噬菌體抗體庫(kù)及其在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用

邢佑尚 汪 琳 趙胤澤 王慧珊

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧沈陽(yáng)110886;2.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局)

1 前言

抗體庫(kù)(antibody library)技術(shù)是用PCR技術(shù)得到抗體全套重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，將得到的目的片段重組到特定的表達(dá)載體中，最后轉(zhuǎn)入原核或真核生物體內(nèi)以表達(dá)有功能的抗體分子片段，并通過親和篩選獲得特異性抗體的技術(shù)?？贵w表型與基因型的統(tǒng)一，從構(gòu)建的抗體庫(kù)中找到編碼針對(duì)特異抗原的基因是抗體庫(kù)技術(shù)的核心內(nèi)容［1］?？贵w庫(kù)技術(shù)的產(chǎn)生基于三項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)的突破:一是PCR技術(shù)使人們能夠利用引物得到全套抗體相關(guān)可變區(qū)基因;二是利用大腸桿菌表達(dá)出了具有特異抗原抗性的重組抗體分子;三是噬菌體表面重組蛋白展示技術(shù)的成功建立［2］。抗體庫(kù)技術(shù)較傳統(tǒng)細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)制備單抗有著天然技術(shù)上的縮短抗體制備周期的優(yōu)勢(shì)，跳過了雜交瘤細(xì)胞融合步驟而自然避免了因雜交瘤細(xì)胞丟失和不穩(wěn)定問題;擴(kuò)大了篩選容量，將抗體庫(kù)的克隆基數(shù)一般在106以上，遠(yuǎn)超雜交瘤細(xì)胞;抗體庫(kù)技術(shù)制備的抗體是表型和基因型的統(tǒng)一，便于進(jìn)一步構(gòu)建各種基因工程抗體;抗體庫(kù)技術(shù)得到的抗體可利用原核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)表達(dá);一些針對(duì)弱免疫原、毒性抗原、人源抗體等難于制備的抗體都可以得到解決?？贵w庫(kù)技術(shù)由于通最高、周期短、可控性好、路線多樣，因而成為開發(fā)抗體最具發(fā)展活力的領(lǐng)域［3］。

根據(jù)抗體庫(kù)展示平臺(tái)的不同可以分為:噬茵體展示、核糖體展示、酵母展示、細(xì)菌展示、桿狀病毒展示和哺乳細(xì)胞展示。不同的展示平臺(tái)具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，其中噬菌體抗體庫(kù)以噬菌體和細(xì)菌為對(duì)象，易操作，成本較低.是技術(shù)最成熟、商業(yè)應(yīng)用最成功的展示平臺(tái)［4］。

2 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)

噬菌體抗體庫(kù)展示技術(shù)是一種用于蛋白質(zhì)或抗體篩選的新技術(shù)，其基本原理是將外源DNA片段插入噬菌體編碼蛋白基因中，使外源DNA片段的表達(dá)產(chǎn)物與噬菌體的外殼蛋白融合，展示于噬菌體表面［5］。噬菌體展示技術(shù)的第一次出現(xiàn)是1985年，Smith G P將外源基因插入絲狀噬菌體f1的基因Ⅲ，在噬菌體表面展示了以融合蛋白形式表達(dá)的目的基因編碼的多肽。1988年P(guān)armley將已知抗原決定簇與噬菌體PⅢ N端融合呈現(xiàn)在其表面。1990年Mc Cafferty用噬菌體展示技術(shù)篩選溶菌酶的單鏈抗體成功，開創(chuàng)了噬菌體展示技術(shù)廣泛應(yīng)用的時(shí)代［6］。

2.1 噬菌體抗體庫(kù)所用的噬菌體

噬菌體展示技術(shù)中常用的噬菌體為溶原性的絲狀噬菌體，如M13、f1和fd，這些噬菌體為圓柱型，具有約6.5nm的直徑，它的長(zhǎng)度則由基因組的大小決定如Fd噬菌體長(zhǎng)930nm，而只有221個(gè)核苷酸的微噬菌體變種則只有50nm長(zhǎng)，它的外殼蛋白包裹在噬菌體的外部。噬菌體主要外殼蛋白為 gⅧ蛋白，共有2700個(gè)拷貝。噬菌體的一端有g(shù)Ⅲ和gⅥ蛋白蛋白，主要作用是感染革蘭陰性菌;另一端有g(shù)Ⅶ和gⅨ蛋白，這4種蛋白在噬菌體中均有5個(gè)拷貝［7］。除了絲狀噬菌體外，其他的溶菌性噬菌體如λ噬菌體、T4、T7噬菌體也有應(yīng)用。這些噬菌體可用于cDNA文庫(kù)的展示，尤其是T7噬菌體，近些年來應(yīng)用越來越廣泛，將目的基因與T7外殼蛋白的基因融合，可在 T7表面展示高達(dá)400拷貝的大分子量蛋白質(zhì)。

2.2 噬菌體抗體庫(kù)所用的衣殼蛋白

噬菌體抗體庫(kù)所用的衣殼蛋白有絲狀噬菌的PⅢ蛋白、PⅧ蛋白和PⅥ蛋白，λ噬菌體的PV蛋白和D蛋白以及T4噬菌體的SOC(9 ku)和HOC(40 ku)外殼蛋白。

2.2.1 PⅧ蛋白展示系統(tǒng)

絲狀噬菌體的主要衣殼蛋白PⅧ蛋白在噬菌體顆粒中存在幾千個(gè)拷貝。PⅧ蛋白展示的好處是拷貝數(shù)多，展示的抗體遍布于噬菌體的表面，PⅧ僅有50個(gè)氨基酸，抗體所受空間位阻小，特異性結(jié)合力強(qiáng)。PⅧ的N端附近可融合6－8個(gè)殘基的短肽，但不能融合更長(zhǎng)的肽鏈，因?yàn)檩^大的多肽或蛋白會(huì)造成空間障礙，影響噬菌體裝配［8］，使其失去感染力，但有輔助噬菌體參與時(shí)，可提供野生型PⅧ蛋白，降低價(jià)數(shù)，此時(shí)可融合多肽甚至抗體片段。Sidhu，SS等使用經(jīng)過改造的PⅧ蛋白在多拷貝的情況下表達(dá)了更大的多肽［9］。

2.2.2 PⅢ蛋白展示系統(tǒng)

PⅢ蛋白展示系統(tǒng)是絲狀噬菌體的另一展示系統(tǒng)，同時(shí)也是噬菌體展示最受歡迎的展示系統(tǒng)，其以5個(gè)拷貝數(shù)量展示于病毒顆粒末尾，并且它能允許大片段的插入能與單價(jià)展示相容，有大量使用的載體。PⅢ有2個(gè)位點(diǎn)可供外源序列插入，PIII很容易為蛋白水解酶水解。所以有輔助噬菌體超感染時(shí).可以使每個(gè)噬菌體平均顯示不到一個(gè)融合蛋白，稱為單價(jià)噬茵體，從而使抗體部分最大限度地保持原構(gòu)型而功能完好。PIII展示系統(tǒng)的主要用途是制備噬茵體抗體，它的突出優(yōu)點(diǎn)是模擬了自然免疫選擇系統(tǒng)。此外，尚有絲狀噬菌體PⅥ展示系統(tǒng)的研究報(bào)道［10］。PⅥ蛋白的C端暴露于噬菌體表面，可以作為外源蛋白的融合位點(diǎn)，可以用于研究外源蛋白C端結(jié)構(gòu)區(qū)域功能，該系統(tǒng)主要用于cDNA表面展示文庫(kù)的構(gòu)建，并取得了不錯(cuò)的篩選效果。

2.2.3 PV蛋白和D蛋白展示系統(tǒng)

PV蛋白和D蛋白都是λ噬菌體蛋白，λ噬菌體的尾部管狀部分主要由PV蛋白構(gòu)成，用于表達(dá)的外源序列插入或替換PV兩個(gè)折疊區(qū)域中C端的折疊結(jié)構(gòu)域(非功能區(qū))，λ噬菌體PV蛋白展示的優(yōu)點(diǎn)是其裝配在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，能夠展示難以分泌的肽或蛋白質(zhì)。用PV蛋白系統(tǒng)已成功展示了有活性的大分子蛋白β－半乳糖苷酶(465 ku)和植物外源凝血素BPA(120 ku)等。D蛋白是λ噬菌體另外一種用于展示系統(tǒng)的蛋白，其以三聚體的形式突病毒顆粒的組裝可以在體內(nèi)也可以在體外，體外組裝即是將D融合蛋白結(jié)合到λD－噬菌體表面，而體內(nèi)組裝是將含D融合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入λD－溶源的大腸埃希菌菌種中，從而補(bǔ)償溶源菌所缺的D蛋白，通過熱誘導(dǎo)而組裝。該系統(tǒng)有一個(gè)很大的特點(diǎn)，噬菌體上D蛋白和融合蛋白的比例可通過宿主抑制tRNA活性加以調(diào)節(jié)，這對(duì)于展示那些對(duì)噬菌體裝配有損害作用的蛋白質(zhì)時(shí)特別有用［11］。

2.2.4 SOC和HOC蛋白展示系統(tǒng)

T4噬菌體的兩種非必需外殼蛋白SOC(small outer capsid protein)和HOC(highly antigenic outer capsid protein)，其顯著特點(diǎn)是能夠?qū)煞N性質(zhì)完全不同的外源多肽或蛋白質(zhì)融合而直接展示于T4噬菌體的表面，因此它表達(dá)的蛋白不需要復(fù)雜的蛋白純化，避免了因純化而引起的蛋白質(zhì)變性和丟失。不需要分泌途徑，因而其表面展示多肽和蛋白質(zhì)的范圍廣，很少受到限制。在DNA包裝被抑制時(shí)，T4噬菌體是雙股DNA噬菌體中唯一能夠在體內(nèi)產(chǎn)生空衣殼的噬菌體(SOC和HOC也同時(shí)組裝)。因此，在用重組T4做疫苗時(shí)，它能在空衣殼表面展示目的抗原，這種缺乏DNA的空衣殼苗，在生物安全性方面具有十分光明的前景［12］。

2.3 噬菌體抗體庫(kù)類型

2.3.1 非免疫噬菌體抗體庫(kù)

非免疫抗體庫(kù)不針對(duì)特定抗原，而是作為一個(gè)無偏向性的篩選平臺(tái)，因此必須具有很高的庫(kù)容最和多樣性［13］。按照抗體可變區(qū)基因來源，非免疫抗體庫(kù)分為天然抗體庫(kù)、部分隨機(jī)化抗體庫(kù)、完全隨機(jī)化抗體庫(kù)。

天然抗體庫(kù)的基因主要來源于B細(xì)胞，包括前、成熟、記憶B細(xì)胞，常從骨髓、脾、淋巴結(jié)、外周血中提取。獲取全套抗體基因引物設(shè)計(jì)思路通常有3種:一是在框架區(qū)FR1和FR4或J區(qū)(鉸鏈區(qū))設(shè)計(jì)引物，其缺點(diǎn)是引物區(qū)引入的氨基酸突變對(duì)抗體的親和力有潛在影響;二是利用RACE技術(shù)，其特異引物可針對(duì)C區(qū)或polyA區(qū)，用此方法也可獲得真實(shí)的V區(qū)序列，而且不易漏過可用的抗體基因，但操作繁瑣;三是在信號(hào)肽和C區(qū)設(shè)計(jì)引物，克隆后測(cè)序，再在FRl和FR4根據(jù)測(cè)序的結(jié)果設(shè)計(jì)引物，可獲得完全真實(shí)的V區(qū)序列，但信號(hào)肽序列變化較大，不易設(shè)計(jì)［14］。

部分隨機(jī)化抗體庫(kù)，是在某一天然抗體基因的基礎(chǔ)上保持抗體的大體結(jié)構(gòu)不變，一般4個(gè)FR和CDRl、CDR2區(qū)不變，只針對(duì)最關(guān)鍵的CDR3區(qū)進(jìn)行隨機(jī)化操作［15］。

完全隨機(jī)化抗體庫(kù)保留抗體的FR不變，對(duì)全部的CDR區(qū)隨機(jī)化合成。FR來源于已知的天然抗體基因或人工設(shè)計(jì)，要求具有很高的序列通用性且能夠適應(yīng)多樣的CDR結(jié)構(gòu)。完全隨機(jī)化抗體庫(kù)的多樣性最高，但同時(shí)也對(duì)庫(kù)容量有更高的要求，因此操作難度較高［16］。

2.3.2 免疫噬菌體抗體庫(kù)

免疫噬菌體抗體庫(kù)的抗體基因來源于使用抗原免疫過的個(gè)體，因此存在免疫偏向性，相比非免疫抗體庫(kù)較容易從該類抗體庫(kù)中篩選到針對(duì)某一抗原的特異性抗體。其存在的缺點(diǎn)是由于免疫本身的偏向性和限制性，制備針對(duì)弱抗原、自身抗原、毒性抗原的抗體比較困難，且某一特定的抗體庫(kù)只能產(chǎn)生針對(duì)特定抗原趨向的抗體，無法作為一個(gè)廣泛的技術(shù)平臺(tái)加以應(yīng)用［17］。

2.4 噬菌體抗體庫(kù)分子類型

抗體庫(kù)技術(shù)產(chǎn)生的抗體以小分子抗體為主，根據(jù)抗體分子類型，可將抗體庠分為Fab庫(kù)、單鏈抗體(scFv)庫(kù)、微型抗體庫(kù)、單域抗體(single－domain antibody)庫(kù)、最小識(shí)別單位(MRU)庫(kù)等［18］。

Fab片段是由重鏈(VH－CH1)和輕鏈(VLCL)組成的異二聚體，片段大小為完整抗體的1/3。與其他小分子抗體相比，雖然體積較大，但是卻能夠最好地保留抗體的親和力，因而目前應(yīng)用最為成功［19］。

單鏈抗體(scFv)是在抗體重鏈(VH)與輕鏈(VL)之間用連接肽(1inker)連接而形成，大小為完整抗體的1/6。(Gly4Ser)3為常用連接肽，具有較好的疏水性和伸展性，不影響抗原結(jié)合部位的構(gòu)象。其優(yōu)點(diǎn)是分子量小，穿透力強(qiáng)，近年來scFv的應(yīng)用趨于成熟。

單域抗體由VH或VL組成，大小為完整抗體的1/12。與VL相比，大多數(shù)單獨(dú)的VH保留了較好的抗原結(jié)合能力和專一性，然而由于暴露了原先與VL結(jié)合的疏水性，須改造其中的一些氨基酸位點(diǎn)。

3 噬菌體抗體庫(kù)在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用

目前世界各國(guó)間貿(mào)易量飛速增長(zhǎng)，我國(guó)的出入境產(chǎn)品也迅猛增長(zhǎng)，在此前提下，如何實(shí)現(xiàn)出入境產(chǎn)品的快速通關(guān)，實(shí)現(xiàn)我國(guó)大通關(guān)的戰(zhàn)略是亟待解決的問題。目前免疫檢測(cè)在檢測(cè)方法占據(jù)了極其重要的位置，得到了最為廣泛的應(yīng)用，然而傳統(tǒng)免疫或雜交瘤等途徑獲得抗體費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且無法滿足制備各種高密度大通量蛋白檢測(cè)的需要。新興的噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)可以快速、廉價(jià)、高通量地獲得產(chǎn)量高，活性強(qiáng)，特異性好克隆抗體。研究者們?yōu)槭删w抗體庫(kù)用于檢測(cè)方面做了許多開創(chuàng)性研究。

在生物寄生蟲檢測(cè)方面，張慧林等利用經(jīng)日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原和成蟲抗原免疫的BALb/c小鼠脾臟作為cDNA來源，利用免疫噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)得到抗體庫(kù)，然后分別以免疫鼠血清IgG和正常鼠血清IgG包板，將得到的抗體庫(kù)依次孵育后使用抗原篩選，進(jìn)行六輪富集洗脫后，從最后一次篩選得到的細(xì)菌集落中隨機(jī)挑選80個(gè)克隆，用ELISA鑒定，將陽(yáng)性克隆進(jìn)行可溶性表達(dá)［20］，從上述庫(kù)中篩選獲得四株日本血吸蟲抗獨(dú)特型抗體，對(duì)其中一株(C12)進(jìn)行了可溶性表達(dá)，用SDS－PAGE電泳初步鑒定，然后經(jīng) ELISA鑒定出四株(C12、C19、D1、D2)抗日本血吸蟲獨(dú)特型抗體。黃會(huì)、詹希美等成功的構(gòu)建了庫(kù)容為3.46×106的鼠源性抗恙蟲病東方體的噬菌體Fab片段抗體庫(kù)，試驗(yàn)以感染恙蟲病東方體小鼠的脾細(xì)胞中的RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄后，PCR擴(kuò)增出抗體輕鏈和重鏈目的基因，將表達(dá)載體pComb3和輕鏈目的片段進(jìn)行雙酶切、連接，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌XL1－blue，得到輕鏈庫(kù);再對(duì)重鏈目的基因和輕鏈重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切、連接，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌XL1－blue，構(gòu)建組合文庫(kù)，用輔助噬菌體VCSM13進(jìn)行超感染。用恙蟲病東方體特異性抗原進(jìn)行篩選，經(jīng)過4輪富集篩選，抗體庫(kù)中的目的抗體得以富集約160倍，并用ELISA法對(duì)其進(jìn)行鑒定，得到了7 個(gè)陽(yáng)性克?。?1］。

在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)方面，王耘等利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)篩選抗CrylAc蛋白單鏈抗體，為CrylAc蛋白蛋白檢測(cè)開辟了一條新的制備路線。其制備的抗體庫(kù)經(jīng)輔助噬菌體M13K07擴(kuò)增后，系列稀釋測(cè)定其滴度為1.0×1017pfu/L，以CrylAc蛋白為抗原包被固相，經(jīng)4輪富集擴(kuò)增過程后，挑取單克隆，用ELISA法測(cè)定特異性結(jié)合活性，并對(duì)其進(jìn)行基因序列測(cè)定。經(jīng)過4輪篩選，獲得了2株能與CrylAc蛋白特異性結(jié)合的陽(yáng)性克隆［22］，為CrylAc毒素蛋白檢測(cè)提供了條件。

在產(chǎn)品藥物殘留檢測(cè)方面，由于抗體檢測(cè)的簡(jiǎn)便、快速、靈敏、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)具有很大的應(yīng)用潛力。沈建忠等構(gòu)建了庫(kù)容量為6.5×106噬菌體scFv單鏈抗體庫(kù)，經(jīng)過三輪富集后通過Phage－ELISA技術(shù)成功篩選出了9個(gè)抗慶大霉素噬菌體陽(yáng)性克隆。鄭志明等應(yīng)用噬菌體展示和重組抗體技術(shù)構(gòu)建了庫(kù)容為1.3×106的抗諾氟沙星單鏈抗體庫(kù)，噬菌體中scFv插入率為90%，制備抗諾氟沙星單鏈抗體庫(kù)，篩選得到5株抗諾氟沙星的陽(yáng)性克隆。為運(yùn)用噬菌體展示抗體技術(shù)制備特異性抗藥物單抗及進(jìn)一步建立藥殘檢測(cè)新技術(shù)奠定了基礎(chǔ)［23］。

鑒于噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的大容量性和生物芯片的高通量性，將噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)和生物芯片技術(shù)相結(jié)合應(yīng)用于檢測(cè)領(lǐng)域必將為檢驗(yàn)檢疫工作帶來革命性的提高，在生物芯片檢測(cè)方面，人們最初嘗試了PⅢ展示系統(tǒng)制作的抗體檢測(cè)芯片，后來廖瑋等人比較了噬菌體PⅢ和PⅧ展示系統(tǒng)制作的凝血酶特異的單鏈抗體芯片，比較不同展示系統(tǒng)對(duì)噬菌體抗體芯片的特異性及靈敏度的影響，結(jié)果表明PⅧ展示系統(tǒng)陽(yáng)性對(duì)照的熒光信號(hào)增加了PⅢ展示系統(tǒng)的26倍，而陰性抗原對(duì)照的熒光強(qiáng)度降低為PⅢ展示系統(tǒng)的1/65，作為對(duì)照的陰性噬菌體強(qiáng)度基本沒有變化，在PⅧ展示系統(tǒng)中，陽(yáng)性對(duì)照與陰性抗原和陰性噬菌體的熒光強(qiáng)度比由原來的2:1:1提高為3000:1:50［24］。為解決噬菌體展示的展示效率低、拷貝數(shù)少和偶聯(lián)后噬菌體倒伏在芯片上的問題提供了解決方法，進(jìn)一步為噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)在抗體芯片的應(yīng)用掃平了障礙。生物芯片技術(shù)的高通量特性結(jié)合抗體庫(kù)技術(shù)的高庫(kù)容特征，二者的結(jié)合為高密度高通量蛋白的檢測(cè)提供了有效地解決途徑。

在利用單重鏈?zhǔn)删w抗體庫(kù)方面，嚴(yán)安、孫冰玉等構(gòu)建抗H5N1禽流感病毒的小羊駝免疫噬菌體重鏈可變區(qū)抗體庫(kù)(VHH型抗體庫(kù))并從中篩選到了抗H5N1的噬菌體VHH型抗體，利用H5N1滅活疫苗免疫小羊駝四次后，其外周血清中抗體血清抑制效價(jià)可達(dá)1:2560，構(gòu)建的VHH抗體基因庫(kù)庫(kù)容可達(dá)3×108，隨機(jī)挑選14個(gè)抗體基因克隆進(jìn)行測(cè)序鑒定，結(jié)果顯示均為獨(dú)立克隆。上述基因庫(kù)經(jīng)輔助噬菌體拯救后，得到抗H5N1的噬菌體VHH型抗體初級(jí)庫(kù)，對(duì)初級(jí)庫(kù)進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，結(jié)果呈陽(yáng)性，表明初級(jí)庫(kù)中存在具有潛在中和活性的抗H5N1抗體［25］。

4 噬菌體抗體庫(kù)在檢驗(yàn)檢疫中應(yīng)用前景展望

綜上所述，噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)在檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域顯示出極大的應(yīng)用前景，特別是噬菌體抗體庫(kù)的大容量、單體展示的特點(diǎn)為免疫檢測(cè)提供了比傳統(tǒng)雜交瘤細(xì)胞制作抗體更為方便、快捷、大批量的制備方法，結(jié)合近年來發(fā)展的高通量檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)，如抗體固相芯片、懸浮芯片技術(shù)，可以為檢驗(yàn)檢疫工作領(lǐng)域帶來突破性提高。如對(duì)于不同亞型的病毒檢測(cè)可以利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)篩選對(duì)應(yīng)不同亞型的單抗，然后制作高通量的亞型檢測(cè)芯片，將噬菌體抗體庫(kù)篩選的同一種屬不同亞型的抗體(Scfv/Fab)集中于一張芯片上，實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)排查所有已知此種病毒的目的。同時(shí)對(duì)于病毒變異快的問題，非免疫抗體庫(kù)技術(shù)提供了無傾向性抗體篩選平臺(tái)，無論病毒變異與否，都能篩選到合適的抗體，縮短應(yīng)對(duì)病毒變異后抗體研制的時(shí)間。對(duì)于國(guó)內(nèi)外突然爆發(fā)的疫情，以往要花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行相應(yīng)抗體的獲得，應(yīng)用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的平臺(tái)可以很快獲得大量相應(yīng)抗體，贏得應(yīng)急反應(yīng)時(shí)間。

噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)應(yīng)用于檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域有著天然的鍥合優(yōu)勢(shì)和光明的前景，當(dāng)然也存在一些技術(shù)瓶頸和需要完善的方面，庫(kù)容量是噬菌體抗體庫(kù)的優(yōu)勢(shì)但同時(shí)也是其技術(shù)瓶頸，一般庫(kù)容達(dá)到109以上，就能接近生物體內(nèi)天然抗體基因的數(shù)量級(jí)，因此在保證庫(kù)容量的前提下應(yīng)盡量提高庫(kù)的分子多樣性，這樣才能夠篩選到針對(duì)不同抗原的抗體。另外抗體庫(kù)產(chǎn)生的抗體親和力有待進(jìn)一步改造提高，目前常用隨機(jī)進(jìn)化策略如易錯(cuò)PCR(error－prone PCR)、DNA 改組(DNA shuffling)、鏈交換、形態(tài)建成(morphogenics)等方法，以及定向進(jìn)化策略如計(jì)算機(jī)模擬定點(diǎn)突變等提高抗體的親和力。

噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)作為一種新的蛋白研究、抗體研制的方法，必將在檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和實(shí)際應(yīng)用中產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。

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