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

79名抗體陽(yáng)性者若按≤17歲、18～55歲、≥56歲分組，在接種疫苗的第3個(gè)月，各年齡組的抗體GMT分別為149．62、92．43、73．36，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），但在第6、9和12個(gè)月，抗體陽(yáng)性率和GMT則無(wú)顯著差異。各個(gè)年齡組的血清抗體陽(yáng)性率、GMT在第6、9和12個(gè)月均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）（表4）。

表3 HI抗體陽(yáng)性者在接種疫苗后不同時(shí)間段抗體水平Tab．3 Levels of serum HI antibody in the subjects with positive antibody at different time after vaccination

3 討 論

其他研究者已證明，國(guó)產(chǎn)甲型H1N1流感疫苗接種后免疫學(xué)保護(hù)效果良好，抗體陽(yáng)性保護(hù)率及陽(yáng)轉(zhuǎn)率均達(dá)到歐盟藥品評(píng)價(jià)局（EMEA）和美國(guó)FDA的標(biāo)準(zhǔn)［6－7］。本研究結(jié)果顯示，在接種甲型 H1N1流感疫苗后的第3個(gè)月血清HI抗體陽(yáng)性率為61．7%，GMT為40。而據(jù)陳恩富等報(bào)道，在接種疫苗后的第1個(gè)月，抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)72．54%，GMT增加9．9倍［4］。李華東則報(bào)道在接種疫苗后的第1個(gè)月，抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)81．42%［8］。由于本研究未采集疫苗接種前及接種后3～4w的血清樣本，所以無(wú)法準(zhǔn)確判斷同時(shí)期抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率和GMT增加的倍數(shù)。另外，本研究對(duì)象的年齡構(gòu)成以及接種后采血的時(shí)間與上述研究都不同，所以可能導(dǎo)致抗體陽(yáng)性率及GMT不一致，但我們的結(jié)果同樣說(shuō)明了國(guó)產(chǎn)疫苗的良好免疫效果。

表4 HI抗體陽(yáng)性者各年齡組在接種疫苗后不同時(shí)間段抗體水平Tab．4 Levels of serum HI antibody in different age groups with positive antibody at different time after vaccination

本研究顯示，在接種疫苗后第6個(gè)月HI抗體陽(yáng)性率和GMT分別為47．7%和28．4，在第9個(gè)月為40．9% 和24．5，在第12個(gè)月為35．43% 和23．6，呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，而且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。按男女性別分層分析，也證實(shí)了相同的趨勢(shì)；按年齡組分層分析，不同年齡組的抗體GMT也隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)顯著下降。雖然不同年齡組的抗體陽(yáng)性率在不同時(shí)間段無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，但也顯示了隨時(shí)間而下降的傾向。

對(duì)接種疫苗3個(gè)月后抗體呈陽(yáng)性的79名對(duì)象的分析表明，在接種疫苗后的第6個(gè)月，抗體陽(yáng)性率比第3個(gè)月下降近25% （100%vs 75．95%），GMT減少近一半（104．09vs 58．33）；在第9個(gè)月，抗體陽(yáng)性率和GMT分別下降近35% （100%vs 64．56%）和58% （104．09vs 45．23）；在第12個(gè)月，抗體陽(yáng)性率則下降近一半（100%vs 54．43%），GMT下降近59% （104．09vs 41．82）。以性別和年齡組進(jìn)一步分層分析也顯示，無(wú)論在不同性別或年齡組，HI抗體水平均顯著快速下降。這些結(jié)果說(shuō)明在抗體陽(yáng)性者中，HI抗體水平呈現(xiàn)快速下降的趨勢(shì)。另外，以年齡組分層分析也顯示，在接種后的第3個(gè)月，≥56歲組的抗體GMT水平顯著低于其他兩個(gè)年齡組，可能與高年齡組的機(jī)體免疫功能較其他年齡組低有關(guān)，這個(gè)結(jié)果與其他研究報(bào)告相似［5］。

在接種疫苗后第3個(gè)月，女性的抗體陽(yáng)性率和GMT均顯著高于男性，而在其余時(shí)間段與男性相當(dāng)。由于本研究的男女性對(duì)象在人數(shù)與年齡并未完全匹配，可能導(dǎo)致抗體結(jié)果的差異。在今后的研究中，除了有必要進(jìn)一步分析疫苗接種3～4w后的抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)情況之外，還必須對(duì)不同性別進(jìn)行匹配。

我們的研究首次揭示，盡管甲型H1N1流感疫苗具有良好的免疫效果，但其免疫力并不持久。人群大規(guī)模接種建立起的免疫屏障并不長(zhǎng)久牢固，因此，當(dāng)再次發(fā)生甲型H1N1流感的大流行時(shí)，依然有必要對(duì)上一輪流行周期已接種過(guò)疫苗的人群進(jìn)行再次接種，特別是重點(diǎn)人群，如幼年齡組和高年齡組，應(yīng)是免疫接種的重點(diǎn)對(duì)象。

［1］National Center for Immunization and Respiratory Diseases，CDC．Use of influenza A （H1N1）2009monovalent vaccine：recommendation of the Advisory Committee on Immunization Practices（ACIP），2009［J］．MMWR Recomm Rep，2009，58（RR－10）：128．

［2］CDC．Safety of influenza A （H1N1）2009monovalent vaccines．United States，October 1November 24，2009［J］．MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2009，58（48）：1351－1356．

［3］Liang XF，Wang HQ，Wang JZ，et al．Safety and immunogenicity of 2009pandemic influenza A H1N1vaccines in China：a multicentre，double－blind，randomized，placebo－controlled trial［J］．Lancet，2009，375 （9708）：56－66．DOI：10．1016／S0140－6736（09）62003－1

［4］Chen EF，Yao FY，Zhou JH，et al．Study on immunogenicity and related factors of the influenza A （H1N1）vaccine in mass immunization［J］．Zhejiang Prevent Med，2011，23（7）：5－7．（in Chinese）陳恩富，姚風(fēng)燕，周建紅，等．甲型H1N1流感疫苗免疫效果及影響因素研究［J］．浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，23（7）：5－7．

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［6］Committee for Medicinal Products for Human Use，Note for guidance on harmonization of requirements for influenza vaccines，CPMP／BWP／214／96，issued 12March 1997．Available at：www．emea．Europa．Eu／pdfs／human／bwp／021496en．pdf（accessed 2December 2009）．

［7］Food and Drug Administration．Influenza A（H1N1）2009Monovalent Vaccine［EB／OL］．http／／www．fda．gov／downloads／biologicsbloodvaccines／vaccines／approvedproducts／ucm182401．pdf．

［8］Li HD．Security evaluation on the immunization with of influenz A（H1N1）vaccine in health population in Huarong County in 2009［J］．Practical Prevent Med，2011，18（7）：1244－1246．（in Chinese）李華東．2009年華容縣人群甲型H1N1流感疫苗免疫效果分析［J］．實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18（7）：1244－1246．