嗎替麥考酚酯對(duì)老年系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者免疫細(xì)胞水平變化的影響①

李倩倩 姜振宇 趙 令 馬 寧 王 凱 張彥東

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，長(zhǎng)春130021)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是(SLE)是一種自身免疫性疾病，病因及發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，SLE好發(fā)于育齡期女性，但也可發(fā)生于老年人，由于老年SLE臨床上較少見(jiàn)，且與青年SLE的臨床表現(xiàn)有較多不同，常易誤診。盡管目前對(duì)SLE發(fā)病機(jī)制的研究取得較大的發(fā)展，但主要是集中在疾病與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的關(guān)系上，自身免疫性疾病的共同病理基礎(chǔ)是自身抗原和抗體形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，是導(dǎo)致多器官損傷，除產(chǎn)生自身抗體外，還有免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子等免疫異常，而淋巴細(xì)胞亞群特別是T細(xì)胞、B細(xì)胞及NK細(xì)胞對(duì)疾病均有一定的影響?，F(xiàn)階段，SLE的治療仍以糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑為主。單純應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療SLE，激素用量大，易復(fù)發(fā);激素聯(lián)合免疫抑制劑治療SLE可減少激素用量，有效控制病情，而嗎替麥考酚酯(MMF)作為最初用于抑制器官移植后的排斥反應(yīng)的免疫抑制劑，近年來(lái)開(kāi)始試用治療多種自身免疫性疾病。本研究探討MMF對(duì)老年SLE的外周血T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞水平變化的影響。

1 材料與方法

1.1對(duì)象與方法 依據(jù)1997年美國(guó)風(fēng)濕學(xué)會(huì)(ACR)修訂的SLE分類(lèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)選取30例2011年1月到2012年1月吉林大學(xué)第一醫(yī)院老年SLE(≥60 歲)［1］，男2 例，女28 例，年齡(59.40 ±0.96)歲，系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)12(4～32)，抗-雙鏈DNA陽(yáng)性率82%，C3為0.42(0.31～0.92)，C4為0.13(0.04～0.20)。將SLE患者隨機(jī)分為MMF聯(lián)合激素治療組，給予 MMF 600 mg/(m·d)口服，1 mg/(kg·d)潑尼松龍靜點(diǎn);單純激素治療組，給予潑尼松龍1 mg/(kg·d)靜點(diǎn)，每組15例患者，均治療4周。治療中，除激素和MMF外，僅給予其他對(duì)癥支持治療，但對(duì)患者的淋巴細(xì)胞水平均無(wú)影響。SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)≥6分為疾病活動(dòng)期。所有SLE患者均為初發(fā)SLE，排除系統(tǒng)性硬化、肌炎或其他自身免疫疾病，或過(guò)去的6個(gè)月已經(jīng)給予免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素治療的SLE患者。同期門(mén)診健康患者30例，男1例，女29例，年齡(59.20±1.151)歲。既往無(wú)風(fēng)濕病及其他重大疾病病史。

1.2流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞比例 于治療前及治療后4周采集所有研究對(duì)象的外周血，采用各種單抗染色及流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定各淋巴細(xì)胞亞群的分?jǐn)?shù)比。每個(gè)采樣管采集50 μl血液，加入5 μl單克隆抗體。單抗包括：FITC偶聯(lián)CD4單克隆抗體、PE偶聯(lián)CD8單克隆抗體、PerCP偶聯(lián)CD3單克隆抗體、FITC偶聯(lián) CD3單克隆抗體，PE偶聯(lián)CD16CD56單克隆抗體，PE偶聯(lián)CD19抗體，樣本在室溫下放置0.5小時(shí)，之后加入美國(guó)BD公司生產(chǎn)的FACS細(xì)胞裂解液，靜置6分鐘。用PBS緩沖液洗過(guò)2遍后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)分析軟件(v5.7.2)分析細(xì)胞水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以中位數(shù)和范圍表示，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件分析秩和檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)。兩個(gè)變量的關(guān)系用等級(jí)相關(guān)分析評(píng)估。

2 結(jié)果

2.1老年SLE患者淋巴細(xì)胞亞群的水平變化 與對(duì)照組比較，老年SLE患者CD3+CD4+Th細(xì)胞明顯降低(P＜0.000 1)，CD3+CD8+Ts細(xì)胞明顯升高(P=0.000 3);老年SLE患者CD3-(CD16CD56)+NK、CD3+(CD16CD56)+NK細(xì)胞較對(duì)照組明顯降低(P＜0.000 1)，而CD3-CD19+B細(xì)胞較對(duì)照組明顯增高(P=0.000 2)。

2.2老年SLE患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與SLEDAI的相關(guān)性 老年SLE患者外周血CD3-CD19+B細(xì)胞與 SLEDAI呈正相關(guān)性(P=0.003 4，R=0.267 8)。但我們發(fā)現(xiàn)CD3+CD4+Th(P=0.071 0，R=0.315 0)、CD3+CD8+Ts(P=0.126，R=0.245 6)、NK(P=0.098 7，R=0.574 1)細(xì)胞與SLEDAI活動(dòng)指數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性。

表1 老年SLE患者淋巴細(xì)胞亞群的水平變化(%)Tab．1 The change of lymphocyte subsets in elderly SLE patients(%)

2.3MMF對(duì)老年SLE患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響 單用激素組治療后CD3-CD19+B細(xì)胞較治療前明顯降低(P=0.035 9)。MMF聯(lián)合激素組，治療后CD3+CD4+Th細(xì)胞較治療前明顯升高(P=0.002)，CD3-CD19+B細(xì)胞較治療前明顯降低(P＜0.000 1)。MMF聯(lián)合激素組對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的影響優(yōu)于單用激素組。見(jiàn)表2。

表2 MMF對(duì)老年SLE患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響Tab．2 The effect of MMF on levels of peripheral blood lymphocyte subsets in elderly SLE patients

3 討論

T、B細(xì)胞亞群數(shù)量異常在SLE發(fā)病中的作用近年來(lái)一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)老年SLE患者外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)目降低和CD8+T細(xì)胞數(shù)目增加，進(jìn)一步導(dǎo)致CD4+/CD8+比例失調(diào)，與既往研究成果相一致［2］。研究表明盡管在SLE患者外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)目降低、CD8+T數(shù)目增加，但是仍然可以導(dǎo)致B細(xì)胞過(guò)度活化，進(jìn)而產(chǎn)生各種自身抗體，引起發(fā)?。?］。

B細(xì)胞功能亢進(jìn)，過(guò)度活化產(chǎn)生大量的自身抗體，可以導(dǎo)致SLE的發(fā)生和發(fā)展［4］?；顒?dòng)期SLE患者外周血B細(xì)胞中，TRAF作為細(xì)胞凋亡調(diào)控中的TNF信號(hào)負(fù)性調(diào)節(jié)因子，可能通過(guò)和抗凋亡蛋白連接而抑制其凋亡，從而導(dǎo)致B細(xì)胞存活延長(zhǎng)，產(chǎn)生更多的自身抗體而致?。?］。本研究亦發(fā)現(xiàn)老年狼瘡患者B細(xì)胞明顯升高，且與SLEDAI呈明顯正相關(guān)。

有文獻(xiàn)報(bào)道NK細(xì)胞數(shù)量在SLE患者體內(nèi)明顯下降［6］。本研究結(jié)果也提示，老年SLE患者NK細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組明顯降低。研究發(fā)現(xiàn)在SLE中由于循環(huán)免疫復(fù)合物和血清細(xì)胞因子所引起的NK細(xì)胞凋亡可能導(dǎo)致NK細(xì)胞的減少［7］。

治療SLE的藥物主要是糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑。MMF被認(rèn)為是治療狼瘡腎的重要治療方法，且毒副作用?。?］。研究證實(shí)，MMF具有高度抗B、T細(xì)胞增生作用，減少自身抗體及抗DNA抗體的產(chǎn)生［9］，從而減少循環(huán)免疫復(fù)合物濃度及相應(yīng)減少免疫復(fù)合物在腎臟的沉積，延緩腎臟損害。但迄今為止，有關(guān)MMF治療作用的研究?jī)H限于狼瘡腎，并且它對(duì)于腎臟相關(guān)的非腎臟臨床表現(xiàn)的癥狀的研究并不多。本研究發(fā)現(xiàn)，激素和MMF聯(lián)合治療4周后，CD3+CD4+Th細(xì)胞較治療前明顯升高，B細(xì)胞較治療前明顯降低。單用激素治療4周后，僅有B細(xì)胞較治療前明顯降低，說(shuō)明對(duì)于老年SLE患者M(jìn)MF和糖皮質(zhì)激素都可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分布，但聯(lián)合應(yīng)用MMF和激素在調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的效應(yīng)方面優(yōu)于單用激素，為了證明此項(xiàng)研究，還需要大樣本試驗(yàn)。

1 Hochberg M C.Updating the American college of rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，1997;40(9)：1725-1727.

2 Patrick Blanco，Vincent Pitard，Jean-Francois Viallard et al．Increase in activated CD8+T lymphocytes expressing perforin and granzyme B correlates with disease activity in patients with systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，52(1)：201-211.

3 Filaci G，Bacilieri S，F(xiàn)ravega M et al．Impairment of CD8+T suppressor cell function in patients with active systemic lupus erythematosus［J］.J Immunol，2001;166(10)：6452-6457.

4 張傳文.系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)信息，2011;7(9)：3165-3166.

5 周 玲，柴華旗，戴 蘭 et al.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細(xì)胞CD40、TRAF的表達(dá)及其意義［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)，2008;28(3)：441-443.

6 Park Y W，Kee S J，Cho Y N et al．Impaired differentiation and cytotoxicity of natural killer cells insystemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，2009;60：1753-1763.

7 Shibatomi K，Ida H，Yamasaki S et al．A novel role for interleukin-18 in human natural killer cell death：high serum levels and low natural killer cell numbers in patients with systemic autoimmune diseases［J］.Arthritis Rheum，2001;44：884-892.

8 Cortés-Hernández J，Torres-Salido M T，Medrano A S et al．Longterm outcomes-mycophenolate mofetil treatment for lupus nephritis with addition of tacrolimus for resistant cases［J］.Nephrol Dial Transplant，2010;25：3939-3948.

9 Allison A C，Eugi E M.Mycophenolate mofetil arationaly de sigmed immunosuppressive drug［J］.Clin Tram Splant，1993;7：96-112.